• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蘇格木勒-3湯對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚后Caspase3/9表達(dá)的影響*

    2017-11-01 09:20:07劉明潔于麗君
    關(guān)鍵詞:格木異丙赫依

    王 羽, 劉明潔, 付 瑤, 郭 欣, 于麗君

    (內(nèi)蒙古民族大學(xué), 通遼 028000)

    蘇格木勒-3湯對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚后Caspase3/9表達(dá)的影響*

    王 羽, 劉明潔, 付 瑤, 郭 欣, 于麗君△

    (內(nèi)蒙古民族大學(xué), 通遼 028000)

    目的探討蘇格木勒-3湯(SD-3)對(duì)異丙腎上腺素(ISO)所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用并探討其機(jī)制。方法32只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、SD-3治療組和SD-3對(duì)照組(n=8)。模型組和SD-3治療組皮下注射85 mg/(kg·d)ISO連續(xù)2 d致大鼠心肌肥厚模型;造模后,SD-3治療組和SD-3對(duì)照組灌胃給予2 g/kg的 SD-3,空白對(duì)照組、模型組灌以等體積的蒸餾水, 干預(yù)14 d。于16 d末,觀察各組大鼠心臟外觀、心臟指數(shù)形態(tài)學(xué)變化;檢測(cè)Caspase-3/9的活性和表達(dá)情況。結(jié)果與正常對(duì)照組相比,模型組心臟變大,缺血,心臟指數(shù)升高,病理?yè)p傷嚴(yán)重,SD-3湯改善上述現(xiàn)象。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)SD-3湯降低因ISO誘導(dǎo)的Caspase-3/9的活性并下調(diào)Caspase-3/9的表達(dá)。SD-3組大鼠心臟沒(méi)有變化,與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異。結(jié)論SD-3對(duì)ISO誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚具有保護(hù)作用,并通過(guò)下調(diào)Caspase-3/9表達(dá)緩解心肌肥厚轉(zhuǎn)為心衰。

    心肌肥厚;蘇格木勒-3;異丙腎上腺素;Caspase-3/9;大鼠

    cardiac hypertrophy; sugemule-3 decoction; isoproterenol; caspase-3/9; rat

    病理性心肌肥厚是指在多種病理性刺激下,心臟通過(guò)增加心室壁厚度來(lái)代償性增加心室壁的張力,繼續(xù)刺激加劇心肌的應(yīng)激反應(yīng),最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷、凋亡及壞死,進(jìn)而抑制心功能,導(dǎo)致不可逆的心功能下降、心力衰竭[1-3]。2016年歐洲心臟病協(xié)會(huì)指出心肌肥厚合并有心力衰竭的藥物包括血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotension converting enzyme inhibitors, ACEI),血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(angiotensin Ⅱ receptor blocker, ARB),β受體阻滯劑,醛固酮受體拮抗劑,血管緊張素受體-腦啡肽酶抑制劑(angiotensin receptor-neprilysin inhibitor, ARNI),這些藥物可改善患者臨床癥狀和心臟功能,不能治愈或完全阻止疾病發(fā)展[4]?,F(xiàn)階段,病理性心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展機(jī)制仍未完全闡明,尚缺乏行之有效的干預(yù)手段。

    蒙藥蘇格木勒-3湯(Mongolian drug sugemule-3 decoction, SD-3)是蒙醫(yī)傳統(tǒng)藥方,臨床應(yīng)用多年。君藥豆蔻味辛,性溫、膩,為抑赫依之主藥;臣藥白苣勝子味微甘,性平,乃抑赫依;佐藥蓽茇味辛,性溫、膩,調(diào)節(jié)體素。3藥合用,相互協(xié)調(diào),為赫依病之專(zhuān)方,尤其對(duì)心赫依病效果更佳[5],但其作用機(jī)制不明。本研究利用ISO誘發(fā)大鼠心肌肥厚并用SD-3干預(yù),觀察其對(duì)大鼠心肌肥厚組織學(xué)及Caspase活性的影響,旨在探討SD-3的治療機(jī)制,為SD-3臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 藥物與試劑

