表面等離子體共振-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究進(jìn)展

張一丁， 徐姝婷， 白 玉， 劉虎威

(北京大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院分析化學(xué)研究所，北京 100871)

1 前言

1902年,Wood等報(bào)道金屬光柵在受到連續(xù)波長(zhǎng)光照時(shí)產(chǎn)生的反常衍射現(xiàn)象[1]之后，Stern等在后續(xù)工作里研究了金屬價(jià)電子受光照而產(chǎn)生共振的條件[2]，并將其命名為表面等離子體共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)。SPR是一種在分子間相互作用研究中廣泛應(yīng)用的分析技術(shù)，它利用金屬表面的表面等離子體波(Surface Plasmon Wave，SPW)與檢測(cè)光路間相互作用實(shí)現(xiàn)金屬表面狀態(tài)的監(jiān)測(cè)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)表面反應(yīng)狀態(tài)的監(jiān)測(cè)。當(dāng)其他條件相同時(shí)，SPR信號(hào)的改變直接源于芯片表面附近折射率的變化。若應(yīng)用于分子間相互作用的研究，SPR可認(rèn)為是一種質(zhì)量敏感型檢測(cè)方式，即其信號(hào)變化主要受到芯片表面所結(jié)合物質(zhì)的質(zhì)量變化影響。這個(gè)特點(diǎn)帶來(lái)了SPR的最大優(yōu)勢(shì)，即可以進(jìn)行非破壞性、無(wú)標(biāo)記實(shí)際分析。1983年，Liedberg等[3]首次將SPR傳感器應(yīng)用于IgG抗原抗體相互作用體系的研究，此后SPR技術(shù)在生物傳感領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，研究目標(biāo)包括相互作用反應(yīng)的分析、特定目標(biāo)化合物的檢測(cè)以及藥物高通量篩選等[4 - 9]，可以進(jìn)行生物大分子間的相互作用和涉及小分子相互作用體系的檢測(cè)。特別地，由于相互作用的反應(yīng)往往具備一定的特異性，因此SPR法也可用于從較為復(fù)雜的樣品基質(zhì)中快速分析特定目標(biāo)化合物，如與疾病相關(guān)的標(biāo)志物[10 - 12]等。但是SPR的質(zhì)量敏感特點(diǎn)又會(huì)帶來(lái)問(wèn)題，即樣品定性分析能力欠缺。在典型的SPR儀器和分析方法中，結(jié)果中觀測(cè)到的是出射光性質(zhì)的變化，對(duì)應(yīng)的是相互作用過(guò)程導(dǎo)致的傳感芯片表面附近的物質(zhì)質(zhì)量變化及折射率變化，難以獲得關(guān)于被分析物分子結(jié)構(gòu)的相關(guān)信息。此時(shí)，若分析目標(biāo)體系中存在著未知化合物，則傳統(tǒng)SPR法只能通過(guò)使用特異性相互作用過(guò)程來(lái)識(shí)別出特定目標(biāo)化合物，除此之外難以對(duì)未知樣品進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，這為SPR法研究領(lǐng)域的拓展帶來(lái)了困難。因此，作為典型的具備強(qiáng)大定性分析能力的分析技術(shù)，質(zhì)譜法(Mass Spectrometry，MS)與SPR的聯(lián)用獲得了重視。

質(zhì)譜法可以提供有關(guān)樣品分子結(jié)構(gòu)重要信息，能夠很好與SPR技術(shù)形成互補(bǔ)。SPR-MS聯(lián)用，可以有效地在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)或者先后獲得相互作用反應(yīng)的有關(guān)物理化學(xué)數(shù)據(jù)，以及參與相互作用反應(yīng)的物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息，進(jìn)而用于確定樣品結(jié)構(gòu)。這樣的應(yīng)用前景大大促進(jìn)了SPR-MS聯(lián)用的有關(guān)研究，在最早的SPR與MS聯(lián)用的嘗試[13]后，科研工作者不斷努力開(kāi)發(fā)了多種聯(lián)用手段，取得了一定成就。

