崗梅莖的化學(xué)成分研究

杜冰曌　張和新歌　楊鑫瑤　張瑞飛　尹旭　邢建永　韓正洲　高增平　柴興云

[摘要]綜合運用多種色譜技術(shù)從我國嶺南特色藥材崗梅莖的水提物中分離得到了13個化學(xué)成分，通過波譜技術(shù)將它們分別鑒定為柳葉繡線菊新木脂醇（1）， rel（7R，8S）3，3′，5trimethoxy4′，7epoxy8，5′neolignan4，9，9′triol 9βDglucopyranoside（2），（+）cycloolivil（3），（+）syringaresinol4′OβDmonoglucoside（4）， 鵝掌楸苦素（5）， 咖啡酸（6）， 3，4二羥基5甲氧基苯甲醛（7）， 1，2，4苯三酚（8）， 3，4，5trimethoxyphenyl1OβDapiofuranosyl（1″→6′）glucopyranoside（9）， 秦皮乙素（10）， 隱綠原酸乙酯（11）， 綠原酸乙酯（12），和rel5（3S，8Sdihydroxy1R，5Sdimethyl7oxa6oxobicyclo[3，2，1]oct8yl）3methyl2Z，4Epentadienoic acid（13）?；衔?～5為木脂素類化合物、6～12為其他酚酸類化合物、13為倍半萜內(nèi)酯類化合物，其中7， 8， 11， 13為首次從冬青屬植物中分離得到，1～3， 9， 10， 12為首次從崗梅中分離得到。抗炎活性篩選結(jié)果顯示，化合物1和9 對RAW2647細胞中NO的生成顯示中等抑制作用，化合物10具有微弱的抑制效果，其IC50分別為357， 506， 987 μmol·L-1。

[關(guān)鍵詞]崗梅； 冬青屬； 冬青科； 化學(xué)成分； 抗炎活性

[Abstract]Phytochemical investigation on the stems of Ilex asprella by using various chromatographic techniques led to the isolation of 13 compounds By spectroscopic analyses and comparisons the spectral data with those in literatures， these compounds were identified as salicifoneoliganol（1）， rel（7R，8S）3，3′，5trimethoxy4′，7epoxy8，5′neolignan4，9，9′triol 9βDglucopyranoside（2），（+）cycloolivil（3），（+）syringaresinol4′OβDmonoglucoside（4）， liriodendrin（5）， caffeic acid （6）， 3，4dihydroxy5methoxybenzaldehyde（7）， benzene1，2，4triol（8）， 3，4，5trimethoxyphenyl1OβDapiofuranosyl（1″→6′）glucopyranoside（9）， aeculetin（10）， cryptochlorogenic acid ethyl ester（11）， chlorogenic acid ethyl ester（12）， and rel5（3S，8Sdihydroxy1R，5Sdimethyl7oxa6oxobicyclo [3，2，1]oct8yl）3methyl2Z，4Epentadienoic acid（13） Among them， compounds 7， 8， 11， and 13 were isolated from genus Ilex for the first time， and 13， 9， 10， and 12 were isolated from this speciesfor the first time The antiinflammatory assay results of these compounds showed that compounds 1 and 9 showed moderate inhibitory effect against NO production in RAW 267 4 cells with IC50 values of 357 and 506 μmol·L-1， in vitro respectively， whereas compound 10 showed weak inhibition（IC50 value 987 μmol·L-1）.

[Key words]Ilex asprella； Ilex； Aquifoliaceae； chemical constituents； antiinflammatory activity

崗梅為冬青屬植物梅葉冬青Ilex asprella （Hook et Arn）Champ ex Benth的干燥根及莖，其性涼、味苦，歸肺、脾、胃經(jīng)，具有清熱解毒、生津止渴、利咽消腫、散瘀止痛之功效，臨床上用于治療風(fēng)熱感冒、急慢性咽喉炎、肺熱咳嗽、咽喉腫痛、跌打瘀癰等病癥[1]。崗梅既是中成藥感冒靈顆粒、外感顆粒、青梅感冒沖劑等清熱解毒類的重要組成藥物，也是多種醫(yī)院制劑和涼茶飲品的原料之一，市場消耗量大。崗梅在傳統(tǒng)上多以根入藥，然而因植株生長緩慢，野生資源已不能滿足市場所需，廣東和湖南兩省將崗梅莖一并收載于《廣東省中藥材標準》（2004年版）和《湖南省中藥材標準》（2009年版）中以擴大入藥資源，同時當(dāng)?shù)卣⑵髽I(yè)等也正在加大種植栽培力度，以緩解當(dāng)前的資源壓力[2]。

前人對崗梅的根和葉2部位進行了化學(xué)成分研究，報道了從中分離得到的至少104個化學(xué)成分，以三萜及其皂苷為主，還有綠原酸類、黃酮類、苯丙素、木脂素等酚酸類成分，及少量甾體等。藥理活性研究包括抗炎、抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等。作為崗梅質(zhì)量標準體系研究的一部分，本課題首次開展崗梅莖的化學(xué)研究，綜合運用多種色譜和波譜方法，從崗梅莖的水提物中分離鑒定了13個化合物，并篩選了體外抗炎活性。本研究為充分利用崗梅莖的資源和闡明崗梅的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了一定的參考。endprint

1材料

11藥材藥材于2016年9月采收于廣東省梅州市平原縣仁居鎮(zhèn)華潤三九青草湖種植基地，經(jīng)韓正洲教授級高級工程師鑒定為梅葉冬青I asprella的莖，藥材標本（2016GM901）存放于北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代研究中心。

