水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中抗生素抗性基因的污染分析

巴永兵 ， 婁 陽 ， 趙 飛 ， 謝 晶 ，2， 潘迎捷 ，2，3， 趙 勇 *，2，3

（1.上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院，上海 201306；2.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海 201306；3.農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（上海），上海 201306）

水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中抗生素抗性基因的污染分析

巴永兵1， 婁 陽1， 趙 飛1， 謝 晶1，2， 潘迎捷1，2，3， 趙 勇*1，2，3

（1.上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院，上海 201306；2.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海 201306；3.農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（上海），上海 201306）

為了探究待售水產(chǎn)品中抗生素抗性基因（Antibiotic resistance genes，ARGs）在水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中的擴(kuò)散污染情況，選取上海市3個(gè)大型水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)作為研究對(duì)象，采用PCR的方法，對(duì)市場(chǎng)內(nèi)部和市場(chǎng)附近的排污溝表層淤泥中5大類（4種磺胺類、8種四環(huán)素類、6種β-內(nèi)酰胺類、5種氯霉素類、4種鏈霉素類）共27種ARGs進(jìn)行了檢測(cè)，并利用PCR-DGGE技術(shù)分析了細(xì)菌種群多樣性。結(jié)果顯示共有17種ARGs在批發(fā)市場(chǎng)淤泥中被檢出，其中磺胺類、四環(huán)素類和鏈霉素類ARGs的檢出率較高且檢出種類較多，表明水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)含有種類豐富的ARGs，水產(chǎn)品以磺胺類、四環(huán)素類和鏈霉素類ARGs污染為主。對(duì)市場(chǎng)外圍的檢測(cè)顯示市場(chǎng)外圍區(qū)域ARGs的種類分布略低于市場(chǎng)內(nèi)部，表明水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中ARGs的存在會(huì)通過污水排放途徑擴(kuò)散到周邊環(huán)境。DGGE圖譜的分析結(jié)果顯示，3個(gè)批發(fā)市場(chǎng)污泥樣品細(xì)菌種類差異性較大，表明環(huán)境中ARGs的種類分布與細(xì)菌的種類并無直接關(guān)聯(lián)。本研究表明水產(chǎn)品攜帶的ARGs會(huì)擴(kuò)散到水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中，導(dǎo)致水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)成為ARGs的重要儲(chǔ)存庫，以此造成的污染會(huì)進(jìn)一步傳播到周邊環(huán)境，此外，這些種類豐富的ARGs重新擴(kuò)散到待售水產(chǎn)品中的風(fēng)險(xiǎn)很大，需引起人們足夠的重視。

水產(chǎn)品安全；抗生素抗性基因；水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)；淤泥；DGGE

抗生素被譽(yù)為20世紀(jì)最重要的發(fā)現(xiàn)之一，廣泛應(yīng)用于人和動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療，小劑量的抗生素常作為一種特殊的“食品添加劑”，添加到飼料中促進(jìn)畜牧動(dòng)物和水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。拋開抗生素本身造成的化學(xué)污染，抗生素的濫用會(huì)對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生選擇性壓力，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌體內(nèi)產(chǎn)生抗生素抗性基因（Antibiotic Resistance Genes，ARGs）。 ARGs可以在細(xì)菌間通過與可移動(dòng)遺傳元件（質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子等）相結(jié)合進(jìn)行基因的水平轉(zhuǎn)移，使得環(huán)境中的敏感細(xì)菌獲得耐藥性并有可能逐漸發(fā)展為多重耐藥菌。同時(shí)，耐藥菌和ARGs可以通過食品渠道進(jìn)入人體，以此引發(fā)的食品安全問題對(duì)人體健康構(gòu)成潛在的威脅[1]。研究表明，臨床上細(xì)菌的耐藥情況與環(huán)境中的ARGs傳播有密切的聯(lián)系[2-4]。因此，作為一種新型的環(huán)境污染物[5-6]，ARGs已成為一個(gè)全球公共衛(wèi)生健康問題[7]。

