淡紫擬青霉致角膜潰瘍1例并文獻復(fù)習(xí)

王露霞，彭亮紅，李建勛，李雪梅，黃曉燕

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院a.檢驗科，b.眼科，c.皮膚科，廣州 510010)

淡紫擬青霉致角膜潰瘍1例并文獻復(fù)習(xí)

王露霞a，彭亮紅b，李建勛a，李雪梅c，黃曉燕a

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院a.檢驗科，b.眼科，c.皮膚科，廣州 510010)

淡紫擬青霉；真菌性角膜炎；真菌感染

淡紫擬青霉(Paecilomyceslilacinus)是土壤和植物中普遍存在的腐生菌，是實驗室及醫(yī)療器械常見的污染菌之一,對人類是一種機會致病真菌。其感染常為醫(yī)源性感染或外傷所致，尤其好發(fā)于免疫缺陷宿主。本文報道1例由淡紫擬青霉引起的角膜潰瘍。

1 病歷摘要

患者，女，66歲，于4年前在農(nóng)田作業(yè)時用衣物擦拭右眼后即出現(xiàn)眼紅、眼痛、畏光、流淚，伴視力下降，未予特殊處理。上述癥狀出現(xiàn)2周后在外院就診，診斷為“感染性角膜炎”，予局部抗真菌、抗細(xì)菌治療(具體不詳)，刮取角膜分泌物涂片+培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌和真菌?；颊咦杂X癥狀無好轉(zhuǎn)，為求進一步診治于2016年3月來我院就診，門診以“右眼角膜炎”收入眼科?；颊咧髟V有高血壓病史10年，否認(rèn)糖尿病史、肝炎病史、病毒感染史，無免疫缺陷，否認(rèn)外傷史。?？茩z查：右眼視力為0.2，眼壓18.3；左眼視力為0.7，眼壓12.8。右眼瞼紅腫(+)，結(jié)膜充血(++)，角膜混濁，表面呈潰瘍面，有膿性分泌物。角膜病灶呈不同程度的白色苔垢樣物覆蓋，見圖1。根據(jù)角膜刮片、培養(yǎng)和分子生物學(xué)結(jié)果,最終診斷為淡紫擬青霉菌引起的真菌性角膜潰瘍。用克霉唑眼膏、那他霉素眼液、兩性霉素B眼液滴右眼，營養(yǎng)角膜上皮藥物對癥治療，治療3周后患者癥狀好轉(zhuǎn)，右眼視力恢復(fù)至0.5，結(jié)膜輕度充血，潰瘍面明顯縮小。刮取角膜分泌物鏡檢、真菌培養(yǎng)均陰性，予出院。出院后扔按上述方案治療3個月，以鞏固治療防止復(fù)發(fā),并返院復(fù)查，至今無復(fù)發(fā)。

圖1 角膜病灶呈不同程度的白色苔垢樣物覆蓋

2 微生物檢驗

2.1角膜刮片鏡檢 角膜潰瘍組織刮片革蘭染色鏡檢可見分隔菌絲，見圖2。

2.2真菌培養(yǎng)及鏡下特征 角膜潰瘍組織接種沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)和馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)置于27 ℃培養(yǎng)。該菌在27 ℃時SDA、PDA上生長迅速，第3天可見真菌菌落，菌落初為白色羊毛狀，逐漸轉(zhuǎn)為淡灰紫色，隨著時間延長菌落變?yōu)榘祷易霞t色，菌落顏色呈同心圓分布，培養(yǎng)5 d左右菌落背面呈黃色，10 d后背面為粉紅色，見圖3、4、5。傳代培養(yǎng)置37 ℃時菌落生長緩慢，40 ℃時生長完全受抑制。小培養(yǎng)鏡下形態(tài)：無色透明菌絲，帚狀分生孢子梗，分生孢子梗直立，長約40～600 μm，寬3.0～4.0 μm，壁粗糙，黃色，梗基緊密成簇，上有2～4輪瓶梗，其頂端帚狀枝一般單輪生，瓶?；颗虼螅敹思饧?xì)，形成細(xì)長的產(chǎn)分生孢子管狀小體(約1 μm)；分生孢子橢圓形或近球形，壁光滑或粗糙，長約2.5～3 μm，寬2.0～2.2 μm， 分生孢子鏈呈柱狀或分散柱狀。見圖6。