    SD-3經(jīng)蒸餾水沸水浸泡密封過(guò)夜后,四層紗布過(guò)濾除去沉渣得上清液,每毫升上清液中含0.2 g生藥,將其保存在4℃冰箱。異丙腎上腺素(isoprenaline, ISO)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;戊巴比妥鈉購(gòu)自德國(guó)Merck公司。

    1.2 動(dòng)物

    Wistar健康雄性SPF級(jí)大鼠32只,體重約200~220 g,由長(zhǎng)春億斯公司提供。全部大鼠普通飼料喂養(yǎng),飼養(yǎng)條件為標(biāo)準(zhǔn)溫度為20℃~22℃及相對(duì)濕度為50%~60%的清潔、通風(fēng)較好的動(dòng)物室中,分籠飼養(yǎng),8只/籠,籠子足夠大鼠自由活動(dòng),同樣可自由飲水進(jìn)食,平均12 h的自然晝夜條件。

    1.3 動(dòng)物分組及模型建立

    Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,稱(chēng)重后隨機(jī)分成4組(n=8):空白對(duì)照組(sc生理鹽水2 d +ig蒸餾水14 d)、模型組(sc大劑量ISO 2 d +ig蒸餾水14 d)、蘇格木勒-3湯治療組(sc大劑量ISO 2 days +ig SD 14 d),蘇格木勒-3湯組(sc生理鹽水2 d +ig SD 14 d)。肥厚模型組、蘇格木勒-3湯治療組大鼠在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第1、2天頸背部皮下注射(sc)大劑量ISO溶液85 mg/(kg·d),制作心肌肥厚模型;空白對(duì)照組及蘇格木勒-3湯組大鼠,在其頸背部皮下注射同等量生理鹽水。皮下注射ISO或生理鹽水2 d后,蘇格木勒-3湯組及蘇格木勒-3湯治療組進(jìn)行灌胃(ig)藥物處理(根據(jù)臨床用藥劑量設(shè)定為2 g/kg),空白對(duì)照組及肥厚模型組灌以等體積的蒸餾水,1次/天連續(xù)灌胃14 d。

    1.4 病理觀察

    大鼠最后一次給藥,禁食不禁水14 h后,稱(chēng)取體重,按45 mg/kg劑量腹腔注射(ip)2% 戊巴比妥鈉。麻醉后,取心臟,用0.9%氯化鈉溶液清洗心臟組織及血跡,觀察心臟形態(tài)變化。稱(chēng)取各組大鼠心臟重量,心臟肥厚程度以心臟重量指數(shù)(heart weight/body weight, HW/BW)表示。截取心尖部分,置4%中性多聚甲醛溶液中固定,24 h后常規(guī)石蠟包埋,切片行蘇木精-伊紅(HE)染色,置于鏡下觀察大鼠心肌組織病理學(xué)改變。

    1.5 分光光度法檢測(cè)心肌組織勻漿中Caspase酶的含量

    取新鮮大鼠心臟組織,剪成小塊后超聲粉碎器制備心臟組織勻漿,4℃,12 000 r/min離心10 min后棄沉淀,上清保存于-20℃?zhèn)溆?。采用Caspase-3/9活性檢測(cè)試劑盒(碧云天)檢測(cè)心臟組織中Caspase-3/9活性。具體步驟操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,酶標(biāo)儀測(cè)定其OD值。

    1.6熒光定量PCR檢測(cè)各組大鼠心肌組織中Caspase-3/9基因表達(dá)

    取新鮮心臟組織,采用天根動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒提取心臟組織總RNA。測(cè)定紫外分光光度計(jì)260、280處OD值,OD260/280在1.7~2.1為可用范圍??俁NA濃度(ng/μl)= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。提取的總RNA稀釋后進(jìn)行合成cDNA模板,并以此為模板進(jìn)行Caspase-3/9擴(kuò)增。

    反應(yīng)體系的配制:2×SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(Tli RnaseH Plus) 10 μl;PCR Forward、Reverse Primer(10 μmol/L) 0.6 μl;ROX Reference Dye(50×) 0.4 μl;template 2 μl;ddH2O2(sterile distilled water) 至20 μl。