為了獲取不同環(huán)境條件下ARGs傳播的相關(guān)數(shù)據(jù)，國內(nèi)外已對(duì)多種環(huán)境下的ARGs進(jìn)行調(diào)查研究。韋蓓等[8]探究了堆肥處理前后污水處理廠污泥中四環(huán)素類ARGs豐度的前后變化。Jiang等[9]探究了黃浦江中四環(huán)素類和磺胺類2種抗生素與其ARGs豐度的關(guān)系。朱永官等[10]調(diào)查了集約式豬飼養(yǎng)場(chǎng)中ARGs的多樣性分布。水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境中由于各類抗生素的不規(guī)范的使用，且常直接使用可能有抗生素殘留和ARGs的畜牧類動(dòng)物糞便作為飼料[11]，使得水產(chǎn)動(dòng)物具有成為ARGs載體的風(fēng)險(xiǎn)。目前雖已有研究關(guān)注于水產(chǎn)品中ARGs的污染，如Nawaz等[12]從鯰魚魚腸分離出的細(xì)菌中檢測(cè)到了tetA、tetB、tetG，Jiang等[13]從海參里分離出的副溶血性弧菌中檢測(cè)到了 sulI、sulII、sulIII 3 種磺胺類 ARGs。但是由于水產(chǎn)品的種類繁多且來源不同，調(diào)查某一個(gè)水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境或者某一類水產(chǎn)品中的ARGs并不能從整體水平上評(píng)估水產(chǎn)品中ARGs的污染種類。

水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)是水產(chǎn)品交易的主要場(chǎng)所，集合了不同地區(qū)不同種類的待售水產(chǎn)品，是監(jiān)測(cè)水產(chǎn)品中ARGs污染、保障食品安全的重要環(huán)境，待售水產(chǎn)品中的ARGs最終會(huì)通過水體等方式經(jīng)表層淤泥排放到污水溝，因此本研究中通過檢測(cè)排污溝淤泥中ARGs的存在以從整體水平上了解水產(chǎn)品中ARGs的污染種類并評(píng)估水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)是否具有成為ARGs儲(chǔ)存庫的風(fēng)險(xiǎn)。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集及處理

選取上海市楊浦區(qū)、普陀區(qū)、浦東新區(qū)的3個(gè)大型水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)作為采樣地點(diǎn)，采集的樣品為市場(chǎng)內(nèi)部排污溝液面下1～3 cm處的表層混勻淤泥。樣品均采集于2013年10月。另外，本研究還分別采集了3個(gè)市場(chǎng)周邊200～500 m的排污溝混勻淤泥作為樣品，以探究水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中ARGs是否會(huì)通過污水排放途徑對(duì)附近環(huán)境造成污染。采集后的樣品用均質(zhì)袋儲(chǔ)存并放在-80℃冰箱里凍存。

1.2 樣品DNA的提取

DNA的提取采用土壤基因組DNA提取試劑盒（MP Biomedicals），按照其說明書標(biāo)準(zhǔn)操作提取DNA，用酶標(biāo)儀（BioTek，Synergy 2）檢測(cè)提取 DNA的純度（A260/A280值在1.8～2.0之間），結(jié)果表明用該試劑盒提取的DNA純度較高。

1.3 目的基因的檢測(cè)

本研究中選取了5類共27種常見的抗生素抗性基因 ARGs：4 種磺胺類 ARGs（sulI、sulII、sulIII、sulA）、 8 種四環(huán)素類 ARGs（tetA、tetB、tetK、tetM、tetO、tetQ、tetS、tetW）、6 種 β - 內(nèi) 酰 胺 類 ARGs（CARB、SHV、SHV-5、ampC、ermB、mecA）、5 種氯霉素類 ARGs（catI、catII、catIII、catIV、floR）和 4 種鏈霉素類 ARGs （strA、strB、aadA、aadE）作為目的基因，用PCR技術(shù)對(duì)這些目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。引物序列、退火溫度及反應(yīng)體系等此前已有介紹[14]。得到的PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并送至生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，經(jīng)過blast比對(duì)確認(rèn)其是目的片段。

