清咽喉口服液中主要成分的鑒別實驗研究

王慶學(xué)+韓琳

[摘要]目的 建立清咽喉口服液中黃芩、連翹和生地黃中有效成分的鑒別方法。方法 采用薄層色譜法對清咽喉口服液中黃芩、連翹的有效成分進行鑒別，采用高效液相色譜法對生地黃的有效成分進行鑒別。結(jié)果 在薄層色譜中，黃芩中的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素及連翹中的連翹苷的斑點清晰，分離度好。生地黃中毛蕊花糖苷和梓醇通過高效液相色譜法在不同波長處被檢出。結(jié)論 所建立的方法可用于清咽喉口服液中有效成分的鑒別，并納入清咽喉口服液的質(zhì)量標準正文中。

[關(guān)鍵詞]清咽喉口服液；薄層色譜法；高效液相色譜法；鑒別

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）09（c）-0008-04

[Abstract]Objective To establish a identifition method for the major components of Forsythiae Fructus，Scutellariae Radix and Rehmanniae Radix in Qingyanhou Oral Solution.Methods The major components of Forsythiae Fructus and Scutellariae Radix in Qingyanhou Oral Solution were determined by TLC.The major components of Rehmanniae Radix in Qingyanhou Oral Solution were determined by HPLC.Results The results showed that Baicalin，Baicalein，Wogonin and Forsythia Glycosides in Forsythiae Fructus and Scutellariae Radix were clearly detected and were well separated by TLC.Acteoside Kusaginin and Catalpa Alcohol in Rehmanniae Radix were detected at different wavelengths by HPLC.Conclusion The method can be readily utilized as a identifition method for the major components in Qingyanhou Oral Solution.It can be a quality standard of Qingyanhou Oral Solution.

[Key words]Qingyanhou Oral Solution；TLC；HPLC；Identifition

清咽喉口服液中含有多種成分，如生地黃、連翹、黃芩、麥冬、玄參等，該中藥口服液主要用于治療小兒急慢性咽喉炎、扁桃體炎、咽喉炎等。其中起到主要治療作用的是黃芩、連翹及生地黃。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床治療效果，本研究通過查閱2015年版中國藥典及相關(guān)文獻[1-16]，研究了黃芩中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素，連翹中連翹苷的薄層鑒別方法，生地黃中毛蕊花糖苷和梓醇的高效液相色譜鑒別方法，從而建立清咽喉口服液新的質(zhì)量標準，現(xiàn)報道如下。

1儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀（安捷倫1260型DAD檢測器）；Dimonsil C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm）；電子分析天平（Mettler Toledo AB265-S）；ZF7B三用紫外分析儀（上海康華儀器制造廠），超聲清洗儀（SB-5200D 寧波新芝生物技術(shù)股份有限公司）。清咽喉口服液（批號分別為：20160224、20160526、20160707）。黃芩對照藥材（120955-201309）、連翹對照藥材（120908-201216），均購自中國食品藥品檢定研究院。毛蕊花糖苷、梓醇、黃芩苷、連翹苷、黃芩素、漢黃芩素對照品（批號分別為：11530-201310、110808-201210、110715-201318、110821-201213、111595-201308、111514-201308，購自中國食品藥品檢定研究院）；硅膠G薄層板預(yù)制板、GF254預(yù)制板、硅膠H預(yù)制板（批號分別為20140506、20140506、20140408，購自青島海洋化工廠分廠）。高效液相色譜儀所用試劑均為色譜純，其它實驗試劑均為分析純，水為純化水。

2方法與結(jié)果

2.1黃芩

2.1.1供試品溶液的制備 取本品5 ml，加 5 ml甲醇使溶解，超聲5 min，離心10 min，取上清液蒸干，加5 ml水使溶解，分別用5 ml水飽和正丁醇提取兩次，將兩次提取液合并蒸干，殘渣加1 ml甲醇使之溶解，作為供試品溶液。

2.1.2對照藥材溶液的制備 另取1 g黃芩對照藥材，加乙酸乙酯-甲醇（3：1）混合溶液30 ml，加熱回流30 min后放冷并過濾，將濾液蒸干，殘渣加2 ml甲醇使之溶解，取上清液作為對照藥材溶液。

2.1.3對照品溶液的制備 再取適量的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品加入容量瓶中，分別加入適量甲醇，制成每1 ml含1 mg黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品的對照品溶液。

2.1.4陰性對照溶液的制備 除不加入黃芩外，其余按本制劑處方，采用相同的制備工藝，制得缺黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的空白樣品，取該空白樣品，按“2.1.1”項下方法制備陰性對照溶液。

2.1.5測定方法 按照2015年版中國藥典（四部）通則0502的薄層色譜法，各吸取10 μl的供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液、5 μl的對照藥材溶液，分別點于同一薄層板上（硅膠G板、硅膠H板、GF254板及中性氧化鋁板），以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10：3：1：2）為展開劑，預(yù)飽和30 min后放入薄層板展開，樣品點跑到薄層板一半以上時將薄層板取出，晾干，置365 nm的紫外燈光下檢視結(jié)果。endprint

2.1.6測定結(jié)果 與對照藥材和對照品的色譜斑點比較，在相應(yīng)的位置上，供試品色譜中有5個斑點相同；陰性對照溶液無此斑點，中性氧化鋁板在同等條件下無法達到分離效果（圖1）。

2.2連翹

2.2.1供試品溶液的制備 取本品5 ml，加 5 ml甲醇使溶解，超聲5 min，離心10 min，取上清液蒸干，加5 ml水使溶解，分別用5 ml水飽和正丁醇提取兩次，將兩次提取液合并蒸干，殘渣加1 ml甲醇使之溶解，作為供試品溶液。

