Mcl-1與高爾基體磷酸化蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達及與其臨床病理特征的關系

徐偉莉 牛保華

Mcl-1與高爾基體磷酸化蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達及與其臨床病理特征的關系

徐偉莉 牛保華

目的探究髓細胞白血病-1(Mcl-1)與高爾基體磷酸化蛋白(Golph3)在結(jié)腸癌組織中的表達水平及與其臨床病理特征的關系。方法應用免疫組化方法，檢測60例結(jié)腸癌組織中Mcl-1、Golph3表達水平，并與其癌旁正常組織中的表達水平進行比較。結(jié)果Golph3、Mcl-1在正常組織及結(jié)腸癌組織中均有表達，然而在結(jié)腸癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)；Mcl-1表達水平與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關性(P>0.05)，與腫瘤浸潤深度、臨床分期密切相關，浸潤程度大，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期結(jié)腸癌組織中Mcl-1陽性表達率顯著較高(P<0.05)；Golph3水平與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關，浸潤程度大，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織中Golph3陽性表達率明顯較高(P<0.05)。結(jié)論Mcl-1、Golph3參與結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，與正常組織相比其表達量顯著升高，且與腫瘤遠端轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期等病理參數(shù)密切相關。

結(jié)腸癌；Mcl-1；Golph3；免疫組化；臨床病理

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1420～1422)

結(jié)腸癌是好發(fā)于直腸及直腸與乙狀結(jié)腸交界處的腫瘤。流行病學研究結(jié)果顯示，在西方發(fā)達國家結(jié)腸癌的發(fā)病率在惡性腫瘤中位居第二[1]；在我國，隨著社會環(huán)境、生活方式(飲食習慣，缺乏運動)的改變，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢，且具有高致死率。其致死率在男性中位居第五，在女性中位居第六[2]。與其他惡性腫瘤類似，結(jié)腸癌具有生長迅速，浸潤性強且易轉(zhuǎn)移的特點，這也是其難治愈病死率高的重要原因。根治性手術輔助以放化療是目前而言治療結(jié)腸癌的主要臨床手段，然而不可避免的會出現(xiàn)腫瘤復發(fā)及轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，造成預后不良[3-5]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程受多種基因的調(diào)控，相應的蛋白水平表達異常也與腫瘤活動密切相關。因此，積極探究參與結(jié)腸癌病理過程中的蛋白分子的表達情況及其對病理參數(shù)的影響對于結(jié)腸癌的分子靶向治療有著重要的意義。已有研究報道，Mcl-1是新近發(fā)現(xiàn)的屬于bcl-2家族的凋亡控制基因，其表達量下調(diào)可促進腫瘤細胞凋亡，提示Mcl-1可能是治療腫瘤的新靶點[3,6]。高爾基體磷酸化蛋白是一類功能強大的癌基因，在肺癌、胃癌中均已證實其高表達與腫瘤增殖活動密切相關[7]。本研究采用免疫組化方法探究結(jié)腸癌患者組織Mcl-1與高爾基體磷酸化蛋白表達水平與臨床病理之間的相關性，以期為結(jié)腸癌發(fā)病機制、早期診斷提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集我院2006年2月至2016年2月，收治的60例經(jīng)外科手術切除并經(jīng)病理檢查確診為結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織及距結(jié)腸癌遠端至少10 cm的癌旁正常組織(鏡下診斷無癌組織浸潤)，其中男性37例，女性23例，平均年齡(58.69±5.4)歲；所有患者的手術標本均在離體30 min內(nèi)采集，于液氮中儲存。TNM分期參考美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)或國際抗癌聯(lián)盟(UICC)的結(jié)腸癌分期系統(tǒng)。

1.2 納入標準

①所有病例在術前均未行放化療。②病例資料完整，均與家屬簽署知情同意書。該研究獲得我院倫理委員會批準。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學 采用免疫組化SP法，具體操作按照說明書進行。4 μm連續(xù)切片后68 ℃烤片20 min，常規(guī)使用二甲苯脫蠟及梯度酒精脫水，滅活內(nèi)源性過氧化物酶之后使用0.01 M枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)行抗原修復。在玻片標本組織上滴加已稀釋好的一抗(兔抗人Mcl-1單克隆抗體，編號：AF0094，生產(chǎn)廠家：Affinity公司；兔抗人Golph3單克隆抗體，編號：ab98023，生產(chǎn)廠家：ABCAM公司)，4 ℃孵育過夜。復溫1 h后加通用型生物素化二抗室溫孵育30 min，之后滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素于37 ℃孵育30 min。使用DAB顯色試劑盒進行顯色，蘇木精復染，脫水并封片。

1.3.2 結(jié)果判定 Mcl-1蛋白染色與高爾基體磷酸化蛋白(Golph3)染色以細胞質(zhì)或者細胞核中出現(xiàn)淡黃色至棕黃色顆粒為陽性。根據(jù)陽性細胞染色強度及陽性細胞率計分，兩者得分相乘，總分≤4分為陰性表達，總分>4分為陽性。染色強度評分：無色計0分；淡黃色1分；棕色2分；棕褐色3分；陽性細胞率評分：隨機選取5個視野，陽性細胞數(shù)<5%計0分；5%～25%計1分；26%～50%計2分；>50%計3分。由兩名病理科副主任醫(yī)師獨立閱片。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 17.0軟件，計數(shù)資料用卡方檢驗對比分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Mcl-1、Golph3表達水平在結(jié)腸癌組織及正常癌旁組織中的差異

免疫組化結(jié)果顯示：Golph3、Mcl-1在正常組織及結(jié)腸癌組織中均有表達，然而結(jié)腸癌組織中其陽性表達率均顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)，見表1。

