核酸檢測法應(yīng)用于血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒檢測結(jié)果分析

田家強(qiáng)　楊麗萍

【摘要】 目的 對核酸檢測法應(yīng)用于血液標(biāo)本內(nèi)乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）檢測的結(jié)果進(jìn)行探究分析。方法 23465份無償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本， 實(shí)施酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和核酸檢測法（HBV-DNA）， 篩查HBV感染情況。對兩種檢測方法的結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 核酸檢測法的特異性和敏感程度均優(yōu)于酶聯(lián)免疫吸附法（P<0.05）。核酸檢測法漏診情況少于酶聯(lián)免疫吸附法， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；核酸檢測法窗口期為（20.9±4.2）d， 少于酶聯(lián)免疫吸附法（35.8±6.3）d（P<0.05）。結(jié)論 將酶聯(lián)免疫吸附法和核酸檢測法聯(lián)用可以減少漏診情況， 減少窗口期， 此外核酸檢測法的特異性和敏感程度很好， 可以很好的檢測乙肝病毒使得所輸血液的安全性得到保障。

【關(guān)鍵詞】 核酸檢測法；乙型肝炎病毒；檢測結(jié)果；血液標(biāo)本

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.023

目前檢測乙肝病毒最常用的方法是酶聯(lián)免疫吸附法， 利用血清進(jìn)行檢測[1]。但是核酸檢測法更加可靠， 更為方便， 近年被廣泛應(yīng)用于血液篩查中[2]。本次研究利用酶聯(lián)免疫吸附法和核酸檢測法對獻(xiàn)血站采集的血液進(jìn)行檢測， 具體情況如下所示。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 將本站收集的無償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本23465份， 進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法和核酸檢測法。

1. 2 方法 每份血液標(biāo)本都通過正定血型的初篩以及干化學(xué)檢測法檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）， 所有獻(xiàn)血者符合實(shí)驗(yàn)要求。將采集的每份血液標(biāo)本分裝于3個(gè)試管中， 2個(gè)試管進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法檢測， 所需器材為抗凝真空管。另一個(gè)試管進(jìn)行核酸檢測法， 所需器材為分離膠抗凝真空管。將每個(gè)試管上都貼唯一性條形碼， 試管上的條形碼與血袋標(biāo)簽上的條形碼一致， 通過條形碼能夠讀取其有關(guān)血液的具體信息。利用離心機(jī)將血液現(xiàn)場離心然后存放于4℃的冰箱內(nèi)， 需要在2 d內(nèi)完成檢測。

1. 2. 1 儀器和相關(guān)試劑 酶聯(lián)免疫吸附法需要儀器為哈美頓STAR全自動加樣儀（瑞士）， FAME24/20型全自動酶免分析儀；HBV-DNA檢測需要用到的儀器為上海科華核酸檢測系統(tǒng)：Hamilton MICROLAB STAR全自動混樣提取儀、ABI 7500核酸擴(kuò)增檢測儀；低溫離心機(jī)。酶免試劑：HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測試劑盒（上海科華、北京萬泰）；核酸檢測試劑：乙肝病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1型）核酸檢測試劑（PCR-熒光法）（上海科華）。以上所有試劑均在有效期內(nèi)使用。乙肝兩對半檢測也用酶免試劑， 由棗莊市立三院進(jìn)行檢測。

1. 2. 2 檢測方法 所有進(jìn)行檢測的血液標(biāo)本依據(jù)國家《獻(xiàn)血者健康要求》[3]按衛(wèi)計(jì)委要求進(jìn)行初檢、復(fù)檢。所有標(biāo)本進(jìn)行ALT速率法檢測、乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-HCV、抗-HIV和梅毒的酶聯(lián)法檢測， 去掉所有陽性標(biāo)本后， 再進(jìn)行血液標(biāo)本核酸檢測法檢測。如果核酸檢測結(jié)果呈反應(yīng)性再進(jìn)行HBV血清標(biāo)志物檢測檢測， HBV血清標(biāo)志物：HBsAg、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2 檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩種方法的特異性和敏感程度比較 核酸檢測法的特異性和敏感程度均優(yōu)于酶聯(lián)免疫吸附法（P<0.05）。見表1。

2. 2 兩種方法的漏診情況和窗口期比較 核酸檢測法漏診情況少于酶聯(lián)免疫吸附法， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；核酸檢測法窗口期為（20.9±4.2）少于酶聯(lián)免疫吸附法（35.8±

6.3）（P<0.05）。見表2。

3 討論

乙肝病毒傳播的主要方式為血液傳播， 我國是乙肝病毒感染的多發(fā)國家， 對獻(xiàn)血人群的血液標(biāo)本進(jìn)行乙肝病毒檢測極為重要， 對無償獻(xiàn)血人群的血液進(jìn)行檢測也可阻止乙肝病毒的傳播[4-6]。酶聯(lián)免疫吸附法是最為多見的檢測乙肝病毒的方法， 是進(jìn)行臨床診斷和血液篩查的主要手段[7]。由于醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展， 近年來核酸檢測法也不斷被應(yīng)用于血液篩查工作中， 此方法更加方便可信， 也是對酶聯(lián)免疫吸附法的一種補(bǔ)充[8]。

由上述研究結(jié)果可以得知， 核酸檢測法的特異性和敏感程度優(yōu)于酶聯(lián)免疫吸附法， 其漏診情況和窗口期少于酶聯(lián)免疫吸附法檢測， 核酸檢測法的窗口期相當(dāng)于酶聯(lián)免疫吸附法檢測的1/2。此外兩種方法的檢測結(jié)果有一定的差異， 在進(jìn)行研究的血液標(biāo)本中有10份血液標(biāo)本經(jīng)過酶聯(lián)免疫吸附法檢測為陽性， 經(jīng)過核酸檢測法為陰性， 初步判斷是由于乙肝患者使用藥物血液中有HBsAg殘留導(dǎo)致檢測的差異；有15份血液標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫檢測法檢測為陰性， 經(jīng)核酸檢測法檢測為陽性， 初步判斷為乙肝病毒感染早期， 酶聯(lián)免疫吸附法不能檢測到而核酸檢測可以檢測到[9， 10]。

綜上所述， 酶聯(lián)免疫吸附法與核酸檢測法在檢測結(jié)果存在差異性， 但這兩種方法具有互補(bǔ)性， 此外核酸檢測法相對于酶聯(lián)免疫吸附法檢測更加可靠， 減少漏診情況， 可以有效減少乙肝病毒的傳播， 可以將核酸檢測法廣泛應(yīng)用于血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒檢測。

參考文獻(xiàn)

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[收稿日期：2017-05-15]endprint