    反應(yīng)條件:預(yù)變性95℃ 15 min;PCR反應(yīng) 95℃ 10 s,60℃ 31 s,40個(gè)循環(huán)經(jīng)熒光定量PCR獲得各個(gè)目的基因的Ct值。反應(yīng)結(jié)束后,按照2-△△Ct法計(jì)算結(jié)果。Caspase-3的引物序列(CAS3F: 5’-GGA GCA GTT TTG TGT GTG TGA T-3’,CAS3R: 5’-GAA GAG TTT CGG CTT TCC AGT-3’);Caspase-9的引物序列(CAS9F: 5’-CTG CGA ACT AAC AGG CAA GC -3’,CAS9R: 5’-CTA GAT ATG GCG TCC AGC TG-3’);β-actin的引物序列(BF: 5’-GTG GGG CGC CCC AGG CAC CA -3’,BR: 5’-CTC CTT AAT GTC ACG CAC GATT -3’)。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1SD-3對(duì)ISO誘導(dǎo)心肌肥厚大鼠心臟外觀及心臟指數(shù)的影響

    與模型組相較,SD-3治療組明顯抑制心肌肥厚,而僅灌胃SD-3的大鼠心臟與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異(圖1),模型組大鼠HW/BW明顯高于空白對(duì)照組[0.00343±0.00056vs0.00217±0.00017,P<0.05],SD-3顯著降低ISO誘導(dǎo)的HW/BW增加[0.00295±0.0002,P<0.05vsISO];SD-3組與空白對(duì)照組相比,HW/BW無(wú)顯著差異(圖2)。

    2.2SD-3對(duì)ISO誘導(dǎo)心肌肥厚大鼠的心肌組織病理學(xué)改變的影響

    各組心肌組織病理學(xué)改變(圖3),空白對(duì)照組心肌組織細(xì)胞完整,結(jié)構(gòu)正常,界限清晰而模型組大鼠心肌組織細(xì)胞崩解壞死,細(xì)胞排列紊亂,界限不清,細(xì)胞核散在,呈彌漫性壞死,胞漿混濁,細(xì)胞核散在于細(xì)胞之間;SD-3處理后該現(xiàn)象有所緩解。SD-3組大鼠心肌組織與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯變化。

    Fig.1Cardiac morphology of heart in each group

    A: Control group; B: Model group; C: Mongolian sugemule-3+model group; D: Sugemule-3 group

    HW: Heart weight; BW: Body weight; A: Control group; B: Model group; C: Mongolian SD-3+model group; D: SD-3 group

    *P<0.05vscontrol;#P<0.05vsmodel

    Fig.3Pathological changes of myocardial tissue in rats (HE staining ×400)

    A: Control group; B: Model group; C: Mongolian sugemule-3+model group; D: Sugemule-3 group

    2.3SD-3對(duì)ISO誘導(dǎo)心肌肥厚大鼠Caspase-3/9活性和表達(dá)的影響

    與空白對(duì)照組相比較,模型組中Caspase-3/9的活性顯著升高。而SD-3處理后的大鼠心臟Caspase-3/9的活性明顯降低。僅用SD-3處理的大鼠心臟組織Caspase-3/9的活性與空白對(duì)照組心臟無(wú)明顯差異(表1)。

    每組分別取8個(gè)樣本,每個(gè)樣品做3孔。如表1所示,ISO處理組Caspase-3/9 mRNA 的表達(dá)較空白對(duì)照組顯著升高(P<0.01),而SD-3處理后Caspase-3/9 mRNA 的表達(dá)顯著下降(P<0.01)。