表1 Mcl-1、Golph3在不同組織中表達水平差異(例，%)

2.2 Mcl-1、Golph3表達水平與其臨床病理參數(shù)的關系

Mcl-1表達水平與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關性(P>0.05)，與腫瘤浸潤深度、臨床分期密切相關，浸潤深度深，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期結(jié)腸癌組織中Mcl-1陽性表達率顯著較高(P<0.05)；Golph3水平與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關，浸潤深度深，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織中Golph3陽性表達率明顯較高(P<0.05)，見表2。

3 討論

近年來結(jié)腸癌的發(fā)病率逐年升高，其合并易轉(zhuǎn)移易復發(fā)等特點使得通過手術切除治療的臨床效果不佳，如何早期診斷及控制結(jié)腸癌的發(fā)展一直是臨床醫(yī)師面臨的難點。目前，關于腫瘤的分子靶向治療是該領域研究熱點。惡性腫瘤增殖過程中，常伴隨一些原癌基因的激活或者抑癌基因的失活，進而導致腫瘤細胞內(nèi)蛋白的異常表達[6,8]。因此，探索腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中蛋白的表達變化，對于腫瘤的靶向治療及臨床預測均有積極的意義。本文采用免疫組化方法探究結(jié)腸癌患者組織Mcl-1與Golph3表達水平與臨床病理之間的相關性，研究結(jié)果表明，結(jié)腸癌組織中Mcl-1與Golph3的陽性表達率顯著高于正常癌旁組織，提示Mcl-1、Golph3參與了結(jié)腸癌病變的生理過程。為了進一步探究其在結(jié)腸癌中的作用，我們分析了Mcl-1、Golph3表達水平與臨床病理參數(shù)之間的關系，結(jié)果顯示：Mcl-1表達水平與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關性，與腫瘤浸潤深度、臨床分期密切相關，浸潤程度大，臨床分期Ⅲ、Ⅳ的結(jié)腸癌組織中Mcl-1陽性表達率顯著較高；Golph3水平與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關，浸潤程度大，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織中Golph3陽性表達率明顯較高。

表2 Mcl-1、Golph3表達水平與其臨床病理參數(shù)的關系/例

髓細胞白血病基因-1(Mcl-1)是細胞凋亡控制蛋白，其主要作用機制為：維持線粒體細胞膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，促進細胞生存，在細胞毒制劑等誘導細胞凋亡的條件下可通過螯合促凋亡蛋白Bax/Bak而抑制腫瘤細胞凋亡，還可與增殖細胞核抗原相互作用來調(diào)控細胞分化過程[7,9]。已有較多報道證實在白血病、肝癌、宮頸癌中都存在Mcl-1過表達。另外，F(xiàn)leischer等[10]在肝癌組織中發(fā)現(xiàn)高水平的Mcl-1，在采用特異性抑制劑(LY294002)后，Mcl-1水平迅速下調(diào)，并且提高了化療藥物的敏感性，提示Mcl-1是肝癌治療的潛在靶點。高爾基體磷酸化蛋白(Golph3)是位于高爾基體的膜蛋白，在維持高爾基體結(jié)構(gòu)，蛋白糖基化等過程中具有重要的作用，研究顯示在癌細胞中蛋白糖基化過程紊亂，這可能與腫瘤增殖、黏附、遷移和浸潤有關[11-12]。在正常組織中Golph3的表達量較低，然而在胃癌、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等病變中檢測到Golph3表達上調(diào)。

綜上所述，Mcl-1、Golph3參與于結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，與正常組織相比其表達量顯著升高，且與腫瘤遠端轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期等病理參數(shù)相關。

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(編輯：吳小紅)

ExpressionofMyeloidLeukemia-1 (Mcl-1)andGolgiPhosphorProtein(Golph3)inColonCarcinomaandItsRelationshipwithClinicalPathologicalFeatures

XUWeili,NIUBaohua.

XinxiangSecondPeople'sHospital,Xinxiang,453002

ObjectiveTo investigate the expression of myeloid leukemia-1 (Mcl-1) and Golgi phosphor protein (Golph3) in colon carcinoma and its relationship with clinical pathological features.MethodsThe expression level of Mcl-1 and Golph3 in 60 cases of colon cancer tissues were detected using immunohistochemical method,and compared with adjacent normal tissues.ResultsMcl-1 and Golph3 in normal tissues and colorectal cancer tissues were expressed,but in colon cancer tissues the positive expression was significantly higher than normal tissues (P<0.05);there was no significant difference between the expression level of Mcl-1 in patients and gender,age,tumor differentiation,lymph node metastasis (P>0.05).But the expression level of Mcl-1 in patients was closely related to the clinical stage,the depth of tumor invasion.The positive expression rate of Mcl-1 in colon cancer with clinical stage Ⅲ，Ⅳ and depth of tumor invasion was significantly higher (P<0.05).The expression level of Golph3 was related to infiltration depth and lymph node metastasis,while Golph3 has significantly higher expression in lymph node metastasis tissues and the large degree of invasion (P<0.05).ConclusionMcl-1,Golph3 are involved in the process of development colon cancer,and the expression significantly increased compared with the normal tissue,which are related to distal metastasis tumor,lymph node metastasis,clinical stage,pathology the parameters.

Colon carcinoma;Myeloid leukemia-1(Mcl-1);Golgi phosphor protein (Golph3);Immunohistochemical;Clinical pathological

453002 河南省新鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院(徐偉莉)；475004 河南大學醫(yī)學院(牛保華)

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.007

R735.3+5

A

1001-5930(2017)09-1420-03

2016-11-08

2017-07-10)