重組人干擾素α2b聯(lián)合潔悠神對(duì)宮頸持續(xù)HPV感染患者端粒酶與HPV16/18 E6蛋白表達(dá)的影響

朱麗娟，周樹林，江希萍

（1.江蘇省常州市第一人民醫(yī)院 婦科，江蘇 常州 213003；2.江蘇省人民醫(yī)院 婦科，江蘇 南京 210029）

重組人干擾素α2b聯(lián)合潔悠神對(duì)宮頸持續(xù)HPV感染患者端粒酶與HPV16/18 E6蛋白表達(dá)的影響

朱麗娟1，周樹林2，江希萍1

（1.江蘇省常州市第一人民醫(yī)院 婦科，江蘇 常州 213003；2.江蘇省人民醫(yī)院 婦科，江蘇 南京 210029）

目的 對(duì)重組人干擾素α2b（rhIFN-α2b）聯(lián)合潔悠神治療宮頸持續(xù)HPV感染的臨床效果及其對(duì)端粒酶與HPV16/18 E6蛋白表達(dá)的影響進(jìn)行研究。方法 隨機(jī)選取2015年1月-2016年1月于常州市第一人民醫(yī)院進(jìn)行治療的宮頸持續(xù)人乳頭瘤病毒（HPV）感染的108例患者，按照數(shù)字隨機(jī)表法分為觀察組和對(duì)照組各54例，對(duì)照組使用rhIFN-α2b治療，觀察組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上使用潔悠神治療。分別對(duì)兩組患者的療效、臨床指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并檢測(cè)端粒酶與HPV16/18 E6蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 觀察組治療有效率與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.240，P=0.022）；觀察組患者治愈時(shí)間周、陰道排液時(shí)間以及出血時(shí)間與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.485、4.765、4.365，P=0.001、0.000和0.000），觀察組均短于對(duì)照組；治療后觀察組的HPVDNA負(fù)荷量低于對(duì)照組，并且轉(zhuǎn)陰率與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.546，P=0.000）；治療后兩組患者的端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.746、4.964，均P=0.000），其中觀察組患者端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率均低于對(duì)照組。結(jié)論 聯(lián)合使用rhIFN-α2b和潔悠神治療宮頸持續(xù)HPV感染具有良好的治療效果，可有效降低端粒酶和HPV16/18 E6蛋白陽性率，并可降低患有宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)。

重組人干擾素α2b；宮頸癌；宮頸持續(xù)HPV感染；端粒酶；HPV16；HPV18；HPVE6

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，全世界每年約有20萬人死于宮頸癌，我國每年死于宮頸癌的患者高達(dá)3萬人[1]。研究發(fā)現(xiàn)早期宮頸癌患者前5年的生存率在90%以上，不同期的宮頸癌患者的平均生存率也可達(dá)到70%，宮頸癌的早期篩查可改善其發(fā)病率和病死率，關(guān)鍵是有效減少患病風(fēng)險(xiǎn)、盡早診斷治療，從而阻斷其浸潤發(fā)展過程[2]。而人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要作用，研究發(fā)現(xiàn)14種高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）與90%以上的宮頸病變密切相關(guān)，99%以上的宮頸癌標(biāo)本中可檢測(cè)到HPV感染[3]，因此有效治療HPV持續(xù)感染對(duì)降低宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有著重要作用。目前臨床上尚無治療HPV感染的特效方法，重組人干擾素-α2b（rhIFN-α2b）作為一種強(qiáng)力的廣譜抗病毒藥在臨床治療HPV感染中有著廣泛的應(yīng)用[4]；而潔悠神噴灑于體表后可形成抗菌膜從而有效阻斷HPV對(duì)機(jī)體的感染[5]，聯(lián)合使用2種藥物可有效治療HPV持續(xù)感染，但臨床上對(duì)于2種藥物聯(lián)合使用的研究極為有限。端粒酶與細(xì)胞的老化、凋亡和惡變相關(guān)，HPV16/18 2種高危人乳頭瘤病毒也與宮頸感染和宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，宮頸感染患者的端粒酶與HPV16/18 E6表水平均高于健康患者，并且二者都是宮頸癌的高風(fēng)險(xiǎn)因素[6]。本次研究旨在探討重組人干擾素α2b聯(lián)合潔悠神對(duì)宮頸持續(xù)HPV感染患者端粒酶與HPV16/18 E6蛋白表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年1月-2016年1月于常州市第一人民醫(yī)院進(jìn)行治療的宮頸持續(xù)HPV感染患者共108例，年齡 32～60歲，平均（39.85±2.14）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)為：①經(jīng)檢查符合慢性宮頸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②年齡在25～60歲；③有性生活史；④電子陰道鏡檢查為中度及以上宮頸糜爛；⑤實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測(cè)為HR-HPV感染陽性；⑥患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①非宮頸持續(xù)HPV感染的宮頸炎患者；②宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變患者；③合并高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)性疾病的患者；④合并嚴(yán)重肝腎功能不全的患者；⑤哺乳期或妊娠期婦女。將以上患者按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組各54例，對(duì)照組年齡33～60歲，平均（39.91±2.11）歲，觀察組年齡32～60歲，平均（39.80±2.17）歲，兩組患者的一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 治療方法