    3 討論

    心血管疾病是當(dāng)今人類(lèi)面臨的亟待解決的疾病之一,而心肌肥厚是心血管相關(guān)疾病的共同病理轉(zhuǎn)歸[6]。蒙醫(yī)中根據(jù)心血管疾病臨床癥狀歸納為心赫依病。心為病變赫依主要串行之道,故臨床上心病屬赫依性者常見(jiàn)。在《四部醫(yī)典》中:“治心、主脈、大腸之病,應(yīng)以抑赫依為主”。本病主要由于赫依失衡后串行心臟,與巴達(dá)干相搏,影響希拉。導(dǎo)致心臟功能紊亂,遂成此病。治宜以鎮(zhèn)赫依,安心為原則[7]。而赫依病的專(zhuān)方即為SD-3。SD-3蒙醫(yī)傳統(tǒng)藥方,臨床已應(yīng)用多年,在蒙醫(yī)經(jīng)典著作《四部醫(yī)典》,《中國(guó)百科全書(shū)·蒙醫(yī)學(xué)》,《蒙醫(yī)方劑學(xué)》(統(tǒng)編教材)中均有記載。該方中君藥白豆蔻(蒙古語(yǔ)音譯名為查干蘇格木勒)味辛,性溫、膩、銳、輕、燥,為抑赫依之主藥;佐藥蓽茇味辛,性溫、膩、銳、輕、燥,具有助胃火,祛巴達(dá)干赫依,調(diào)和體素,壯陽(yáng),平喘,祛痰,止痛功能。豆蔻,白苣勝子,蓽茇3藥合用,相互協(xié)調(diào),為赫依病之專(zhuān)方,尤其對(duì)心赫依病效果更佳。研究證明蘇格木勒-3湯為具有抑赫依,改善赫依血循環(huán),鎮(zhèn)痛等功能,是治療心赫依病的有效蒙成藥[8]。

    Tab. 1 The activity and expression changes of Caspase-9/3 in each group(±s, n=8)

    A: Control group; B: Model group; C: Mongolian sugemule-3+model group; D: Sugemule-3 group

    **P<0.01vscontrol;##P<0.01vsmodel

    作為永久細(xì)胞,心肌細(xì)胞一般不發(fā)生增殖或增殖率極低。心肌肥厚引起心肌細(xì)胞凋亡現(xiàn)象主要是由于超負(fù)荷狀態(tài)。心肌細(xì)胞凋亡是心肌肥厚向心衰轉(zhuǎn)化的重要機(jī)制,抑制凋亡有望緩解心肌肥厚向心衰轉(zhuǎn)變的發(fā)生。病理性心肌肥厚會(huì)激活死亡受體途徑和線粒體途徑進(jìn)而促進(jìn)凋亡的發(fā)生[9,10]。Caspase-3是凋亡的關(guān)鍵效應(yīng)酶,其可以作用于多種底物導(dǎo)致蛋白降解引起細(xì)胞凋亡[11]。病理性心肌肥厚發(fā)生過(guò)程中,胞質(zhì)中的procaspase-9被剪切為活性Caspase-9,啟動(dòng)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),激活下游的Caspase-3引發(fā)凋亡[12]。本研究采用大劑量ISO誘導(dǎo)大鼠心肌肥厚模型,并用SD-3干預(yù)。結(jié)果表明SD-3可緩解ISO誘導(dǎo)的心肌肥厚,而正常大鼠給予SD-3后,大鼠心臟無(wú)明顯改變,說(shuō)明SD-3對(duì)大鼠心臟結(jié)構(gòu)無(wú)影響,無(wú)毒性作用。進(jìn)一步檢測(cè)Caspase-3/9的活性和基因表達(dá)情況,結(jié)果表明SD-3治療后,有效抑制Caspase-3/9的活性和表達(dá),表明SD-3通過(guò)有效抑制caspase-3/9緩解心肌肥厚轉(zhuǎn)為心衰。

    綜上所述,本研究初步證明蒙藥蘇格木勒-3湯可以有效緩解ISO誘發(fā)病理性心肌肥厚,并通過(guò)抑制caspase-3/9緩解心肌肥厚轉(zhuǎn)為心衰。

    [1] 陳新燕, 司軍強(qiáng), 李 麗, 等. 18β-甘草次酸對(duì)Wistar大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠腦微動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞縫隙連接的影響 [J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2013, 29(3): 251-254.