1.4 利用PCR-DGGE技術(shù)分析淤泥中細(xì)菌種群多樣性

以上述提取的基因組DNA為模板，用PCR技術(shù)擴(kuò)增其16SrDNA的V3區(qū)，引物采用細(xì)菌的16SrDNA的V3高變區(qū)通用引物[15]。 PCR反應(yīng)條件為首先94℃下預(yù)變性3 min，使DNA充分變性。然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)，具體步驟為94℃變性1 min，55℃退火復(fù)性1 min，在72℃下延伸 1 min，共30個(gè)循環(huán)；最后72℃下5 min使產(chǎn)物延伸完整，4℃保存。用BIO-RAD Dcode系統(tǒng)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DGGE分析，聚丙烯酰胺膠體積分?jǐn)?shù)為8%，變性梯度為 40%～60%。在 1×TAE電泳緩沖液，100 V、60℃下電泳10 h。采用SYBR Green I進(jìn)行染色，用Quantity One軟件對(duì)凝膠圖像進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中ARGs的污染分析

6個(gè)采樣點(diǎn)ARGs的數(shù)量分布結(jié)果如圖1所示，表1則具體列出了27種ARGs在市場(chǎng)內(nèi)部和市場(chǎng)附近樣品的檢出情況。本研究共檢測(cè)了5大類共27種ARGs，有17種ARGs在水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)淤泥中被檢出。其中磺胺類和四環(huán)素類分別有3種（sulI，sulII，sulIII）和 6 種（tetA、tetB、tetO、tetQ、tetS、tetW）有被發(fā)現(xiàn)。檢出率最高的是鏈霉素類ARGs，共檢測(cè)了 4 種 ARGs，其中的 3 種（strA、strB、aadA）在所有市場(chǎng)樣品中均被檢出。檢出率最低的是氯霉素類ARGs，只有floR有在M3中有被發(fā)現(xiàn)。

圖1 6個(gè)采樣點(diǎn)ARGs的分布情況Fig.1 Distribution of ARGs in six sites

本研究中有3種磺胺類 ARGs（sulI，sulII，sulIII）被檢測(cè)出來。其中sulI、sulII是環(huán)境中常見的2種磺胺類ARGs，已在多種環(huán)境下被發(fā)現(xiàn)，如水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)底泥[16]、畜禽糞便[17]、甚至是污染較少的河流中[18]。然而很少有報(bào)道在環(huán)境中同時(shí)檢出了sulI、sulII、sulIII，本次調(diào)查在3個(gè)水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)淤泥中均檢出了sulI、sulII、sulIII，而四環(huán)素類更多達(dá)有6 種 ARGs（tetA，tetB，tetO，tetQ，tetS，tetW）在市場(chǎng)中被檢出，說明水產(chǎn)動(dòng)物所處環(huán)境受磺胺類和四環(huán)素類ARGs污染嚴(yán)重，這使得水產(chǎn)品具有很高的風(fēng)險(xiǎn)被這2類ARGs污染。這一結(jié)果與高盼盼等[16]在研究天津市水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境中ARGs的分布結(jié)果相似，他指出，磺胺類抗生素價(jià)格低廉，易溶解，四環(huán)素抗生素則具有廣譜性和低毒性特點(diǎn)，這2種抗生素被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)中，其調(diào)查發(fā)現(xiàn)四環(huán)素類和磺胺類抗生素的耐藥菌株和ARGs在水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中普遍存在。而對(duì)于其研究中檢出率較低的2種ARGs（tetB、tetQ）在本實(shí)驗(yàn)中的3個(gè)市場(chǎng)中均有檢出，說明待售水產(chǎn)品中ARGs的擴(kuò)散傳播使得水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)成為多種ARGs的儲(chǔ)存庫。對(duì)于鏈霉素類ARGs，很少有報(bào)道關(guān)注于水產(chǎn)品中鏈霉素類ARGs的存在情況。本研究選取的4種鏈霉素類ARGs（strA、strB、aadA、aadE）在 3 個(gè)水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中均有檢出，說明待售水產(chǎn)品中鏈霉素類ARGs的污染較為嚴(yán)重，這一結(jié)果需引起足夠的重視。對(duì)于氯霉素類ARGs，只在M3中檢出了floR，說明水產(chǎn)品中氯霉素類ARGs污染并不嚴(yán)重，反映出水產(chǎn)養(yǎng)殖操作中已經(jīng)很少使用氯霉素類抗生素。據(jù)悉，由于氯霉素濫用造成的眾多負(fù)面作用，歐盟早在1994年便因?yàn)槁让顾氐臑E用帶來的負(fù)面影響禁止了氯霉素在肉禽等飼養(yǎng)加工中的使用[19]。從5大類27種ARGs的檢出結(jié)果來看，由于水產(chǎn)品中ARGs在排污溝淤泥中的匯集，使得水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)已成為ARGs的儲(chǔ)存庫，其中是磺胺類、四環(huán)素類和鏈霉素類ARGs檢出種類較為豐富，說明水產(chǎn)品以這3類ARGs污染為主。