圖2 組織刮片革蘭染色鏡檢見分隔菌絲(×1 000)

圖3 SDA上生長4 d菌落顏色及形態(tài)

圖4 SDA生長10 d左右菌落顏色

圖5 SDA生長5 d左右菌落背面顏色

圖6 小培養(yǎng)鏡下形態(tài)(乳酸酚棉藍(lán)染色，×1 000)

2.3DNA測序 經(jīng)北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科對該菌株進行rRNA基因ITS擴增并測序，測序結(jié)果在GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫中作BLAST比對，與基因庫中編號FJ752603.1的淡紫擬青霉株的同源性為99%，與其他多株淡紫擬青霉的同源性也為99%，證實該菌株為淡紫擬青霉。

2.4體外藥敏試驗 用瑞典倍肯公司AB Biodisc生產(chǎn)的E-test試劑條對該菌株進行體外藥敏試驗。取5 d培養(yǎng)物，用0.1%吐溫-20的生理鹽水1 mL洗脫培養(yǎng)物，制成0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝痪鷳乙?，涂布于含?.5% RPMI 1640瓊脂平板，干燥15 min后放試劑條，27 ℃培養(yǎng)48 h判讀最低抑菌濃度(MIC)結(jié)果：伊曲康唑MIC為32 μg/mL、伏立康唑0.19 μg/mL、兩性霉素B 0.75 μg/mL、氟胞嘧啶32 μg/mL、氟康唑256 μg/mL。

3 討論

淡紫擬青霉屬半知菌綱、絲孢菌目、絲孢菌科、擬青霉屬[1-2]。淡紫擬青霉對營養(yǎng)要求條件不高，可在多種培養(yǎng)基中生長，最適宜的培養(yǎng)基為PDA、SDA，培養(yǎng)時間以10 d左右為宜，溫度和pH是影響淡紫擬青霉生長發(fā)育的重要因素。文獻報道，淡紫擬青霉生長溫度范圍很寬，從8 ℃到38 ℃都可以生長，在15～30 ℃生長良好，最佳生長和產(chǎn)孢溫度為25～30 ℃，6 ℃和40 ℃時停止生長，35 ℃時停止產(chǎn)孢；pH在2～12均能生長，產(chǎn)孢最佳pH為4～6[3]。

淡紫擬青霉引起的感染包括角膜炎、皮下及皮下組織感染、瓣膜修復(fù)導(dǎo)致心內(nèi)膜炎、鼻竇炎、甲真菌病、AIDS患者感染[4-8]。淡紫擬青霉眼睛感染表現(xiàn)為角膜炎、內(nèi)眼炎、角膜潰瘍和眶肉芽腫等，誘發(fā)因素包括外傷史、眼部手術(shù)后及使用過期的隱形眼鏡和在臨床表現(xiàn)出角膜炎之前使用皮質(zhì)類固醇[4]。本例患者自述無外傷史，可能與在農(nóng)田作業(yè)時由淡紫擬青霉污染的衣物來擦拭右眼而引發(fā)角膜潰瘍有關(guān)，其臨床表現(xiàn)起病緩慢，亞急性經(jīng)過，刺激癥狀較輕，伴視力障礙。據(jù)文獻報道，兩性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑?qū)Φ蠑M青霉的體外抗菌活性較低[9-11]，而伏立康唑具有較高的抗菌活性[4,12-13]。本例真菌體外藥敏試驗結(jié)果與文獻相符。該患者未確診淡紫擬青霉菌感染及無藥敏試驗結(jié)果時，臨床先采用眼內(nèi)通透性較好、刺激性小和抗真菌譜廣的氟康唑滴眼液滴右眼，藥敏結(jié)果提示該藥耐藥即停藥。選擇敏感有效的抗真菌藥物早期治療對患者的預(yù)后至關(guān)重要。因此，實驗室的分離培養(yǎng)，準(zhǔn)確鑒定及體外藥敏試驗對臨床的治療具有重要的指導(dǎo)意義。

致謝：感謝北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科細(xì)菌室的老師對淡紫擬青霉菌株分子生物學(xué)鑒定給予幫助！

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2017-08-04)

(本文編輯：劉群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.10.19

王露霞，1960年生，女，副主任技師，大學(xué)本科，主要從事臨床微生物檢驗工作。

R446.5

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