    [2] 陳少青, 王伊林, 曹憲玉, 等. 蒙藥新 II 號(hào)對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心功能、心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及凋亡的作用 [J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2016, 32(5): 419-423.

    [3] Kang JH, Lee HS, Park D,etal. Context-independent essential regulatory interactions for apoptosis and hypertrophy in the cardiac signaling network [J].SciRep, 2017, 7: 34.

    [4] Catapano AL, Graham I, De Backer G,etal. 2016 ESC/EAS guidelines for the management of dyslipidaemias [J].EurHeartJ, 2016, 37(39): 2999-3058.

    [5] 中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)-蒙醫(yī)學(xué)[M]. 上海: 科學(xué)技術(shù)出版社, 1993: 241.

    [6] 程杰坤, 孫小慧, 高莉萍, 等. 法舒地爾對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌肥厚的干預(yù)作用及其機(jī)制 [J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2016, 32(5): 414-418.

    [7] 宇妥·元丹貢布. 四部醫(yī)典[M]. 江蘇: 鳳凰科學(xué)技術(shù)出版社, 2016.

    [8] 烏力吉特古斯, 薩其拉. 蒙藥心康膠囊治療赫依型心刺痛的臨床研究 [J]. 中國(guó)民族醫(yī)藥雜志, 2009, 14(12): 5-8.

    [9] perez-Garijo A, Fuchs Y, Steller H. Apoptotic cells can induce non-autonomous apoptosis through the TNF pathway [J].ELife, 2013, 2: e01004.

    [10]Han SS, Wang G, Jin Y,etal. Investigating the mechanism of hyperglycemia-induced fetal cardiac hypertrophy [J].PLoSOne, 2015, 10(9): e0139141.

    [11]Wang Y, Wang YL, Huang X,etal. Ibutilide protects against cardiomyocytes injuryviainhibiting endoplasmic reticulum and mitochondrial stress pathways [J].HeartVessels. 2017, 32(2): 208-215.

    [12]張 偉. 人類(lèi) caspase 家族蛋白酶與凋亡 [J]. 國(guó)際遺傳學(xué)雜志, 1999, 22(6): 290-293.

    R331.3; R332

    A

    1000-6834(2017)05-390-04

    10.12047/j.cjap.5532.2017.094

    國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81560590);內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(KJJH1603);內(nèi)蒙古民族大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目(BS345)