12細胞小鼠巨噬細胞RAW 2647細胞系購自上海細胞所。

13儀器和試劑Varian Inova500型核磁共振儀；LCMSITTOF系統(tǒng)（Shimadzu，日本）；制備型高效液相色譜儀（Waters）；半制備色譜柱ReprosilPur Basic C18 （10 mm × 250 mm，5 μm）Sephadex LH20（Pharmacia）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Buchi，瑞士）；ODS（40～63 μm，Merck）；HP20大孔樹脂（DIAION，日本）；柱色譜硅膠（200～300目）及薄層色譜硅膠板GF254（青島海洋化工廠產(chǎn)品）；提取和分離中所用化學(xué)試劑均為分析純（北京化工廠）；SANYO MCO18AIC細胞培養(yǎng)箱；Motic AE2000倒置熒光顯微鏡；ESCO OptiMair超凈工作臺；瑞士TECAN M1000型多功能酶標儀；DMEM培養(yǎng)基（Hyclone，美國）；胎牛血清（Gibco，美國）；NO化學(xué)法試劑盒（南京建成生物公司）；陽性對照為姜黃素和吲哚美辛（Sigma，美國）。

2提取與分離

崗梅的干燥主莖19 kg，粉碎后以10倍量純水加熱回流提取2次，每次2 h，合并提取液，并將提取液減壓濃縮至粘膏狀，最終得到提取物浸膏（IA）約40 kg。IA經(jīng)HP20大孔吸附樹脂柱色譜分離，乙醇水梯度洗脫，得到水洗脫部位（24 kg）和95%乙醇洗脫部位（16 kg）。

95%乙醇洗脫部位（15 kg）經(jīng)硅膠柱色譜分離，經(jīng)二氯甲烷甲醇（10∶1～0∶1）梯度洗脫，相似洗脫部分合并后，共得到12份洗脫段（Ⅰ～Ⅻ）。Ⅲ（約80 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，乙酸乙酯甲醇甲酸（30∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脫，合并得12個流分（Ⅲ1～Ⅲ12）和化合物4 （10 g）。Ⅲ2（20 g）再經(jīng)Sephadex LH20（MeOH）分離，得到8個流分（Ⅲ2A～2H）。Ⅲ2D（62 g）再經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚乙酸乙酯甲酸（3∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脫，得到Ⅲ2D1～2D9。Ⅲ2D6（250 mg）經(jīng)半制備液相（MeOHH2O，30∶70）純化得到化合物1 （27 mg）和13 （37 mg）。Ⅲ2D7（220 mg）經(jīng)半制備液相（MeOHH2O，40∶60）純化得到化合物11（38 mg）和12（59 mg）。Ⅲ2D8（410 mg）經(jīng)半制備液相（MeOHH2O，40∶60）純化得到化合物3（50 mg）。Ⅲ2E（35 g）再經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚乙酸乙酯甲酸（3∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脫，得到（Ⅲ2E1～2E10）。Ⅲ2E4（150 mg）經(jīng)半制備液相（MeOHH2O，30∶70）純化得到化合物6 （610 mg），7（50 mg），8 （42 mg）和10 （65 mg）。Ⅳ（65 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，乙酸乙酯甲醇甲酸（10∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脫，相似組分合并，得8個流分（Ⅳ1～Ⅳ8）。Ⅳ3 （20 g）經(jīng)Sephadex LH20多次純化和ODS柱色譜（MeOHH2O，80∶20）分離得到2（75 mg）和9（810 mg）。Ⅵ（400 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，乙酸乙酯甲醇甲酸（10∶1∶001～0∶1∶001）梯度洗脫，得到化合物5 （20 g）。

3結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末； ESIMS m/z 399 [M+Na]+； 1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：671（2H，s，H2，6），661（1H，br s，H6′），658（1H，br s，H2′），551（1H，d，J=60 Hz，H7），385（1H，dd，J=115，55 Hz，H9a），375（1H，dd，J=110，35 Hz，H9b），356（2H，t，J=65 Hz，H9′），345（1H，m，H8），256（2H，t，H7′），179（2H，m，H8′），382（6H，s，3，5OCH3）； 13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：1493（C3，5），1464（C4′），1418（C3），1368（C1′），1361（C4），1344（C1），1297（C5′），1170（C6′），1167（C2′），1041（C2，6），888（C7），651（C9），623（C9′），568（C3，5OCH3），559（C8），357（C8′），327（C7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[3]對比，鑒定化合物1為柳葉繡線菊新木脂醇。

化合物2白色粉末； ESIMS m/z 575 [M+Na]+； 1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：674（1H，s，H6′），668（3H，s，H2，2′，6），555（1H，d，J=60 Hz，H7），433（1H，d，J=80 Hz，Hglc1），406（1H，t，J=85 Hz，H9a），383～388（2H，m，H9b，Hglc6a），360～367（2H，m，H8，Hglc6b），352（2H，t，J=60 Hz，H9′），333～337（1H，m，Hglc3），325～328（2H，m，Hglc4，5），319～323（1H，m，Hglc2），257（2H，t，J=80 Hz，H7′），177（2H，t，J=65 Hz，H8′），376（6H，s，H3，5OCH3），381（3H，s，H3′OCH3）； 13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：1492（C3，5），1474（C4′），1451（C3′），1370（C1′），1362（C4），1338（C1），1295（C5′），1181（C6′），1141（C2′），1043（C2，6），1041（Cglc1），894（C7），781（Cglc3），779（Cglc5），751（Cglc2），723（C9），716（Cglc4），627（Cglc6），622（C9′），568（C3，5OCH3），568（C3′OCH3），529（C8），357（C8′），328（C7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]對比，鑒定化合物2為rel（7R，8S）3，3′，5trimethoxy4′，7epoxy8，5′neolignan4，9，9′triol 9βDglucopyranoside）。endprint