二磷酸氯喹在血型鑒定和配血中的運(yùn)用

李慶端，侯麗華

(漳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 漳州 363000)

二磷酸氯喹在血型鑒定和配血中的運(yùn)用

李慶端，侯麗華

(漳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 漳州 363000)

目的 探討紅細(xì)胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs試驗(yàn)陽(yáng)性患者血型鑒定和交叉配血不符的臨床用血策略。方法采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對(duì)患者紅細(xì)胞進(jìn)行熱放散試驗(yàn)，制備裸細(xì)胞測(cè)定血型和交叉配血。結(jié)果 利用20%二磷酸氯喹處理過(guò)的患者裸細(xì)胞正定型與反定型血型相符；交叉次側(cè)為陰性。結(jié)論 采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對(duì)患者紅細(xì)胞進(jìn)行熱放散試驗(yàn)制備裸細(xì)胞鑒定血型和交叉配血是對(duì)紅細(xì)胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs試驗(yàn)陽(yáng)性患者鑒定血型和交叉配血的一種補(bǔ)救方法，為解決臨床疑難輸血多一條路徑。

血型鑒定；交叉配血；熱放散試驗(yàn)；抗體篩查

臨床輸血的安全主要取決于正確的血型鑒定和交叉配血以及不規(guī)則抗體的篩查；在實(shí)際操作中，患者自身紅細(xì)胞和血漿的問(wèn)題干擾血型的正確鑒定和交叉配血，給臨床用血提出挑戰(zhàn)，為了解決這類(lèi)問(wèn)題，確保安全，必須拓開(kāi)思路尋求合符臨床安全輸血的新對(duì)策。

1 資料與方法

1.1 2011年至2016年我院紅細(xì)胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs試驗(yàn)陽(yáng)性患者21例。

1.2 試劑來(lái)源 血型鑒定卡和Coombs檢測(cè)卡由德國(guó)Diagnostic Grifols，S.A公司生產(chǎn)提供，ABO正定型血型單克隆抗體、反定型檢測(cè)用ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞由長(zhǎng)春博迅生物制品有限公司生產(chǎn)提供，凝聚胺試劑盒由合肥天一生物技術(shù)研究所提供，抗體篩查標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ（三人份O紅細(xì)胞）由上海血液生物醫(yī)藥制品有限公司提供。20%二磷酸氯喹[1]：（自備）取二磷酸氯喹20g，加生理鹽水至100ml，用 1mol/L NaOH 調(diào) pH 至 5.1，2～8℃冷藏備用。

1.3 儀器德國(guó)Diagnostic Grifols，S.A公司生產(chǎn)提供的卡式離心機(jī)和卡式孵育儀；可調(diào)控水浴箱由上海醫(yī)療器械有限公司提供，血庫(kù)專(zhuān)用離心機(jī)有湖南湘雅醫(yī)療器械有限公司提供。

1.4 方法

1.4.1 卡式血型鑒定、試管法血型鑒定、凝聚胺交叉配血（MPT）、Coombs凝膠微柱交叉配血（MGT）、不規(guī)則抗體篩查、直接抗人球蛋白檢測(cè)均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4.2 裸細(xì)胞制備患者EDTA-K3抗凝紅細(xì)胞1ml加入4ml20%二磷酸氯喹混勻置45℃水浴箱中，每隔10s鐘混勻一次，孵育30min趁熱1000g離心3min去除二磷酸氯喹再用生理鹽清洗4次備用。取25μl配成2.5%的紅細(xì)胞懸液直接涂片高倍鏡下鏡檢，紅細(xì)胞成單個(gè)分散；用Coombs凝膠微柱做直接抗人球蛋白試驗(yàn)，結(jié)果陰性說(shuō)明裸細(xì)胞制備成功。

2 結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs試驗(yàn)陽(yáng)性患者21例的血型不規(guī)則抗體檢測(cè)均為陰性；用于交叉配血的供血血型不規(guī)則抗體檢測(cè)均為陰性。

2.2 紅細(xì)胞自凝患者13例，EDTA-K3抗凝血未經(jīng)處理直接檢測(cè)血型，正反定型不符12例，經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過(guò)的患者裸細(xì)胞正定型與反定型血型相符13例（見(jiàn)表1）；其中4例臨床需用血的，未經(jīng)處理直接用凝聚胺法和微柱凝膠法配血，凝聚胺法4例均出現(xiàn)次側(cè)凝聚，微柱凝膠法出現(xiàn)1例次側(cè)凝聚；經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過(guò)的患者裸細(xì)胞做次側(cè)管交叉配血，凝聚胺法和微柱凝膠法均未出現(xiàn)凝集，4例患者輸血后均未出現(xiàn)不良反應(yīng)（見(jiàn)表 2）。

