軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”組培技術(shù)研究

杜鵬瑤　劉德江　徐彪

摘要[目的]探索軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”適宜組培方法。[方法]以新生腋芽為外植體，篩選最佳消毒方法，并對(duì)影響其生長(zhǎng)的NAA、6-BA 等生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的濃度進(jìn)行篩選。[結(jié)果]以5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min為適宜消毒方法，污染率和褐化率均較低；腋芽在WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中增殖效果最佳，增殖系數(shù)可達(dá)5.6，株高3.9 cm；叢生芽在WPM+NAA 0.3 mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根效果最佳，生根率可達(dá)100%，平均根條數(shù)為4.4條，平均根長(zhǎng)為5.2 cm。[結(jié)論]軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”可采用組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行快速繁殖。

關(guān)鍵詞軟棗獼猴桃；“寒玉1號(hào)”；腋芽；組織培養(yǎng)

中圖分類(lèi)號(hào)S663.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）22-0098-03

Abstract [Objective] To explore the suitable tissue culture technique for Actinidia arguta “Hanyu No.1”. [Method] With axillary bud as explant， the best disinfection method was filtered， and the NAA， 6BA concentration were selected. [Result] The best disinfection methods were 5% NaClO 8 min+0.1%HgCl2 6 min or 9 min， 5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 6 min， in which the mortality rate and contamination rate were lower. The best medium of inducing germinating of explant was WPM+6BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L， in which the ratio of proliferation was 5.6 and the height of plant was 3.9 cm. The best medium of inducing rooting from cluster buds was WPM+NAA 0.3 mg/L， in which the rate of rooting was 100%， the average number of root was 4.4 and the average length of root was 5.2 cm. [Conclusion] It concluded that Actinidia arguta “Hanyu No.1” can adopt the method of tissue culture for rapid propagation.

Key wordsActinidia arguta；“Hanyu No.1”；Axillary bud；Tissue culture

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta），屬于獼猴桃科獼猴桃屬，是多年生藤本落葉植物，別名軟棗子、獼猴桃、獼猴梨、中華軟棗獼猴桃等。軟棗獼猴桃果實(shí)可食用，富含多種營(yíng)養(yǎng)成分，具有很高的營(yíng)養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]，可加工成果脯、罐頭、果汁、果醬，也可以用來(lái)制作糕點(diǎn)或釀酒等[2]。軟棗獼猴桃還可藥用，具有健胃、解熱、止血等功能，其根及根皮對(duì)消化道癌癥具有一定的抑制和治療作用[3]。軟棗獼猴桃屬于雌雄異株植物，以野生為主，果實(shí)的產(chǎn)量和質(zhì)量不高。自20世紀(jì)90年代開(kāi)始馴化人工栽培，多采用種子播種、枝條扦插等方式進(jìn)行常規(guī)繁殖。種子繁殖存在無(wú)法辨別雌雄植株的缺點(diǎn)，扦插等繁殖方法存在繁殖系數(shù)低等缺點(diǎn)，很難滿足市場(chǎng)的需求[4-5]。為了快速獲得大量可結(jié)果雌株，對(duì)其組培技術(shù)進(jìn)行研究，通過(guò)篩選最佳消毒方法和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用濃度，建立高效快速繁殖體系，以期為軟棗獼猴桃的大面積推廣栽培提供支持。

1材料與方法

1.1材料

試驗(yàn)材料為軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”枝條，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)水培促使其腋芽萌發(fā)，取新生3～5 cm腋芽進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2方法

1.2.1腋芽消毒方法。

將腋芽剪切成2 cm長(zhǎng)的小段置于無(wú)菌瓶?jī)?nèi)，用5% NaClO和0.1% HgCl2浸泡消毒，消毒時(shí)間如下：X1（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 3 min），X2（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min），X3（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 9 min），X4（5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 3 min），X5（5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min），X6（ 5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 9 min）。NaClO和HgCl2浸泡消毒后再用無(wú)菌水沖洗3次，最后放入帶有濾紙的無(wú)菌培養(yǎng)皿上備用。

1.2.2腋芽增殖培養(yǎng)。

將消毒后的腋芽接種到增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方如下：Y1（WPM+6-BA 2.0 mg/L），Y2（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y3（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y4（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y5（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y6（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y7（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y8（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y9（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y10（WPM+6-BA 4.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L）。每瓶培養(yǎng)基接種5個(gè)腋芽，每個(gè)處理接種5瓶，重復(fù)3次。統(tǒng)計(jì)腋芽增殖系數(shù)（增殖系數(shù)=再生叢生芽總數(shù)/接種腋芽總數(shù)）、平均株高等。

1.2.3生根培養(yǎng)。

將組培增殖形成的幼苗接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方如下：G1（WPM+NAA 0.1 mg/L），G2（WPM+NAA 0.2 mg/L），G3（WPM+NAA 0.3 mg/L），G4（WPM+NAA 0.4 mg/L），G5（WPM+IBA 0.1 mg/L），G6（WPM+IBA 0.2 mg/L），G7（WPM+IBA 0.3 mg/L），G8（WPM+IBA 0.4 mg/L）。每瓶培養(yǎng)基接種5個(gè)叢生芽苗，每個(gè)處理接種5瓶，重復(fù)3次。每天定期觀察統(tǒng)計(jì)其生根時(shí)間，20 d后計(jì)算生根率（生根率=生根苗數(shù)/接種苗數(shù)）、每株苗生根數(shù)、根長(zhǎng)等指標(biāo)。