在儀器聯(lián)用有關(guān)研究中，兩種或多種分析儀器之間的接口問(wèn)題是主要難點(diǎn)。對(duì)于SPR-MS聯(lián)用而言，接口問(wèn)題主要表現(xiàn)為MS離子化方法的選擇和發(fā)展。由于SPR-MS聯(lián)用的目的在于鑒定參與相互作用的反應(yīng)物，這意味著需要選擇或者開(kāi)發(fā)合適的離子化方法，有效地對(duì)經(jīng)過(guò)SPR分析后的樣品進(jìn)行MS分析，其離子化對(duì)象既包括SPR分析過(guò)程中傳感芯片表面結(jié)合的物質(zhì)、流通溶液中未結(jié)合到芯片表面的物質(zhì)、結(jié)合后被洗脫的物質(zhì)，也包括芯片表面修飾的物質(zhì)。這些目標(biāo)物及其所處的狀態(tài)為SPR-MS聯(lián)用接口的開(kāi)發(fā)指明了方向。目前報(bào)道的SPR-MS聯(lián)用方法中，所使用的離子化方法主要有三類(lèi)，分別是基質(zhì)輔助激光解吸離子化(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization，MALDI)、電噴霧離子化(Electrospray Ionization，ESI)以及敞開(kāi)式離子化(Ambient Ionization)方法。以下即以離子化方法為分類(lèi)依據(jù)，概述SPR-MS聯(lián)用的有關(guān)研究進(jìn)展。

2 基于MALDI的SPR-MS聯(lián)用方法

使用MALDI法是較為簡(jiǎn)單的SPR-MS聯(lián)用方式。通過(guò)MALDI聯(lián)用SPR與MS是SPR-MS研究中最早發(fā)展的方法，至今也占據(jù)著重要的地位，也有一些綜述文章涉及了對(duì)SPR-MALDI-MS聯(lián)用方法的總結(jié)[14 - 16]。在它們的基礎(chǔ)上，本文總結(jié)現(xiàn)有的SPR-MALDI-MS典型應(yīng)用，列于表1中。

表1 目前報(bào)道的典型SPR-MALDI-MS聯(lián)用應(yīng)用

(續(xù)表1)

AnalytesLimit of detectionRemarksReferenceCalmodulin140 fmolPerforming MALDI after elution and the enzymolysis of the samples captured on the sensor chip[36]Myoglobin,DNA-binding protein ParR4 ng-[37]Tagged SHP2 tyrosine phosphatase10-20 fmolPerforming MALDI after elution and the enzymolysis of the samples captured on the sensor chip[38]A33 epithelial antigen14 ngUsing cuvette-based SPR instruments[39]Lysozyme50 fmolPerforming MALDI after elution and the enzymolysis of the samples captured on the sensor chip[40]14-3-3 proteins7 ng-[41]Protease inhibitors0.13 ngScreening and identification of enzyme inhibitors by SPR-MS[42]

圖1 首個(gè)報(bào)道的SPR-MS聯(lián)用工作原理示意圖(經(jīng)許可后引用自[17]，版權(quán)所有 1999 American Chemical Society)Fig.1 Illustration of the first published work of coupling SPR with MS(adapted with permission from [17],Copyright 1999 American Chemical Society)

