抗纖軟肝顆粒對(duì)四氯化碳加乙醇誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的影響*

嚴(yán)駿松 周金輝 程良斌

1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)碩士研究生班 (湖北 武漢，430061) 2.湖北省中醫(yī)院肝病研究所

·實(shí)驗(yàn)研究·

抗纖軟肝顆粒對(duì)四氯化碳加乙醇誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的影響*

嚴(yán)駿松1周金輝1程良斌2△

1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)碩士研究生班 (湖北 武漢，430061) 2.湖北省中醫(yī)院肝病研究所

目的：觀察中藥抗纖軟肝顆粒對(duì)四氯化碳(CCl4)加乙醇誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的影響。方法SD雄性大鼠40只，隨機(jī)分為3組。分別為模型對(duì)照組(M)15只，抗纖軟肝顆粒組(K)15只，正常對(duì)照組(N)10只。M、K組大鼠分別以40%CCl4橄欖油液腹腔注射，2次/w，并以5%乙醇為唯一飲水；N組大鼠同期注射等劑量的橄欖油。造模同時(shí)，K組大鼠即予抗纖軟肝顆粒2g/100g/d(中等劑量)灌胃，1次/d；M、N組大鼠同期予等量生理鹽水灌胃，共7周。觀察大鼠肝臟病理學(xué)變化及血清總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、球蛋白(Glo)、Alb/Glo比值、ALT、AST的變化。結(jié)果K組大鼠肝細(xì)胞變性壞死及肝纖維化程度較M組明顯減輕，結(jié)締組織明顯減少，纖維間隔顯著變薄，未見明顯假小葉；M組大鼠血清Alb顯著降低，ALT、AST均有明顯升高(P<0.05)；K組大鼠Alb回升，ALT及AST明顯下降，與M組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。結(jié)論抗纖軟肝顆?？赏ㄟ^保護(hù)肝細(xì)胞，降解纖維組織起到抗肝纖維化的作用。

抗纖軟肝顆粒；肝纖維化大鼠；藥效

AbstractsObjective:To observe the influence of Kangxian Ruangan granules(KXRG) on hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride and ethanol.Methods:Fourty SD male rats were divide into 3 groups randomly: model control group (M) with 15 rats, KXRG group (K) with 15 rats and normal control group (N) with 10 rats. Group M and group K were injected with 40% carbon tetrachloride olive oil at abdominal cavity twice per week. In addition, 5% ethyl alcohol was the only drinking water. group N was injected with olive oil with same quantity at the same time. When modeling, group K was given by gavage once a day with 2g/100g/d (mild moderate dose) KXRG; group M and group N were given by gavage once a day with 2g/100g/d normal saline (NS) for a total of 7 weeks. Observing the hepatic pathologic changes of experimental rats and the influence of the experiment on total protein, albumin, globulin, ALB/Glo ratio, ALT and AST.Results:hepatocyte degenerative necrosis and fibrosis level in group K were lower than group M. In addition, connective tissues decreased obviously, fibrous septum became thinner significantly, there was no visible pseudolobule.ALB in group M decreased significantly, ALT and AST increased significantly (P<0.05). compared with group M ,ALB in group K rised again, ALT and AST decreased significantly (P<0.05).Conclusion:Kangxian Ruangan granule could prevent hepatic fibrosis by protecting the hepatocyte.

KeyWordsKangxian Ruangan granule; hepatic fibrosis; medical efficacy;