1.2.4培養(yǎng)條件。

培養(yǎng)溫度為（21±2）℃，空氣相對(duì)濕度 40%～50%，光照時(shí)間 12 h/d，光強(qiáng)為1 500～2 000 lx[6]。

1.3數(shù)據(jù)處理與分析

用Excel 2003對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果與分析

2.1不同處理外植體生長(zhǎng)情況

接種7 d后，對(duì)不同消毒方法外植體的污染率和褐化率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，X3和X6處理外植體污染率較低，二者間差異不顯著。X1處理污染率最高，達(dá)33.3%。X6處理外植體褐化率最高，為30.7%。X1 、X2和X4處理外植體褐化率較低，3個(gè)處理間差異不顯著。固定NaClO消毒時(shí)間，隨著HgCl2 消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，污染率會(huì)逐漸降低，褐化率會(huì)逐漸增高。固定HgCl2 消毒時(shí)間，隨著NaClO消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，在污染率方面，除X1和X4 處理差異顯著外，其他處理變化不顯著；在褐化率方面，除X1和X4 處理差異不顯著外，其他處理差異顯著。這說(shuō)明NaClO和HgCl2對(duì)外植體的消毒及褐化均產(chǎn)生了一定的作用。綜合考慮，X2 、X3和X5處理在軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”外植體消毒方面為較適宜的方法。

2.2不同處理腋芽增殖情況

腋芽接種30 d后，調(diào)查其增殖情況，結(jié)果見(jiàn)表2。腋芽接種及增殖生長(zhǎng)情況見(jiàn)圖1a、b。

由表2可知，10種不同的培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)外植體增殖，Y6處理的腋芽增殖系數(shù)最高，為5.6；增殖苗株高最高，為3.9 cm，均顯著高于其他處理。這說(shuō)明在誘導(dǎo)腋芽增殖上Y6處理為

適宜的培養(yǎng)基配方。固定6-BA濃度，隨著NAA濃度的增大，增殖系數(shù)出現(xiàn)先增后降的現(xiàn)象。當(dāng)6-BA濃度為2.0和3.0 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大，株高出現(xiàn)先增后降的現(xiàn)象；當(dāng)6-BA濃度為4.0 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大，株高出現(xiàn)下降的現(xiàn)象。固定NAA濃度，隨著6-BA濃度的增大，增殖系數(shù)和株高均出現(xiàn)先增后降的現(xiàn)象。

2.3不同處理組培苗生根情況

接種后20 d，調(diào)查組培苗生根情況，結(jié)果見(jiàn)表3和圖1c。由表3可知，叢生芽苗在附加不同濃度IBA和NAA的培養(yǎng)基上均能生根。G3、G4、G7處理的生根率均為100%，顯著高于其他處理。G3處理的生根時(shí)間最短，為5 d。G3處理的根數(shù)和根長(zhǎng)表現(xiàn)最好，根數(shù)為4.4條，根長(zhǎng)為5.2 cm，均顯著高于其他處理。在提高生根時(shí)間和生根率方面，適宜濃度的IBA和NAA均能達(dá)到良好的效果，但在促進(jìn)根數(shù)及根長(zhǎng)方面NAA效果優(yōu)于IBA。綜合各因素考慮，G3處理為促進(jìn)軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”組培苗生根的適宜培養(yǎng)基配方。

3結(jié)論與討論

通過(guò)對(duì)6種不同消毒方法進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，不同消毒劑的處理時(shí)間對(duì)軟棗獼猴桃外植體的消毒效果有較大影響，5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min這3個(gè)處理為外植體適宜消毒方法；在增殖培養(yǎng)過(guò)程中，WPM+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L為腋芽增殖最佳培養(yǎng)基，低濃度的NAA對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用，濃度過(guò)高會(huì)對(duì)誘導(dǎo)有抑制作用；在生根培養(yǎng)過(guò)程中，WPM+NAA 0.3 mg/L為最佳生根培養(yǎng)基，在提高生根時(shí)間和生根率方面，適宜濃度的IBA和NAA均能達(dá)到良好的效果，但在促進(jìn)根數(shù)及根長(zhǎng)方面NAA效果優(yōu)于IBA。

目前，國(guó)內(nèi)外已有許多軟棗獼猴桃優(yōu)良品種的人工繁殖及栽培獲得成功。我國(guó)具有豐富的野生軟棗獼猴桃品種資源，但這些品種人工繁殖并開(kāi)發(fā)利用的極少。軟棗獼猴桃的開(kāi)發(fā)利用研究還需要進(jìn)一步的努力。該研究建立了軟棗獼猴桃“寒玉1號(hào)”的高效植株再生體系，為軟棗獼猴桃及其優(yōu)良品種的開(kāi)發(fā)利用和工廠化育苗奠定了基礎(chǔ)。

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