由表中可以看到，SPR-MALDI-MS聯(lián)用有兩種思路，其一是使用MALDI直接分析處于傳感芯片表面的樣品；其二是使用MALDI分析從傳感芯片表面洗脫、處理后的樣品。而第一種思路又包括直接分析SPR傳感芯片表面結(jié)合的物質(zhì)，或在芯片表面進(jìn)行原位酶解反應(yīng)后再分析酶解產(chǎn)物兩種方法。其中，使用MALDI直接分析芯片表面結(jié)合的物質(zhì)，最初報(bào)道的SPR-MALDI-MS聯(lián)用即采用這種方案[17]，其原理示意圖如圖1所示。在此類(lèi)SPR與MALDI-MS直接聯(lián)用的方法中，SPR傳感芯片本身即可以用作MALDI的樣品基板。實(shí)驗(yàn)中可在SPR分析完成以后取出其傳感芯片，在其表面涂布MALDI所需基質(zhì)，干燥后即可裝入MALDI儀器進(jìn)行分析。如前所述，SPR的分析過(guò)程在芯片表面完成，其中樣品可以幾乎無(wú)損地固定于芯片表面。同時(shí)，對(duì)于MALDI過(guò)程而言，SPR傳感芯片可視作惰性的剛性材料，這使得SPR分析后的樣品狀態(tài)特別適合于后續(xù)MALDI分析。在儀器方面，SPR-MALDI-MS聯(lián)用的接口問(wèn)題表現(xiàn)為將傳感芯片送入MALDI樣品室的過(guò)程中對(duì)儀器的要求，主要為對(duì)MALDI靶板進(jìn)行一些改動(dòng)以固定SPR芯片，或者將SPR芯片進(jìn)行改動(dòng)以使之便于送入MALDI樣品室。這使得此類(lèi)聯(lián)用可以較為簡(jiǎn)便地實(shí)現(xiàn)，若使用大氣壓MALDI，則聯(lián)用更為簡(jiǎn)易。在常見(jiàn)的SPR芯片形式之外，也有一些研究使用了其他種類(lèi)的SPR傳感芯片(及儀器)，例如圖2中通過(guò)SPR流通池側(cè)壁的可拆卸式螺栓實(shí)現(xiàn)樣品從SPR檢測(cè)池到MALDI靶板的轉(zhuǎn)移。部分情況下，SPR傳感芯片表面所結(jié)合的樣品難以通過(guò)直接MALDI分析實(shí)現(xiàn)離子化(比如基質(zhì)涂布后共結(jié)晶狀態(tài)不佳、樣品在芯片表面結(jié)合能力過(guò)強(qiáng)、樣品離子化效率低等)，此時(shí)可以在芯片表面進(jìn)行原位酶解反應(yīng)，再涂布基質(zhì)對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行MALDI分析。一個(gè)典型的SPR-芯片表面酶解-直接MALDI分析的聯(lián)用過(guò)程可見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道[28]。相對(duì)于SPR-MALDI直接聯(lián)用，此類(lèi)方法提高了MS離子化效率，并使得結(jié)果更易解析。除此之外，為了進(jìn)一步改善MS分析效果，有時(shí)需要對(duì)樣品進(jìn)行更多的處理，例如酶解、反應(yīng)、除鹽、濃縮等，此時(shí)可以將芯片表面所結(jié)合物質(zhì)洗脫、收集、處理后再進(jìn)行MALDI分析。采用這種方式進(jìn)行SPR-MALDI-MS聯(lián)用的典型示意圖如圖3所示。在以圖3為代表的SPR-MALDI聯(lián)用方式中，在SPR分析完成后，均將芯片表面所結(jié)合的樣品洗脫收集，進(jìn)行一定的處理后再進(jìn)行MALDI點(diǎn)樣與分析。這使得SPR分析步驟與MALDI分析步驟相對(duì)獨(dú)立，很大程度上避免了兩者之間的相互干擾，例如芯片表面樣品狀態(tài)不適合MALDI分析，以及直接聯(lián)用所需的儀器改動(dòng)等。但是，這也帶來(lái)了SPR-MALDI-MS聯(lián)用中的最大問(wèn)題，即兩者的聯(lián)用處于離線模式。事實(shí)上，無(wú)論是直接聯(lián)用、芯片表面酶解后聯(lián)用還是樣品洗脫后聯(lián)用，SPR-MALDI-MS聯(lián)用均處于離線模式，SPR分析步驟與MALDI-MS步驟本質(zhì)上是兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。離線聯(lián)用會(huì)導(dǎo)致分析步驟復(fù)雜化，并且MALDI分析時(shí)樣品所處狀態(tài)與SPR分析時(shí)容易出現(xiàn)較大差異，使得分析結(jié)果的可靠性降低。這也是至今仍然限制SPR-MALDI-MS發(fā)展的主要問(wèn)題之一。

圖2 通過(guò)螺栓轉(zhuǎn)移樣品的SPR-MALDI-MS聯(lián)用工作原理示意圖(經(jīng)許可后引用自[24]，版權(quán)所有2005 American Chemical Society)Fig.2 Illustration of coupling SPR with MALDI-MS using a transfer pin(adapted with permission from [24],Copyright 2005 American Chemical Society)

圖3 將SPR芯片表面樣品洗脫收集后進(jìn)行MALDI分析的原理示意圖(經(jīng)許可后引用自[37]，版權(quán)所有1998 American Chemical Society)Fig.3 Schematic diagram of coupling SPR with MALDI-MS after sample elution(adapted with permission from [37],Copyright 1998 American Chemical Society)