表1 水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)淤泥及市場(chǎng)外圍區(qū)域抗性基因的檢出情況Table 1 Detection occurrence of ARGs in aquatic products wholesale markets ditch sediment and their peripheries

2.2 水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中ARGs對(duì)周邊區(qū)域的污染分析

本次研究調(diào)查了水產(chǎn)市場(chǎng)附近200～500 m排污溝中混勻淤泥樣品中ARGs的分布情況，結(jié)果如圖1和表1所示。通過表1比較市場(chǎng)內(nèi)部和外圍各ARGs的檢出率發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)內(nèi)部排污溝中ARGs和市場(chǎng)附近檢出類型相似，但市場(chǎng)周邊區(qū)域ARGs的檢出總類要略低于市場(chǎng)內(nèi)部，在本次研究所調(diào)查的27種 ARGs中，S1和 S2均檢出了 14種 ARGs，S3則檢出了15種ARGs，三者的ARGs檢出數(shù)量均比對(duì)應(yīng)的市場(chǎng)內(nèi)部樣品少了2種。通過SPSS Statistics V17.0顯著性分析得出市場(chǎng)內(nèi)部和外圍ARGs的種類分布不具有顯著性差異（P>0.05）。整體水平來看，市場(chǎng)周邊環(huán)境ARGs的檢出類型與市場(chǎng)內(nèi)部相似，但數(shù)量上略低于市場(chǎng)內(nèi)部，說明批發(fā)市場(chǎng)中ARGs的存在會(huì)通過污水排放途徑擴(kuò)散到周邊環(huán)境。

2.3 細(xì)菌群落的分布與ARGs分布間的相關(guān)性分析

本實(shí)驗(yàn)中利用PCR-DGGE技術(shù)擴(kuò)增目的片段16sRNA的V3區(qū)，以探討不同環(huán)境下中細(xì)菌群落的分布與ARGs的分布是否具有相似性，結(jié)果如圖2所示。從圖2可以看出，所處同一區(qū)域的樣品（即M1 和 S1、M2和 S2、M3和 S3）DGGE 條帶的位置、亮度和類型具有一定的相似性。尤其是M2和S2，分別檢出了9條和10條條帶，且這些條帶的位置和亮度大致相同，說明同一區(qū)域環(huán)境下的細(xì)菌群落的類型和豐富度具有一定的相似性。但是3個(gè)市場(chǎng)之間DGGE圖譜差異性較大，它們條帶的所處位置、數(shù)量、亮度均具有差異性，這表示3個(gè)市場(chǎng)淤泥環(huán)境中的細(xì)菌種類、優(yōu)勢(shì)菌種均不同。其中M3市場(chǎng)檢出了19種條帶數(shù)，這一數(shù)值明顯高于其他2個(gè)地區(qū)的水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)，與此對(duì)應(yīng)的是，M3檢出的ARGs種類也明顯高于其他兩個(gè)市場(chǎng)。M3同時(shí)檢出最多種類的ARGs和細(xì)菌群落分布，可能代表著環(huán)境ARGs的多樣性與細(xì)菌群落的多樣性有一定的關(guān)聯(lián)?？傮w來看，雖然3個(gè)水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)淤泥中ARGs的分布類似，但是細(xì)菌群落的分布差異性較大。說明環(huán)境中ARGs的污染類型不能簡(jiǎn)單的通過分析環(huán)境中的細(xì)菌群落的來判斷。

圖2 各淤泥樣品的DGGE圖譜Fig.2 DGGE fingerprint and lane comparison from different sediment samples

