PCR法檢測(cè)魚(yú)及其制品中的魚(yú)源性成分

程月花，陸利霞,2,*，李 壹,2，熊曉輝,2，陳曉宇，張一青

PCR法檢測(cè)魚(yú)及其制品中的魚(yú)源性成分

程月花1，陸利霞1,2,*，李 壹1,2，熊曉輝1,2，陳曉宇1，張一青3

（1.南京工業(yè)大學(xué)食品與輕工學(xué)院，江蘇 南京 210009；2.江蘇省食品安全快速檢測(cè)公共技術(shù)服務(wù)中心，江蘇 南京 210009；3.蘇州市食品藥品監(jiān)督管理局，江蘇 蘇州 215000）

目的：建立一種快速、特異、靈敏的魚(yú)源性成分聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)方法。方法：根據(jù)魚(yú)線粒體基因組12S rRNA中的保守序列設(shè)計(jì)魚(yú)源性特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，建立魚(yú)源性成分檢測(cè)方法；對(duì)24 種魚(yú)及雞、牛、羊、豬、鴨、蝦6 種常見(jiàn)的易混于魚(yú)制品的動(dòng)物源性成分進(jìn)行特異性檢測(cè)；將草魚(yú)肉混入其他動(dòng)物肉中，混合均勻后提取DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，確定肉樣水平的檢測(cè)靈敏度；將草魚(yú)DNA混入其他動(dòng)物DNA中，以混合后的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，確定DNA水平的檢測(cè)靈敏度。結(jié)果：該方法能特異性的對(duì)魚(yú)源性成分進(jìn)行快速檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度達(dá)0.5%。結(jié)論：該方法能對(duì)食品中是否含有魚(yú)源性成分進(jìn)行初篩，到達(dá)快速檢測(cè)的目的，對(duì)防止食品摻假、維護(hù)消費(fèi)者利益、規(guī)范市場(chǎng)秩序有重要意義。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；12S rRNA基因；魚(yú)源性成分；檢測(cè)；食品

魚(yú)及其制品由于其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特的風(fēng)味深受消費(fèi)者的喜愛(ài)。近年來(lái)，我國(guó)魚(yú)及其制品的產(chǎn)量逐年增高，其中魚(yú)糜制品在水產(chǎn)品加工總量中的占比從2009年的5.74%上升至2014年的7.39%[1-2]。與此同時(shí)，一些不法商販在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，“以次充好、以假亂真”，在制品中摻雜、摻假，這極大地?fù)p害消費(fèi)者利益和健康，擾亂了市場(chǎng)秩序和發(fā)展。我國(guó)多部法律法規(guī)明文禁止食品的造假摻假行為，但是目前的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)不能滿足實(shí)際需求，因此需要建立新的標(biāo)準(zhǔn)彌補(bǔ)不足。魚(yú)肉摻假檢測(cè)的現(xiàn)有方法大致可以分為5 種：顯微鏡觀察法[3]、免疫學(xué)方法[4-5]、紅外光譜方法[6-8]、色譜分析法[9-11]和分子生物學(xué)方法[12-19]。顯微鏡觀察法是在組織學(xué)特性的基礎(chǔ)上觀察樣品顆粒形態(tài)，檢出限低、假陽(yáng)性率低且熱穩(wěn)定性好，但是依賴于檢測(cè)人員的經(jīng)驗(yàn)及肉組織完整性[3]。免疫學(xué)方法基于抗原抗體特異性反應(yīng)，具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、可以實(shí)現(xiàn)高通量的特點(diǎn)，但是蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)容易在食品加工過(guò)程中受破壞而影響抗體識(shí)別[20]。肉類中的蛋白質(zhì)、碳水化合物、有機(jī)酸等化合物含有大量的帶氫基團(tuán)，紅外光譜法利用帶氫基團(tuán)在近、中紅外光譜上有倍頻和合頻吸收的性質(zhì)對(duì)肉中的有機(jī)物的成分進(jìn)行檢測(cè)，但是紅外光譜分析技術(shù)需要針對(duì)不同的摻假肉建立不同的模型，工作量大，使用范圍有局限[21]。色譜分析是目前應(yīng)用最為廣泛的分離檢測(cè)技術(shù)。肉及其制品中存在的某些蛋白質(zhì)、肽類和氨基酸因?yàn)槲锓N來(lái)源不同而存在差異，通過(guò)色譜技術(shù)的定性、定量分析能夠反映肉類的摻假情況[22]。但是由于肉及其制品中蛋白質(zhì)含量變化范圍廣、干擾因素多，導(dǎo)致該方法的靈敏度低、容易出現(xiàn)假陽(yáng)性[23]。此外，該方法對(duì)設(shè)備、樣品前處理以及試劑的要求較高，限制了色譜技術(shù)在肉及其制品源性成分鑒定中的應(yīng)用。DNA檢測(cè)的分子生物學(xué)方法是以動(dòng)物種屬間遺傳信息的差異作為肉種鑒別的檢測(cè)靶點(diǎn)，具有特異性高、靈敏度高、不受組織類別限制等優(yōu)點(diǎn)。相比于蛋白質(zhì)，DNA的熱穩(wěn)定性高，即使加工過(guò)程中有一定的降解，但是仍能滿足聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）等方法的要求[20]。草魚(yú)、鯽魚(yú)、鰱魚(yú)等常見(jiàn)的魚(yú)類占我國(guó)魚(yú)類總產(chǎn)量的50%以上且常用于魚(yú)制品的生產(chǎn)，但目前相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法不能滿足要求。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比對(duì)多種魚(yú)及多種非魚(yú)類動(dòng)物的線粒體基因序列，選擇種內(nèi)保守、種間特異的序列設(shè)計(jì)魚(yú)源性成分的特異性引物，旨在建立魚(yú)及其制品中魚(yú)源性成分PCR檢測(cè)方法，為魚(yú)及其制品的摻假檢測(cè)提供技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