3 基于ESI的SPR-MS聯(lián)用方法

SPR法是一種連續(xù)輸送樣品溶液的分析方法，其樣品性質(zhì)與高效液相色譜(HPLC)、毛細(xì)管電泳(CE)等存在著相近之處，這意味著HPLC-MS與CE-MS等發(fā)展過(guò)程中所使用的離子化方法可以借鑒到SPR-MS中。當(dāng)代HPLC-MS與CE-MS中，ESI類(lèi)離子化方法占據(jù)著主導(dǎo)地位，多數(shù)商品化接口裝置均依據(jù)ESI原理而開(kāi)發(fā)。同樣，ESI也是實(shí)現(xiàn)SPR-MS聯(lián)用的重要方法。SPR-ESI-MS聯(lián)用的研究進(jìn)展在前述綜述[14 - 16]之中已有所總結(jié)，本文在其基礎(chǔ)上，補(bǔ)充總結(jié)如表2所示。

表2 目前報(bào)道的典型SPR-ESI-MS聯(lián)用應(yīng)用

(續(xù)表2)

AnalytesLimit ofdetectionRemarksReferenceDNA binding proteins20 fmolSPR imaging instruments were used,and ESI-MS were performed after elution of the captured samples[50]Ciprofloxacinppb levelDetecting antibiotic metabolites by SPR,then LC-MS were done offline[51]Paralytic shellfish poisonsppb levelAutomatic analysis was realized[52]Ricin--[53]Sodium channel subunit0.5 ng-[54]Nterferon-γ320 fmolOnline elution and enzymolysis followed by LC-ESI-MS were done automatically[55]Isoflavonids in Radix Astragali-Online SPR-HPLC-MS system were developed,samples captured on the SPRsensor chip could by elu-ted and analyzed automatically[56]Iridoids,lignans,flavonoids,and phenolic acids in Eucommia ulmoides bark-Online SPR-HPLC-MS system were developed,samples captured on the SPR sensor chip could by elu-ted and analyzed automatically[57]Bioactive compound in Rheum officinale<50 nmol·L-1-[58]

與MALDI法不同，ESI針對(duì)的是溶液相的樣品，因此它不能直接用于分析SPR傳感芯片表面的樣品。使用ESI法聯(lián)用SPR與MS多數(shù)需要進(jìn)行芯片表面樣品的洗脫，然后進(jìn)行ESI-MS的分析。一個(gè)典型的SPR-ESI-MS聯(lián)用方法示意圖如圖4所示。圖4所示的研究工作中，先通過(guò)Biacore X儀器完成樣品的SPR分析，將活性物質(zhì)捕集在芯片表面，此后進(jìn)行芯片表面的酶解。完成后，將酶解產(chǎn)物洗脫并用一個(gè)HPLC預(yù)柱再次捕集，再將它連入HPLC-ESI-MS系統(tǒng)進(jìn)行ESI分析?？梢?jiàn)，該方法使用了芯片表面酶解后洗脫，再進(jìn)行ESI分析的方式，SPR與MS的聯(lián)用處于離線模式。此后，有研究人員在此思路上繼續(xù)發(fā)展，通過(guò)使用閥系統(tǒng)連接SPR與LC-MS的液路，部分實(shí)現(xiàn)了二者的在線聯(lián)用，其方法示意圖如圖5所示。

圖4 典型的SPR-ESI-MS聯(lián)用原理示意圖(經(jīng)許可后引用自[43]，版權(quán)所有2000 American Chemical Society)Fig.4 Schematic diagram of coupling SPR with ESI-MS(adapted with permission from [43],Copyright 2000 American Chemical Society)

圖5 SPR-nanoLC-ESI-MS在線聯(lián)用原理示意圖(經(jīng)許可后引用自[51]，版權(quán)所有2008 American Chemical Society)Fig.5 Schematic diagram of online coupling SPR with nanoLC-ESI-MS(adapted with permission from[51],Copyright 2008 American Chemical Society)

圖5所示中使用了閥系統(tǒng)，將SPR分析液路、捕集環(huán)和捕集柱、LC-MS的液路連接為一個(gè)整體，可通過(guò)閥實(shí)現(xiàn)樣品的SPR分析與捕集、MS分析的切換，不再需要手工將捕集柱從SPR系統(tǒng)拆下并轉(zhuǎn)移至LC-MS系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了SPR與ESI-MS的在線聯(lián)用。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步在系統(tǒng)中引入了在線酶解等裝置，實(shí)現(xiàn)了SPR樣品的洗脫、收集、酶解與ESI-MS分析，具體可見(jiàn)文獻(xiàn)方法[55]。