3 討論

食品是ARGs進(jìn)入人體的直接載體，攜帶ARGs的食品會(huì)給人體健康構(gòu)成巨大的威脅。水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)是待售水產(chǎn)品交易流通的主要渠道，研究水產(chǎn)品中ARGs在環(huán)境的擴(kuò)散情況有助于了解水產(chǎn)品中ARGs的污染種類并評(píng)估水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)是否具有成為ARGs儲(chǔ)存庫的風(fēng)險(xiǎn)。水產(chǎn)品中ARGs在環(huán)境中的擴(kuò)散模式如圖3所示。

圖3 待售水產(chǎn)品中抗生素抗性基因在環(huán)境中的擴(kuò)散模式Fig.3 Dissemination model of ARGs from contaminated aquatic products in the environment

水產(chǎn)品污染的ARGs可以通過水體等途徑最終匯集在表層淤泥中，本實(shí)驗(yàn)中在水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)排污溝淤泥中共檢出了 17種 ARGs，Muziasari WI等[20]在調(diào)查水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)磺胺類ARGs的存在性時(shí)并沒有發(fā)現(xiàn)sul3的存在，而在本研究中的所有批發(fā)市場(chǎng)樣品中均發(fā)現(xiàn)了sul3，沈群輝等[21]在研究黃浦江ARGs污染時(shí)也沒有檢出本研究中普遍存在的tetB和tetO，這說明水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)已成為ARGs的重要儲(chǔ)存庫。同時(shí)，ARGs具有很高的遷移活性，如養(yǎng)殖廢水中的ARGs會(huì)通過廢水排放的途徑對(duì)其他環(huán)境造成污染[22]。有報(bào)道指出，排放的污水和底泥里包含大量的ARGs和耐藥菌[23]。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)比市場(chǎng)內(nèi)部和附近區(qū)域排污溝淤泥中的ARGs種類，得出水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中ARGs的存在會(huì)擴(kuò)散到周邊環(huán)境。此外，在抗生素濫用引發(fā)的食品安全問題的大環(huán)境下[24]，由于水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)已成為ARGs的儲(chǔ)存庫，ARGs重新擴(kuò)散到待售水產(chǎn)品中的風(fēng)險(xiǎn)很大，使得ARGs在水產(chǎn)品中交叉污染，這對(duì)人體健康構(gòu)成了更大的潛在威脅，需引起人們足夠的重視。

4 結(jié) 語

本研究表明待售水產(chǎn)品以磺胺類、四環(huán)素類及鏈霉素類ARGs污染為主，水產(chǎn)品攜帶的ARGs會(huì)擴(kuò)散到水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)環(huán)境中，導(dǎo)致水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)成為ARGs的重要儲(chǔ)存庫，以此造成的污染會(huì)傳播到周邊環(huán)境，此外，這些種類豐富的ARGs重新擴(kuò)散到待售水產(chǎn)品中的風(fēng)險(xiǎn)很大，需引起人們足夠的重視。而對(duì)于本研究中發(fā)現(xiàn)的污染嚴(yán)重的3類ARGs：磺胺類、四環(huán)素類以及鏈霉素類ARGs，后續(xù)工作應(yīng)重點(diǎn)研究這3類ARGs的控制措施，以控制水產(chǎn)品中ARGs的污染。

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會(huì)議名稱(中文)：第十屆全國青年微生物學(xué)工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)

所屬學(xué)科：動(dòng)植物微生物學(xué),生物物理學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué),生物技術(shù)與生物工程

開始日期：2017-09-15 結(jié)束日期：2017-09-17

所在城市：湖南省 長(zhǎng)沙市

具體地點(diǎn)：主辦單位：中國微生物學(xué)會(huì)普通微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、環(huán)境微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、分子微生物學(xué)及生物工程專業(yè)委員會(huì)

承辦單位：湖南師范大學(xué)、吉首大學(xué)、湖南省微生物學(xué)會(huì)

摘要截稿日期：2017-08-15 聯(lián)系人：胡勝標(biāo) 聯(lián)系電話：15116408110，0731-88872298

傳真：0731-88872298 E-MAIL：shengbiaohu@hunnu.edu.cn

會(huì)議網(wǎng)站：http://csm.im.ac.cn/templates/team/introduction.aspx?nodeid=9&page=ContentPage&contentid=4861