    2016-11-28

    2017-05-18

    Tel: 13947550088; E-mail: shen348@126.com

    猜你喜歡
    格木異丙赫依
    不同海拔高度對(duì)格木人工林生長(zhǎng)及林內(nèi)小生境的影響
    紫檀芪對(duì)異丙腎上腺素致心肌纖維化的作用研究
    赫依證的證期標(biāo)準(zhǔn)化研究
    蒙醫(yī)赫依病變時(shí)間與抑郁癥發(fā)病時(shí)間關(guān)系探討
    馬尾松格木幼林混交效果研究
    丹皮酚對(duì)異丙腎上腺素致小鼠心肌肥厚的影響
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:38
    蒙醫(yī)赫依病變時(shí)間與抑郁癥發(fā)病時(shí)間關(guān)系探討
    赫依型心刺痛患者蒙醫(yī)辨證施護(hù)
    格木種子大小變異及萌發(fā)特性
    異丙腎上腺素在硅酸鉍離子交換薄層上的選擇性分離與測(cè)定
    色譜(2015年6期)2015-12-26 01:57:36
    一级黄片播放器| 少妇人妻精品综合一区二区 | 99久久99久久久精品蜜桃| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久久久性生活片| 一进一出抽搐动态| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 少妇的丰满在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 热99re8久久精品国产| 2021天堂中文幕一二区在线观| av欧美777| 一进一出好大好爽视频| 深夜精品福利| 18禁美女被吸乳视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲国产色片| 国产v大片淫在线免费观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 大型黄色视频在线免费观看| 99热只有精品国产| 欧美在线一区亚洲| 一级黄片播放器| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产激情偷乱视频一区二区| 搡老熟女国产l中国老女人| 少妇的逼水好多| 中文亚洲av片在线观看爽| 在线观看一区二区三区| 一区二区三区免费毛片| 久久人妻av系列| 精品不卡国产一区二区三区| 色综合亚洲欧美另类图片| 免费搜索国产男女视频| 制服人妻中文乱码| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费av毛片视频| 日本 欧美在线| 色av中文字幕| 波野结衣二区三区在线 | 51午夜福利影视在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产三级中文精品| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩国内少妇激情av| 亚洲自拍偷在线| 18禁在线播放成人免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 特级一级黄色大片| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 91九色精品人成在线观看| 国产三级中文精品| 观看美女的网站| 欧美3d第一页| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品国产亚洲在线| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品,欧美在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 最近在线观看免费完整版| 99热这里只有精品一区| 脱女人内裤的视频| 又紧又爽又黄一区二区| 免费看a级黄色片| 国产成人av激情在线播放| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产野战对白在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人午夜高清在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产色婷婷99| 国产精品1区2区在线观看.| 午夜免费成人在线视频| 草草在线视频免费看| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲不卡免费看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产中年淑女户外野战色| 亚洲欧美激情综合另类| 成年女人毛片免费观看观看9| www国产在线视频色| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美国产在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产欧美日韩一区二区三| 九色成人免费人妻av| 天天添夜夜摸| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久色成人| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲男人的天堂狠狠| 一本精品99久久精品77| 看片在线看免费视频| 精品国产亚洲在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品,欧美在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 黄片大片在线免费观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 99久久成人亚洲精品观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 免费在线观看成人毛片| 国产精品永久免费网站| 日日夜夜操网爽| 亚洲色图av天堂| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美午夜高清在线| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲av免费高清在线观看| 国产高清三级在线| 亚洲美女黄片视频| 一本久久中文字幕| 99久久99久久久精品蜜桃| 美女免费视频网站| 最后的刺客免费高清国语| 国产色婷婷99| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 99视频精品全部免费 在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产麻豆成人av免费视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久亚洲精品不卡| 女警被强在线播放| 亚洲av五月六月丁香网| 久久香蕉国产精品| 老司机福利观看| 在线观看66精品国产| 哪里可以看免费的av片| 特大巨黑吊av在线直播| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美性感艳星| 国产色爽女视频免费观看| 91久久精品电影网| 69av精品久久久久久| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 动漫黄色视频在线观看| 免费观看人在逋| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 中文资源天堂在线| 色吧在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 不卡一级毛片| 91在线精品国自产拍蜜月 | 欧美性猛交黑人性爽| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美性感艳星| 国产色爽女视频免费观看| 男人舔奶头视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩欧美精品v在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级毛片女人18水好多| 男女下面进入的视频免费午夜| 男人的好看免费观看在线视频| 99久久精品一区二区三区| 91av网一区二区| 黄片大片在线免费观看| 日本熟妇午夜| 有码 亚洲区| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久香蕉精品热| 