SPR-ESI-MS是除了MALDI法之外重要的SPR-MS聯(lián)用方法。可以看到，由于ESI源本身針對(duì)連續(xù)輸送的液態(tài)樣品設(shè)計(jì)，因此它可以較好地適配SPR的分析液路。但由于ESI不適合針對(duì)芯片表面開(kāi)展分析，SPR-ESI-MS聯(lián)用多通過(guò)洗脫后再進(jìn)樣的方式實(shí)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)多年發(fā)展已經(jīng)在一定程度上實(shí)現(xiàn)了SPR與ESI-MS的在線聯(lián)用。但SPR分析中往往需要模擬生理環(huán)境，因此經(jīng)常使用較高濃度的非揮發(fā)性鹽來(lái)構(gòu)成緩沖溶液，此類(lèi)樣品會(huì)造成ESI過(guò)程的離子化抑制和離子源污染等問(wèn)題，因此應(yīng)盡量避免直接將含有非揮發(fā)性鹽的樣品溶液引入ESI-MS系統(tǒng)。這也是SPR-ESI-MS多采用洗脫-捕集后重新進(jìn)樣分析的重要原因。盡管實(shí)現(xiàn)了在線SPR與MS聯(lián)用，但洗脫-捕集后重新進(jìn)樣分析的策略使得HPLC等額外的儀器系統(tǒng)成為必要，這使得SPR-ESI-MS有關(guān)方法和儀器系統(tǒng)均較為復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)步驟和耗時(shí)也相對(duì)較長(zhǎng)。

4 基于敞開(kāi)式離子化方法的SPR-MS聯(lián)用方法

圖6 SPR-DART-MS聯(lián)用接口裝置示意圖(經(jīng)許可后引用自[59]，版權(quán)所有2015 American Chemical Society)Fig.6 Schematic diagram of the SPR-DART-MS interface(adapted with permission from [59],Copyright 2015 American Chemical Society)

在上述基于MALDI和ESI的SPR-MS聯(lián)用方法之外，近年來(lái)還有一些其他的SPR-MS聯(lián)用方式，主要使用敞開(kāi)式離子化方法。其中，有利用低溫等離子體類(lèi)敞開(kāi)式離子化方法中的實(shí)時(shí)直接分析離子化(Direct Analysis in Real Time，DART)和介質(zhì)阻擋放電離子化(Dielectric Barrier Discharge Ionization，DBDI)實(shí)現(xiàn)SPR-DART-MS和SPR-DBDI-MS聯(lián)用的方法，也有通過(guò)在SPR芯片表面直接實(shí)現(xiàn)電噴霧的SPR-MS聯(lián)用方法。2015年，Zhang等報(bào)道了基于DART源的SPR-MS聯(lián)用方法[59]。DART是一種典型的基于低溫等離子體的敞開(kāi)式離子源，作者發(fā)展了一種主要基于噴霧針和DART源的SPR-MS聯(lián)用接口裝置，其示意圖如圖6所示。該接口的設(shè)計(jì)中，作者在DART源和質(zhì)譜儀入口之間放置了用于ESI的噴霧針，并將該噴霧針連接到SPR的分析液路以及霧化氣管路。如此，樣品溶液在經(jīng)過(guò)SPR儀器分析后，將進(jìn)入噴霧針形成霧化的液滴，繼而在飛行過(guò)程中受到DART源作用發(fā)生離子化，最終進(jìn)行MS分析。該裝置在敞開(kāi)式環(huán)境下操作，較好地利用了DART源能夠耐受復(fù)雜樣品基質(zhì)的特點(diǎn)，成功地實(shí)現(xiàn)了SPR與MS的實(shí)時(shí)、在線、持續(xù)、直接聯(lián)用，既能夠用于分析SPR液路中由溶液輸送的樣品，也可以分析芯片表面捕集后洗脫下來(lái)的樣品，并且能夠較好地耐受樣品溶液中的非揮發(fā)性物質(zhì)。該接口裝置在MALDI與ESI之外提出了新的SPR與MS聯(lián)用的思路，解決了MALDI法難以實(shí)現(xiàn)在線聯(lián)用、ESI法對(duì)非揮發(fā)性物質(zhì)耐受性差的問(wèn)題，操作直觀、簡(jiǎn)便。在應(yīng)用DART源以后的后續(xù)研究中，同一課題組繼續(xù)發(fā)展了基于DBDI源的SPR-DBDI-MS聯(lián)用接口裝置[60]，利用另一種重要的低溫等離子體類(lèi)敞開(kāi)式離子源DBDI，同樣成功實(shí)現(xiàn)了SPR與MS的實(shí)時(shí)在線直接聯(lián)用，具有與使用DART源時(shí)相近的分析性能與更好的鹽耐受性。