對(duì)照組采用rhIFN-α2b陰道泡騰膠囊（上海華新生物高技術(shù)有限公司，國藥準(zhǔn)字S20050075）進(jìn)行治療，使用方法為睡前洗凈外陰后，在陰道后穹隆處填塞，若患者處于經(jīng)期則需在經(jīng)期結(jié)束3 d后開始用藥。觀察組患者在對(duì)照組治療方法基礎(chǔ)上聯(lián)合潔悠神（噴劑，南京神奇科技開發(fā)有限公司，產(chǎn)品編號(hào)：059400324492）進(jìn)行治療，使用噴霧導(dǎo)管噴涂，3次/d，劑量為0.6 ml每1%體表面積，直到治愈。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 臨床療效 根據(jù)《實(shí)用婦產(chǎn)科診斷和治療技術(shù)》[8]中的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，痊愈：患者臨床癥狀消失，經(jīng)電子陰道鏡檢查未發(fā)現(xiàn)宮頸糜爛，宮頸表面光滑；有效：患者臨床癥狀有所緩解，宮頸糜爛面積縮小30%以上；無效：患者臨床癥狀和宮頸糜爛面積無好轉(zhuǎn)甚至加重。

1.3.2 臨床指標(biāo) 分別對(duì)兩組患者治愈時(shí)間、陰道排液時(shí)間和出血時(shí)間進(jìn)行記錄分析。

1.3.3 HPV DNA負(fù)荷量及轉(zhuǎn)陰率 分別在治療前、治療后1和3個(gè)月使用qRT-PCR法檢查HPV DNA負(fù)荷量以及治療后3個(gè)月的轉(zhuǎn)陰率，當(dāng)HPV DNA負(fù)荷量<1.0 pg/ml為陰性。

1.3.4 端粒酶與HPV16/18 E6蛋白表達(dá) 采用熒光原位雜交技術(shù)（FISH試劑盒，金菩嘉科技有限公司）檢測(cè)宮頸組織中hTERC基因的表達(dá)，其方法為：首先選取正常宮頸組織切片20例作為陰性質(zhì)控片，每片挑選200個(gè)無重疊、細(xì)胞核完整且信號(hào)獨(dú)立的細(xì)胞。檢測(cè)時(shí)使用熒光顯微鏡觀察并使用Video Test軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析綠色熒光（CSP3）和紅色熒光（TERC）雜交情況。正常熒光雜交信號(hào)為紅色熒光點(diǎn)和綠色熒光點(diǎn)各2個(gè)，其他均為異常信號(hào)，統(tǒng)計(jì)異常信號(hào)細(xì)胞個(gè)數(shù)，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，閾值=平均值＋3×標(biāo)準(zhǔn)差，<閾值為陽性，本次實(shí)驗(yàn)閾值為7.13%（見圖1）。使用ELISA試劑盒（江蘇科特生物科技有限公司）對(duì)HPV16/18 E6蛋白進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，每份標(biāo)本測(cè)3孔，在450 nm處測(cè)量和樣品孔的光密度（OD）值，OD>1.0為陽性，計(jì)算陽性率（見圖2）。