2.2.2對照藥材溶液的制備 另取1 g連翹對照藥材，加甲醇20 ml并加熱回流20 min后，離心10 min，取上清液，濃縮至5 ml作為對照藥材溶液。

2.2.3對照品溶液的制備 再取適量連翹苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg連翹苷對照品的對照品溶液。

2.2.4陰性對照溶液的制備 除不加入連翹外，其余按本制劑處方，并采用相同的制備工藝，制得缺連翹苷的空白樣品，取該空白樣品，按“2.1.1”項下方法制備陰性對照溶液。

2.2.5測定方法 按照2015年版中國藥典（四部）通則0502的薄層色譜法，各吸取15 μl的供試品溶液、對照品溶液、對照藥材溶液及陰性對照溶液，分別點于同一薄層板上（硅膠G板、硅膠H板、GF254板及中性氧化鋁板），以三氯甲烷-甲醇（8：1）為展開劑并放入薄層板展開，樣品點跑到薄層板一半以上時將薄層板取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇試液，105℃加熱至斑點清晰，置365 nm的紫外燈光下檢視結(jié)果。

2.2.6測定結(jié)果 與對照藥材和對照品的色譜斑點比較，在相應(yīng)位置上，供試品有相同斑點；陰性對照溶液無此斑點，中性氧化鋁板在同等條件下無法達到分離效果（圖2）。

2.3生地黃中毛蕊花糖苷

2.3.1供試品溶液的制備 精密量取清咽喉口服液1 ml置10 ml容量瓶中，分別加各流動相稀釋至刻度，搖勻，離心取上清液，即得供試品溶液。

2.3.2對照品溶液的制備 精密稱定適量毛蕊花糖苷對照品，加入適量甲醇制成每1 ml含1 mg毛蕊花糖苷對照品的對照品溶液。

2.3.3陰性對照溶液的制備 除不加入生地黃外，其余按本制劑處方，并采用相同的制備工藝，制得缺毛蕊花糖苷的空白樣品，取該空白樣品，按“2.1.1”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3.4色譜條件 以乙腈-0.1%磷酸水（16：84）為流動相；流速為1.0 ml/min；檢測波長為334 nm；柱溫為30℃。

2.3.5測定法 分別精密吸取20 μl的對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，注入液相色譜儀中測定，即得。

2.3.6測定結(jié)果 按照“2.3.4”項下的色譜條件，取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液分別進樣測定。結(jié)果表明，供試品溶液中毛蕊花糖苷達到基線分離，與毛蕊花糖苷對照品溶液在相同保留時間處的色譜峰重疊，陰性對照溶液在同一保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，不干擾測定，理論板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計算應(yīng)符合藥典規(guī)定（圖3）。

2.4生地黃中梓醇

2.4.1供試品溶液的制備 精密量取清咽喉口服液1 ml置10 ml容量瓶中，分別加各流動相稀釋至刻度，搖勻，離心取上清液，即得供試品溶液。

2.4.2對照品溶液的制備 精密稱定適量梓醇對照品，加入甲醇制成每1 ml含1 mg的梓醇對照品的對照品溶液。

2.4.3陰性對照溶液的制備 按本制劑處方比例及制備工藝，按“2.3.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.4.4色譜條件 以乙腈-0.1%磷酸水（3：97）為流動相；流速為1.0 ml/min；檢測波長為210 nm；柱溫為30℃。

2.4.5測定法 分別精密吸取20 μl對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，注入液相色譜儀中測定，即得。

2.4.6測定結(jié)果 按照“2.3.4”項下的色譜條件，取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液分別進樣測定。結(jié)果表明，供試品中梓醇達到基線分離，理論板數(shù)按梓醇峰計算均應(yīng)不低于5000，供試品溶液與梓醇對照品溶液在相同的保留時間處的色譜峰重疊，陰性對照溶液在同一保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，不干擾測定（圖4）。

3討論

清咽喉口服液是我院中醫(yī)科主任劉和義、周偉留下的經(jīng)驗處方，多年來作為兒童醫(yī)院的院內(nèi)制劑，并申請了江蘇省醫(yī)院制劑的批準文號，在治療小兒咳嗽方面療效顯著，作為中藥制劑，減少了化學(xué)藥品的許多毒副作用，而且由于改善了制備工藝，與成人中藥口服液相比，口感更好，得到家長及臨床醫(yī)師的一致好評。

隨著社會的發(fā)展，人民群眾更加關(guān)注用藥安全，國家也相應(yīng)出臺了相關(guān)政策及法令，要求進一步加強醫(yī)院制劑的管理，提高醫(yī)院制劑的質(zhì)量標準。清咽喉口服液的原質(zhì)量標準中僅對制劑中的生物堿等成分進行了粗略鑒別，不能達到國家及江蘇省食品藥品監(jiān)督管理局提出的相應(yīng)標準，因此本研究對清咽喉口服液中各種有效成分進行鑒別，并在后續(xù)實驗中進一步研究了各種有效成分的含量檢測，從而制定新的、更加嚴謹有效的質(zhì)量標準。

由于清咽喉口服液為含糖制劑，進行薄層及高效液相色譜法鑒別時，樣品的處理方法非常關(guān)鍵，否則會影響成分在薄層板上的分離，使遷移值（Rf）達不到要求，同時目標成分與雜質(zhì)也不能很好地在色譜柱上分離。本實驗的樣品處理方法簡單，試劑毒性相對較小，各成分分離效果良好。

本實驗采用了對照藥材及各主要成分的對照品作為陽性對照，詳細研究了清咽喉口服液中的主要治療成分，參照中國藥典，制劑薄層鑒別時僅需要采用對照藥材作為陽性對照?？紤]到制劑的生產(chǎn)成本，我們僅將對照藥材納入清咽喉口服液的鑒別實驗中。

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