露出奶头的视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲国产高清在线一区二区三| 90打野战视频偷拍视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久久久久九九精品二区国产| 一个人免费在线观看电影| 高清在线国产一区| 欧美中文综合在线视频| 12—13女人毛片做爰片一| 18禁美女被吸乳视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品 国内视频| 99热精品在线国产| 丰满的人妻完整版| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久久久久久久中文| 国内揄拍国产精品人妻在线| 精品无人区乱码1区二区| 黄色日韩在线| 国产精品女同一区二区软件 | 成人鲁丝片一二三区免费| 久久香蕉精品热| av在线天堂中文字幕| 在线播放国产精品三级| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久性视频一级片| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久精品国产清高在天天线| 国产69精品久久久久777片| 久久国产精品影院| 日本a在线网址| 亚洲在线观看片| 成人三级黄色视频| 最后的刺客免费高清国语| 中文资源天堂在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| svipshipincom国产片| 精品人妻偷拍中文字幕| 青草久久国产| 手机成人av网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 内地一区二区视频在线| 无遮挡黄片免费观看| 男人的好看免费观看在线视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产真实乱freesex| 成年版毛片免费区| 亚洲av一区综合| 九色国产91popny在线| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本免费a在线| 99热这里只有是精品50| 国产高清激情床上av| 久久久久九九精品影院| 最新美女视频免费是黄的| 午夜精品久久久久久毛片777| 禁无遮挡网站| 国产色爽女视频免费观看| 999久久久精品免费观看国产| 99精品欧美一区二区三区四区| 女警被强在线播放| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 午夜视频国产福利| 黄色女人牲交| 91麻豆av在线| 国产野战对白在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产高清三级在线| 日韩欧美精品v在线| 一级作爱视频免费观看| 女同久久另类99精品国产91| 欧美zozozo另类| 少妇的逼水好多| 丰满人妻一区二区三区视频av | 此物有八面人人有两片| 日韩亚洲欧美综合| 久久国产精品影院| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 九九热线精品视视频播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日本 av在线| 免费在线观看亚洲国产| 国产乱人视频| 真人一进一出gif抽搐免费| www日本在线高清视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美在线黄色| 最新在线观看一区二区三区| 午夜福利高清视频| 黄片大片在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 婷婷精品国产亚洲av在线| 黄片大片在线免费观看| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品国产自在天天线| bbb黄色大片| 小说图片视频综合网站| 免费搜索国产男女视频| 亚洲最大成人中文| 51午夜福利影视在线观看| av专区在线播放| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 又爽又黄无遮挡网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产一区二区激情短视频| 日本黄色片子视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲黑人精品在线| www日本在线高清视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 啦啦啦韩国在线观看视频| 18禁国产床啪视频网站| 欧美大码av| av欧美777| 午夜激情欧美在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜影院日韩av| 中国美女看黄片| 中文字幕高清在线视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲人成网站高清观看| 88av欧美| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 免费人成视频x8x8入口观看| www日本在线高清视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 在线播放无遮挡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲精品色激情综合| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲国产精品999在线| xxxwww97欧美| 午夜免费成人在线视频| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲自拍偷在线| aaaaa片日本免费| 日韩免费av在线播放| 久久九九热精品免费| av福利片在线观看| 午夜福利在线观看吧| 日韩精品中文字幕看吧| 一个人免费在线观看电影| 国产熟女xx| 午夜福利免费观看在线| 久久久久久久久中文| 国产一区二区激情短视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 免费电影在线观看免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 国产精华一区二区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 中国美女看黄片| 黄色成人免费大全| 中国美女看黄片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产中年淑女户外野战色| 国产毛片a区久久久久| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产探花极品一区二区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产成人影院久久av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 乱人视频在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| h日本视频在线播放| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产三级中文精品| 久久久色成人| 全区人妻精品视频| 欧美成人性av电影在线观看| 久久久精品大字幕| 国产精品久久久久久精品电影| 91麻豆av在线| 精品电影一区二区在线| 免费看美女性在线毛片视频| 看免费av毛片| 最新中文字幕久久久久| 美女 人体艺术 gogo| 婷婷精品国产亚洲av| a级毛片a级免费在线| av黄色大香蕉| 91av网一区二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 搞女人的毛片| 久久中文看片网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久中文看片网| bbb黄色大片| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 日本a在线网址| 最近最新中文字幕大全电影3| 免费在线观看影片大全网站| av视频在线观看入口| 国产色爽女视频免费观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 桃红色精品国产亚洲av| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 