圖1 正常（陰性）端粒酶（左）和異常（陽性）端粒酶（右）

圖2 正常宮頸細(xì)胞（陰性）HPV16/18 E6蛋白染色（左）和HPV持續(xù)感染宮頸細(xì)胞（陽性）HPV16/18 E6蛋白染色（右）

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用秩和檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效比較

兩組患者的臨床療效比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），觀察組有效率高于對(duì)照組。見表1。

2.2 臨床指標(biāo)比較

兩組患者治愈時(shí)間、陰道排液時(shí)間以及出血時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），觀察組低于對(duì)照組。見表2。

2.3 兩組患者治療前后HPV DNA負(fù)荷量及轉(zhuǎn)陰率比較

兩組患者治療1、3個(gè)月后的HPV DNA負(fù)荷量、治療3個(gè)月后的轉(zhuǎn)陰率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），觀察組HPV DNA負(fù)荷量低于對(duì)照組，轉(zhuǎn)陰率高于觀察組。見表3。

2.4 兩組患者端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率比較

治療后兩組患者的端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率均降低，兩組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中觀察組患者端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率均低于對(duì)照組。見表4。

表1 兩組患者臨床療效比較 （n=54）

表2 兩組患者臨床指標(biāo)比較 （n=54，±s）

表2 兩組患者臨床指標(biāo)比較 （n=54，±s）

組別 治愈時(shí)間/周 陰道排液時(shí)間/d 出血時(shí)間/d對(duì)照組 8.93±2.45 14.58±2.76 16.93±3.88觀察組 7.04±1.68 10.43±1.93 12.47±1.56 t值 4.172 6.749 6.254 P值 0.000 0.000 0.000

表3 兩組患者HPV DNA負(fù)荷量及轉(zhuǎn)陰率比較 （n=54）

表4 兩組患者端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率對(duì)比 [n=54，例（%）]

3 討論

HPV是一種口咽、生殖道以及直腸的病原體，HPV感染是導(dǎo)致宮頸癌的最主要原因。HPV病毒包含200多種亞型，其中40余種與宮頸病變有關(guān)。HPV高危型病毒主要為HPV16、HPV18、HPV31等，HPV16和HPV 18具有最高的感染率[9]。隨著科學(xué)技術(shù)以及分子生物學(xué)的發(fā)展，對(duì)宮頸癌的DNA/RNA以及蛋白的研究已成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)[6]，因此本次研究結(jié)果從臨床指標(biāo)、療效與端粒酶和HPV16/18E6蛋白陽性率兩大方面進(jìn)行討論。

研究表明，使用rhIFN-α2b聯(lián)合潔悠神治療宮頸持續(xù)HPV感染的有效率可達(dá)到100.00%，高于對(duì)照組，患者治愈時(shí)間，陰道排液時(shí)間以及出血時(shí)間均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說明聯(lián)合使用rhIFN-α2b和潔悠神可更有效殺滅HPV；并且在治療后1和3個(gè)月后觀察組HPV DNA負(fù)荷量均低于對(duì)照組，觀察組患者治療3個(gè)月后的轉(zhuǎn)陰率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說明聯(lián)合使用rhIFN-α2b和潔悠神對(duì)宮頸持續(xù)HPV感染患者臨床療效優(yōu)于單獨(dú)使用 rhIFN-α2b，這可能與rhIFN-α2b調(diào)節(jié)免疫作用及潔悠神的持續(xù)抗菌作用有關(guān)。研究表明人類的自身免疫功能可快速消除90%以上的HPV感染，并且當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時(shí)HPV的感染率升高并且與HPV持續(xù)感染密切相關(guān)，因此在使用抗病毒藥物進(jìn)行治療的同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力具有重大意義[10]。rhIFN-α2b作為一種強(qiáng)力的廣譜抗病毒藥物，可直接作用于感染部位部位細(xì)胞膜面的干擾素受體，促進(jìn)細(xì)胞抗病毒的分泌，此外rhIFN-α2b還可以增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的吞噬能力，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[11]。而潔悠神可以在皮膚黏膜表面形成一層致密的、帶有正電荷的膜，此層膜不但可以在一定程度上阻斷病原體的入侵，還可以吸附通常為負(fù)電荷的病原微生物，使其代謝酶等失去作用導(dǎo)致病原體死亡[12]，配合rhIFN-α2b具有強(qiáng)力持久的殺菌作用。