表1 13例紅細(xì)胞自凝患者紅細(xì)胞處理前后血型鑒定結(jié)果

2.3 直接抗人球蛋白Coombs試驗(yàn)陽(yáng)性患者21例，EDTA-K3抗凝血未經(jīng)處理直接檢測(cè)血型，正反定型不符2例，經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過(guò)的患者裸細(xì)胞正定型與反定型血型相符21例；未經(jīng)處理直接用凝聚胺法和微柱凝膠法配血，凝聚胺法3例均出現(xiàn)次側(cè)凝聚，微柱凝膠法21例均出現(xiàn)次側(cè)凝聚；經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過(guò)的患者裸細(xì)胞做次側(cè)交叉配血，凝聚胺法和微柱凝膠法均未出現(xiàn)凝集，21例患者輸血后均未出現(xiàn)不良反應(yīng) （見(jiàn)表2）。

3 討論

利用抗原抗體結(jié)合的可逆性，通過(guò)改變溫度和PH的方法使抗體從結(jié)合的紅細(xì)胞表面解脫，暴露出原有血型抗原。采用20%二磷酸氯喹在45℃環(huán)境下對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行放散洗滌，充分去除紅細(xì)胞表面的黏附物如紅細(xì)胞自身IgG抗體和吸附在紅細(xì)胞膜上冷凝素，最大限度上保持紅細(xì)膜的完整和原有血型抗原的活性，用處理后的紅細(xì)胞再進(jìn)行血型正定型，結(jié)果可靠。13例紅細(xì)胞自凝患者紅細(xì)胞經(jīng)處理后均能排除紅細(xì)胞自凝的干擾，ABO正定型與反定型相符，且患者血漿在4℃和37℃環(huán)境下不與O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞發(fā)生凝聚反應(yīng)，可做出血型鑒定；同樣用處理后的紅細(xì)胞做交叉配血可以排除直接抗人球蛋白Coombs試驗(yàn)陽(yáng)性患者的紅細(xì)胞對(duì)次側(cè)配血的干擾。紅細(xì)胞自凝機(jī)理復(fù)雜，出現(xiàn)紅細(xì)胞自凝的患者常伴有感染、自身免疫性疾病[8]、惡性腫瘤、妊娠、藥物致敏[2]或化學(xué)損傷等因素存在，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)或膜外周的電子云改變，細(xì)胞之間容易發(fā)生黏連；或因血漿中存在大量異質(zhì)性[10]大分子蛋白質(zhì)（多數(shù)為IgM分子）吸附在紅細(xì)胞膜上，血液離體后置于常溫下易引發(fā)的紅細(xì)胞自凝或多凝[7]；冷凝集素的存在是造成血型鑒定困難的主要原因之一[3]。另一方面這些蛋白分子可作為一種異抗原致敏機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)自身紅細(xì)胞的自身抗體，患者血清中含有大量游離的自身抗體在體外可使細(xì)胞凝聚[2]，干擾血型的正定型。自身抗體的存在導(dǎo)致患者直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，這也是交叉配血時(shí)微柱法次管出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的主要原因[3，5，6]。 細(xì)菌、腫瘤或藥物的代謝產(chǎn)物黏附或作用紅細(xì)胞膜表面，使紅細(xì)胞抗原性發(fā)生改變，出現(xiàn)類(lèi)血型抗原物質(zhì)如類(lèi)B抗原，與血型鑒定試劑中相應(yīng)的抗血清反應(yīng)，出現(xiàn)凝聚反應(yīng)，干擾血型正定型鑒定[4，6，9，11]。 且這些代謝產(chǎn)物在體內(nèi)多數(shù)為分子量較小，以半抗原形式存在，黏附在紅細(xì)表面，在血流的沖擊下不易使紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)，在體外適當(dāng)?shù)臈l件（靜置、離心或其他介質(zhì)）下出現(xiàn)凝聚反應(yīng)，干擾血型正定型和次側(cè)配血。采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對(duì)患者紅細(xì)胞進(jìn)行熱放散和生理鹽水充分清洗，其目的是徹底去除紅細(xì)胞表面吸附的自身抗體和外來(lái)物質(zhì)如藥物分子、腫瘤、細(xì)菌代謝產(chǎn)物等，充分暴露其原始血型抗原。本實(shí)驗(yàn)中，需要輸血的25例患者的血型不規(guī)則抗體均為陰性，所用于交叉的供者血型不規(guī)則抗體均為陰性，可排除因血液中存在血型不規(guī)則抗體引起的交叉配血不符[12，14]。用處理后的紅細(xì)胞做血型正定型和交叉次側(cè)配血，能達(dá)到預(yù)期的結(jié)果，血型鑒定正反相符，交叉配血主次相容，輸血后無(wú)出現(xiàn)不良反應(yīng)[13，15]。用20%二磷酸氯喹處理后的紅細(xì)胞做血型正定型和交叉配血試驗(yàn)可以減少因血型鑒定出現(xiàn)正反定型不合和交叉配血主次側(cè)不符的困惑。本方法簡(jiǎn)單實(shí)用，成本低，可作為解決日常臨床疑難輸血另一佐證。

表2 患者紅細(xì)胞處理前后次側(cè)交叉配血結(jié)果

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R457.1+1

A

1674-1129(2017)05-0812-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.064

2017-04-17；

2017-08-09)