會(huì)議背景介紹：由中國微生物學(xué)會(huì)普通微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、環(huán)境微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、分子微生物學(xué)及生物工程專業(yè)委員會(huì)聯(lián)合主辦，湖南師范大學(xué)、吉首大學(xué)和湖南省微生物學(xué)會(huì)承辦的“第十屆全國青年微生物學(xué)工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)”，定于2017年9月15～17日在湖南省長(zhǎng)沙市舉行。本次會(huì)議的主題是環(huán)境微生物學(xué)的基礎(chǔ)和技術(shù)方法，將以國內(nèi)微生物學(xué)研究方面的杰出學(xué)者大會(huì)報(bào)告和青年學(xué)者論壇，以及互動(dòng)的形式，促進(jìn)交流，提升我國相關(guān)微生物學(xué)研究的水平。會(huì)議組委會(huì)熱忱歡迎全國各地的環(huán)境微生物學(xué)研究的學(xué)者和青年才俊，蒞臨偉人故里——美麗星城長(zhǎng)沙，展示和交流各自科研成果。同時(shí)也歡迎其他學(xué)科方向的學(xué)者參會(huì)交流——它山之石可以攻玉。我們相信您在這里將會(huì)獲得更多的靈感、更多的啟迪，也會(huì)結(jié)交更多的朋友！

Research of the Pollution of Antibiotic Resistance Genes in Aquatic Products Wholesale Market

BA Yongbing1， LOU Yang1， ZHAO Fei1， XIE Jing1，2， PAN Yingjie1，2，3， ZHAO Yong*1，2，3
（1.College of Food Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China；2.Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing and Preservation，Shanghai 201306，China；3.Laboratory of Quality&Safety Risk Assessment for Aquatic Product on Storage and Preservation （Shanghai），Ministry of Agriculture Shanghai 201306，China）

In order to investigate the dissemination of antibiotic resistance genes （ARGs） from contaminated aquatic products in aquatic products wholesale market，this study targeted three large-scale aquatic products wholesale markets as research object and collected mixed sewage ditchsediment in and around the three markets separately as test samples.With the help of PCR，this study detected five categories， （four kinds of sulfonamides，eight kinds of tetracyclines，six kinds of β-lactams，five kinds of chloramphenicol，and four kinds of streptomycin） ，in which there is a total of twenty seven kinds of ARGs.Moreover，PCR-DGGE technique was utilized to analyze the diversity of bacteria community in the sample.The results showed that seventeen kinds of ARGs were detected in aquatic products wholesale markets and they all contained multiple types of tetracyclines，sulfonamides，and streptomycin ARGs，which accounted for the conclusion that there was a great variety of ARGs types in aquatic products wholesale market and these three kinds of ARGs were major ones in aquatic products.Sample testing of sewage ditch sediment near the markets showed that ARGs in surrounding place was slightly lower than ARGs in markets，indicating that the occurrence of ARGs in markets would pollute surrounding environment by sewage discharge.Analysis of the results of DGGE profiles showed that though ARGs distributed in three aquaculture markets shared similarities，the distribution of bacterial types between three markets were great different，displaying that there was no direct relationship between the types of ARGs and bacterial types.This work noted that aquatic products wholesale market has became a important receiver of ARGs through the dissemination of ARGs from contaminated aquatic products，and this receiver would not only pollute surrounding environment by sewage discharge to some extent，particularly，resulting a huge risk to pollute aquatic products again，hence needing more attention.

aquatic safety，antibiotic resistance genes，aquatic products wholesale market，sediment，DGGE

TS 20

A

1673—1689（2017）08—0800—07

10.3969/j.issn. 1673-1689.2017.08.003

2015-08-19

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31271870）；上海市科委計(jì)劃項(xiàng)目（14320502100）；上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（滬農(nóng)科攻字2014第3-5號(hào)）；上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心項(xiàng)目（11DZ2280300）。

*通信作者：趙 勇（1975—），男，湖北黃岡人，工學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事食品安全方面的研究。E-mail：yzhao@shou.edu.cn

巴永兵，婁陽，趙飛，等.水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)中抗生素抗性基因的污染分析[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2017，36（08）：800-806.