本次研究發(fā)現(xiàn)治療后兩組患者的端粒酶陽性率和HPV16/18 E6蛋白陽性率水平降低，并且發(fā)現(xiàn)觀察組2項(xiàng)指標(biāo)陽性率均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。端粒酶與宮頸癌有著密切關(guān)系，研究表明宮頸癌細(xì)胞的端粒酶陽性率高于正常宮頸細(xì)胞或?qū)m頸炎癥細(xì)胞，宮頸炎至宮頸癌的端粒酶基因陽性率與病情的嚴(yán)重程度正相關(guān)，并且由此推測(cè)端粒酶基因表達(dá)異常是宮頸癌發(fā)生的早期事件[13]。HPV16和HPV18作為高危HPV病毒，其感染與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，其中E6蛋白還可以調(diào)控細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)Ⅲ期的宮頸上皮內(nèi)瘤變（Cervical Intraepithelial Neoplasia，CIN）中 HPV16/18 E6 蛋白的陽性率高于正常宮頸組織和Ⅰ/Ⅱ期的CIN，這說明HPV16/18 E6蛋白與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系[14-15]。而本次研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合使用rhIFN-α2b和潔悠神可有效降低端粒酶和HPV16/18 E6的陽性率，推測(cè)此種治療方法不但具有良好的臨床效果，還可有效降低宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，其具體結(jié)果還需要更為大量的臨床實(shí)驗(yàn)和長時(shí)間的研究。

綜上所述，使用重組人干擾素α2b聯(lián)合潔悠神對(duì)宮頸持續(xù)HPV感染患者具有確切臨床療效，并且可降低端粒酶與HPV16/18 E6蛋白表達(dá)水平，可能具有降低宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的作用。

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（張蕾 編輯）

Effect of rhIFN-α2b combined with Jieyoushen on telomerase and HPV16/18 E6 protein expression in patients with cervical HPV infection

Li-juan Zhu1,Shu-lin Zhou2,Xi-ping Jiang1
(1.Department of Gynaecology,the First People's Hospital of Changzhou,Changzhou,Jiangsu 213003,China;2.Department of Gynecology,Jiangsu Province Hospital,Nanjing,Jiangsu 210029,China)

Objective To study the clinical effect of recombinant human interferon α2b(rhIFN-α2b)combined with Jieyoushen on cervical HPV infection,telomerase and expression of HPV16/18 E6 protein.Methods A total of 108 patients with cervical HPV infection who were treated in the First People's Hospital of Changzhou from January 2015 to January 2016 were selected.They were divided into observation group(54 cases)and control group(54 cases)according to the random number table method.The patients of the control group were treated with rhIFN-α2b,and the patients of the observation group were treated with rhIFN-α2b plus Jieyoushen.The efficacy and clinical indexes of the two groups were measured,and telomerase and HPV16/18 E6 protein expression were detected.Results The effective rate of the observation group was significantly higher than that of the control group(100.00%vs.90.74%,P<0.05).The cure time,vaginal excretion time and bleeding time [(7.04±1.68)w,(10.43±1.93)d and (12.47±1.56)d respectively]of the observation group were significantly shorter than those of the control group[(8.93±2.45)w,(14.58±2.76)d and(16.93±3.88)d;P<0.05].After treatment,the load of HPV DNA in the observation group was significantly lower than that in the control group,and the conversion rate was significantly higher than that in the control group (94.44%vs.74.07%,P<0.05).After treatment,the positive rates of telomerase and HPV16/18 E6 protein were significantly decreased in both groups,the positive rates of telomerase and HPV16/18 E6 protein in the observation group were significantly lower than those in the control group(1.85%vs.11.11%,3.70%vs.14.81%respectively;P<0.05).Conclusions Combined use of rhIFN-α2b and Jieyoushen has good therapeutic effect in the treatment of persistent HPV infection of cervix,can effectively reduce the positive rates of telomerase and HPV16/18 E6 protein,and reduce the risk of cervical cancer.

recombinant human interferon α2b;cervical cancer;cervical persistent HPV infection;telomerase;HPV16;HPV18;HPV E6

R737.33

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.25.005

1005-8982（2017）25-0023-05

2017-01-20