盡管國(guó)內(nèi)外對(duì)肝纖維化的發(fā)病機(jī)制有了越來越深入的了解，但在治療方面，進(jìn)展卻比較緩慢?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療肝纖維化的藥物和技術(shù)不斷發(fā)展,但是由于肝纖維化的發(fā)生發(fā)展機(jī)制復(fù)雜,患者病情多樣性等因素，其療效不十分理想,加上藥物價(jià)格昂貴，副作用和不良反應(yīng)大,這也阻礙了肝纖維化治療的發(fā)展,目前，慢性肝病肝纖維化的治療，仍缺乏較安全有效的理想藥物[1.2]。因此，人們把研究目光越來越多地投向了中醫(yī)藥。抗纖軟肝顆粒是湖北省中醫(yī)院肝病研究所臨床有效的抗肝纖維化經(jīng)驗(yàn)方，現(xiàn)為院內(nèi)中成藥制劑，經(jīng)十多年臨床應(yīng)用證實(shí)其對(duì)肝纖維化具有顯著療效。本次實(shí)驗(yàn)，我們采用CCl4加乙醇建立大鼠肝纖維化模型，觀察大鼠肝組織的病理學(xué)改變、肝功能變化，研究抗纖軟肝顆粒抗肝纖維化作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 ①抗纖軟肝顆粒由海藻、鱉甲、牡蠣、莪術(shù)、丹參等組成，由湖北省中醫(yī)院制劑科生產(chǎn)(批準(zhǔn)文號(hào)：鄂藥制字Z20113145)，生藥含量為2g/100g。②分析純CCl4由成都金山化學(xué)試劑有限公司提供，批號(hào)為071020；市售白云邊牌食用白酒(乙醇體積分?jǐn)?shù)為45%)，批號(hào)20080309F2；肝功能TP、Alb、Glo、ALT、AST試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與造模方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠40只，體重200±20g，購(gòu)自武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)：SCXK(鄂)2003-0004。

1.2.2 動(dòng)物喂養(yǎng)及造模方法 將40只大鼠以普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1W后，按隨機(jī)數(shù)字表分為3組。分別為正常對(duì)照組10只(N)，模型對(duì)照組15只(M)，抗纖軟肝顆粒組15只(K)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于8個(gè)同等大小不銹鋼鼠籠內(nèi)，每籠5只，置安靜、通風(fēng)、室溫(20～25℃)、濕度60%～75%的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，保持室內(nèi)和籠內(nèi)衛(wèi)生；飼料為普通條桿狀飼料，由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼料加工廠提供；飲用水為清潔自來水。采用CCl4加乙醇建立肝纖維化大鼠模型。M、K組大鼠分別以40%CCl4橄欖油液腹腔注射，首次劑量為0.5ml/100g體重，以后0.2ml/100g體重，2次/w，并以5%乙醇為唯一飲水，共7w；N組大鼠同期注射等劑量的橄欖油。造模第1天起，K組大鼠即予抗纖軟肝顆粒2g/100g/d(中等劑量)灌胃，1次/d；M、N組大鼠同期予等量生理鹽水灌胃，共7w。7w末，取M組大鼠，脫頸處死取其肝臟標(biāo)本，觀察病理切片，肝組織可見典型的纖維組織增生及假小葉形成，提示造模成功。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 一般情況 觀察各組大鼠體重、精神、運(yùn)動(dòng)、飲食、大便、皮毛色澤等情況。

1.3.2 肝組織病理學(xué)檢查 取各組大鼠肝臟，10%甲醛固定制成石蠟切片,進(jìn)行HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織學(xué)病理變化。將肝纖維化分為0～4級(jí)，0級(jí)：無纖維化；1級(jí)：纖維結(jié)締組織僅局限于匯管區(qū)或匯管區(qū)擴(kuò)大有向小葉發(fā)展的趨勢(shì)；2級(jí)：纖維結(jié)締組織增生進(jìn)入肝小葉2/3并有1級(jí)同樣的改變；3級(jí)：纖維結(jié)締組織進(jìn)入肝小葉達(dá)中央靜脈周圍；4級(jí)纖維結(jié)締組織在全小葉多處彌漫性增生，假小葉形成并有3級(jí)同樣改變。

1.3.3 肝功能檢測(cè) 采用全自動(dòng)生化分析儀，常規(guī)生化方法檢測(cè)血清TP、Alb、Glo、Alb/Glo、ALT、AST。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 M組大鼠皮毛枯槁、稀疏、暗淡無光，嗜睡少動(dòng)，進(jìn)食差，消瘦，部分大鼠出現(xiàn)稀便；N組大鼠皮毛順滑、濃密、光潔，活躍好動(dòng)，進(jìn)食好，體重日漸增加，糞粒正常；K組大鼠狀態(tài)較N組稍差，比M組明顯改善。實(shí)驗(yàn)期間，M組大鼠死亡6只，K組大鼠死亡4只，正常對(duì)照組大鼠均存活。