在DART源與DBDI源之外，Joshi等報(bào)道了另一種基于敞開(kāi)式離子化的SPR-MS聯(lián)用方法[61]。該方法并未使用獨(dú)立的離子源裝置，而是利用SPR傳感芯片直接形成電噴霧。其方法原理示意圖如圖7所示。在該方法中，作者利用SPR芯片具有導(dǎo)電性金屬薄層表面的特點(diǎn)，直接形成電噴霧。在SPR分析完成后，取出傳感芯片，與高壓電源連通。此后，在芯片表面滴加噴霧溶劑，以芯片的一個(gè)角對(duì)準(zhǔn)質(zhì)譜儀入口并略微傾斜芯片。此時(shí)，噴霧溶劑可以起到對(duì)芯片表面結(jié)合物質(zhì)進(jìn)行洗脫、富集的作用，并集中到芯片正對(duì)質(zhì)譜儀入口的角落。當(dāng)接通高壓電源時(shí)，噴霧溶劑即可在芯片角落處形成電噴霧，實(shí)現(xiàn)SPR與MS的聯(lián)用。盡管仍然處于離線模式，但該方法成功實(shí)現(xiàn)了SPR與MS的直接聯(lián)用，不需要額外儀器裝置，方法有效、簡(jiǎn)便，為SPR-MS有關(guān)研究提供了新的思路，是MALDI、ESI、DART和DBDI之外的重要補(bǔ)充。

圖7 基于芯片表面直接電噴霧的SPR-MS聯(lián)用裝置示意圖(經(jīng)許可后引用自[61]，版權(quán)所有 2017 American Chemical Society)Fig.7 Schematic diagram of coupling SPR with MS by direct electrospray formed on the sensor chip(adapted with permission from [61],Copyright 2017 American Chemical Society)

5 結(jié)論

SPR法可以提供相互作用反應(yīng)的重要物理化學(xué)參數(shù)，MS法可以提供樣品結(jié)構(gòu)的重要信息，二者聯(lián)用可以互相補(bǔ)充。本文總結(jié)了SPR與MS聯(lián)用的主要研究進(jìn)展，根據(jù)離子化方式的不同，概述了基于MALDI、ESI和敞開(kāi)式離子化方法的重要SPR-MS聯(lián)用接口裝置設(shè)計(jì)原理?？傮w而言，基于MALDI的方法是SPR-MS聯(lián)用的主要方法，較易實(shí)現(xiàn)且效果良好，但受限于MALDI原理，聯(lián)用多處于離線模式，難以實(shí)現(xiàn)在線聯(lián)用。基于ESI的方法是另一種重要的SPR與MS聯(lián)用方法，能夠?qū)崿F(xiàn)在線聯(lián)用，但往往需要額外的輸液泵、切換閥、色譜柱等儀器系統(tǒng)，以解決ESI難以針對(duì)表面展開(kāi)分析、難以耐受非揮發(fā)性鹽等問(wèn)題。近年來(lái)，基于敞開(kāi)式離子化方法的SPR-MS聯(lián)用方法也得到發(fā)展，包括DART源、DBDI源、芯片表面直接電噴霧等方法均得到了應(yīng)用，取得了較好的效果。在應(yīng)用中，基于MALDI和ESI的聯(lián)用方法因相關(guān)儀器的成熟性可能繼續(xù)占據(jù)主要地位，但新型離子化方法的發(fā)展已經(jīng)證明其有效性，并且具有優(yōu)于MALDI和ESI方法的特點(diǎn)，將獲得更多關(guān)注，并逐步占據(jù)重要地位。