91麻豆av在线| 此物有八面人人有两片| 禁无遮挡网站| 亚洲av五月六月丁香网| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日韩欧美国产在线观看| www日本黄色视频网| 美女 人体艺术 gogo| 一区二区三区激情视频| 一夜夜www| av专区在线播放| 久久中文看片网| 成人亚洲精品av一区二区| 午夜福利在线在线| 久久九九热精品免费| 免费无遮挡裸体视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 免费在线观看日本一区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 少妇的逼水好多| 叶爱在线成人免费视频播放| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 90打野战视频偷拍视频| 国产探花在线观看一区二区| 免费av毛片视频| 少妇的丰满在线观看| 国产乱人视频| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 变态另类丝袜制服| 亚洲国产中文字幕在线视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久性视频一级片| 一个人看的www免费观看视频| 18禁在线播放成人免费| av专区在线播放| 日韩欧美三级三区| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲真实伦在线观看| 1024手机看黄色片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美黑人欧美精品刺激| 日本三级黄在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| x7x7x7水蜜桃| ponron亚洲| 欧美乱妇无乱码| 女同久久另类99精品国产91| 老鸭窝网址在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产高潮美女av| 亚洲成人久久爱视频| 999久久久精品免费观看国产| 精品久久久久久久末码| 99国产精品一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 丁香六月欧美| www.999成人在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲国产精品合色在线| 毛片女人毛片| 亚洲精品一区av在线观看| 校园春色视频在线观看| 天堂动漫精品| 久久久久免费精品人妻一区二区| 在线a可以看的网站| 欧美zozozo另类| 麻豆成人av在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜福利在线在线| 国产成人av教育| 国产高清视频在线播放一区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 少妇熟女aⅴ在线视频| 观看美女的网站| 亚洲午夜理论影院| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲美女视频黄频| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品人妻1区二区| 国产麻豆成人av免费视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99热精品在线国产| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产色爽女视频免费观看| www.色视频.com| 亚洲人成网站在线播| 久久精品国产自在天天线| 久久草成人影院| 色吧在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 91久久精品电影网| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美黄色片欧美黄色片| 香蕉久久夜色| 高清毛片免费观看视频网站| 男人舔奶头视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| АⅤ资源中文在线天堂| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| av中文乱码字幕在线| 高清在线国产一区| 亚洲av电影在线进入| 国产精品1区2区在线观看.| 在线观看免费午夜福利视频| 久久精品国产自在天天线| 色播亚洲综合网| 国内精品美女久久久久久| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国内精品美女久久久久久| 很黄的视频免费| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 香蕉av资源在线| 久久久久久久久中文| 亚洲精华国产精华精| 好男人电影高清在线观看| 校园春色视频在线观看| 国产成人福利小说| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日韩欧美精品免费久久 | 舔av片在线| 在线a可以看的网站| 午夜激情福利司机影院| 他把我摸到了高潮在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 一进一出抽搐gif免费好疼| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 高清日韩中文字幕在线| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日本一二三区视频观看| 午夜影院日韩av| 男女那种视频在线观看| 欧美一区二区亚洲| 日韩中文字幕欧美一区二区| 又爽又黄无遮挡网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| www日本在线高清视频| 久久性视频一级片| 国产乱人视频| 在线看三级毛片| 欧美在线黄色| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 精品国产美女av久久久久小说| 少妇的逼水好多| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 婷婷亚洲欧美| 免费看十八禁软件| 亚洲一区二区三区色噜噜| 一本一本综合久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美色视频一区免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 少妇人妻精品综合一区二区 | 色综合欧美亚洲国产小说| avwww免费| 在线播放国产精品三级| 亚洲av美国av| 国产精品野战在线观看| 18禁在线播放成人免费| 岛国在线观看网站| 在线观看午夜福利视频| 日本黄大片高清| 午夜激情欧美在线| 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品 欧美亚洲| 国产成年人精品一区二区| 中文字幕高清在线视频| 香蕉丝袜av| 欧美最新免费一区二区三区 | 午夜老司机福利剧场| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久6这里有精品| 国产爱豆传媒在线观看| 在线播放国产精品三级| 我要搜黄色片| av在线蜜桃| 日本三级黄在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美一区二区亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 男插女下体视频免费在线播放| 三级国产精品欧美在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 成人三级黄色视频| 级片在线观看| 变态另类丝袜制服| 亚洲无线观看免费| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 九九在线视频观看精品| 黄色片一级片一级黄色片| 精品久久久久久,| 精品久久久久久久久久久久久| 床上黄色一级片| 99国产精品一区二区三区| 性色avwww在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久国产成人精品二区| 国产精品免费一区二区三区在线| 99热精品在线国产| 乱人视频在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 日本一二三区视频观看|