2.2 3組大鼠肝臟組織病理學(xué)變化情況 HE染色示：N組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索排列規(guī)則，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，小葉內(nèi)無細(xì)胞變性，無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；M組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝索排列紊亂，纖維結(jié)締組織增生，深入、包繞并分割正常肝組織，形成假小葉；纖維間隔內(nèi)有炎細(xì)胞浸潤(rùn)；K組大鼠肝細(xì)胞變性壞死及肝纖維化水平較M組明顯減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及結(jié)締組織形成明顯減少，纖維間隔顯著變薄，未見明顯假小葉。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠肝臟組織病理學(xué)比較 (n)

與N組比較,▲P<0.05，與M組比較,△P<0.05

2.3 3組大鼠血清肝功能指標(biāo)檢查結(jié)果 見表2。

3 討論

肝纖維化是現(xiàn)代病理學(xué)概念，中醫(yī)原本無此稱謂，但據(jù)其臨床癥狀 、體征及病理特征，可將其歸屬于“癥積”、“積聚”、“臌脹”、“脅痛”等病的范疇。肝纖維化的發(fā)生雖與多種因素有關(guān)，但其本質(zhì)離不開血瘀、痰濁，兩者相互影響[3]?？估w軟肝顆粒是已故國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)呂繼端先生治療肝硬變的祖?zhèn)鹘?jīng)驗(yàn)方，該方由海藻、鱉甲、牡蠣、丹參、莪術(shù)等藥組成，具有軟堅(jiān)散結(jié)、活血化瘀的功效。方中海藻配牡蠣咸寒軟堅(jiān)散結(jié)，又能祛水氣?！侗静莩缭氛f：“海藻，主治經(jīng)脈內(nèi)外之堅(jiān)結(jié)”?！侗静輦湟吩疲骸澳迪牐桃攒泩?jiān)化痰，消老血疝瘕”。鱉甲咸走血而能軟堅(jiān)，又有入絡(luò)之功，可去惡生新，鱉甲配牡蠣取其軟堅(jiān)兼能養(yǎng)陰。三藥合用可磨化久瘀老痰，對(duì)血積深痼頑痰尤為適用。配莪術(shù)行氣破血，消癥化積，與丹參為伍加強(qiáng)活血的作用。

表2 3組大鼠血清肝功能檢測(cè)結(jié)果比較

與N組比較，▲P<0.05；與M組比較，△P<0.05本方特點(diǎn)是通過軟堅(jiān)散結(jié)，消痞化積，使肝內(nèi)瘀血“融化”，再用活血化瘀之品“驅(qū)出”，而達(dá)到抗肝纖維化的目的[4、5]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：CCl4加乙醇可導(dǎo)致肝組織纖維化，可引起肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝索排列紊亂，纖維結(jié)締組織增生，假小葉形成等病變?？估w軟肝顆粒可延緩并抑制這一進(jìn)程。抗纖軟肝顆粒能夠降低肝纖維化大鼠血清ALT、AST含量，升高Alb，降解纖維，起到抗纖維的作用。

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EffectofKangxianRuangangranulesonhepaticfibrosisinducedbycarbontetrachlorideandethanol

YANJun-song1,ZHOUJin-hui1,CHENGLiang-bin2△

1.Departmentofpostgraduatecollege,HubeiuniversityofTraditionalChinesemedicine(WuhanHubei,430061)China

2016-10-28 編輯：韋 怡)

10.3969/j.issn.1005-0264.2017.01.014

國(guó)家中醫(yī)藥管理局國(guó)家中醫(yī)臨床研究基地業(yè)務(wù)建設(shè)科研專項(xiàng)(No.JDZX2015179)；△通信作者，E-mail：18971241243@163.com