淡水魚(yú)包括黑魚(yú)（Channa argus）、黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）、草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）、鯽魚(yú)（Carassius auratus）、鯉魚(yú)（Cyprinus carpio）、鯰魚(yú)（Silurus asotus）、河鲀（Takifugu obscurus）、巴沙魚(yú)（Pangasius larnaudii）、鰱魚(yú)（Hypophthalmichthys molitrix）、鳙魚(yú)（Aristichthys nobilis）、羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus），海水魚(yú)包括鮭魚(yú)（Salmo salar）、鱈魚(yú)（Gadus morhua）、鯧魚(yú)（Pampus argenteus）、青占魚(yú)（Scomber japonicus）、多寶魚(yú)（Psetta maxima）、小黃魚(yú)（Larimichthys polyactis）、鱸魚(yú)（Lateolabrax japonicus）、鮟鱇魚(yú)（Lophius litulon）、金槍魚(yú)（Thunnus thynnus）、石斑魚(yú)（Epinephelus akaara）、鰻魚(yú)（Anguilla japonica）、帶魚(yú)（Trichiurus lepturus）、黃蓋鰈魚(yú)（Pseudopleuronectes yokohamae）及雞肉、牛肉、羊肉、豬肉、鴨肉、蝦均購(gòu)自南京當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；魚(yú)片、魚(yú)丸、魚(yú)腸、魚(yú)罐頭、雞肉火腿腸、豬肉火腿腸等食品均購(gòu)自南京當(dāng)?shù)爻小?/p>

High Pure PCR Template Preparation Kit 瑞士Roche公司；10×Reaction Buffer、BioReady rTaq、dNTP Mixture 杭州博日技術(shù)有限公司；溴化乙錠 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；DL500 DNA Marker、6×Loading Buffer 寶生物工程（大連）有限公司；PCR引物合成上海生工生物有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1-14高速離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司；Life Express Thermal Cycler PCR儀、GE-100凝膠電泳儀 杭州博日技術(shù)有限公司；Biophotometer D30核酸蛋白測(cè)定儀 德國(guó)Eppendorf公司；JS-680B全自動(dòng)凝膠成像儀 上海培清科技有限公司；HH-6數(shù)字恒溫水浴鍋 常州國(guó)華電器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取

參照High Pure PCR Template Preparation Kit試劑盒的說(shuō)明書(shū)提取基因組DNA。將提取好的DNA置于-20 ℃保存，待后續(xù)PCR擴(kuò)增使用。

1.3.2 DNA質(zhì)量濃度及純度的測(cè)定

用核酸蛋白測(cè)定儀檢測(cè)提取的DNA純度（A260nm/A280nm、A260nm/A230nm）及制成質(zhì)量濃度[24]。純凈的DNA A260nm/A280nm比值在1.8；比值大于1.8考慮為RNA污染，DNA變性或降解；比值小于1.7考慮為蛋白質(zhì)、酚污染[25]。實(shí)驗(yàn)中所用到的DNA質(zhì)量濃度在25.1～77.2 ng/μL之間，A260nm/A280nm在1.6～1.8之間。

1.3.3 引物設(shè)計(jì)

在GenBank中查找我國(guó)產(chǎn)量高且常見(jiàn)魚(yú)的線粒體基因序列，通過(guò)DNAMAN軟件進(jìn)行序列同源性比較分析，以NC-010288.1為參考序列，選擇同源性較高部分用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物，將設(shè)計(jì)的各組引物所擴(kuò)增的目標(biāo)序列分別與牛、豬、羊等常見(jiàn)畜肉以及雞、鴨、鵝、鴿等常見(jiàn)禽肉已發(fā)表的線粒體全基因序列進(jìn)行比較，選擇種內(nèi)保守、種間特異的一對(duì)引物，同時(shí)通過(guò)BLAST驗(yàn)證引物的特異性。

1.3.4 PCR條件和體系

PCR條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s；67 ℃退火30 s；72 ℃延伸20 s，共35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min；PCR體系（共25 μL）：10×Reaction Buffer 2.5 μL、dNTP Mixture（各2.5 mmol/L）2 μL、BioReady rTaq 0.2 μL（1 U）、上下游引物（10 μmol/L）各2 μL、模板DNA 5 μL，雙蒸水補(bǔ)足至25 μL。

1.3.5 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)

取6.5 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，加1 μL 6×上樣緩沖液點(diǎn)樣進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。電泳所用的瓊脂糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%。

1.3.6 基因測(cè)序

利用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將目的片段回收后，送大連寶生物工程有限公司測(cè)序。

1.3.7 特異性實(shí)驗(yàn)

選取11 種淡水魚(yú)、13 種海水魚(yú)及雞、牛、羊、豬、鴨、蝦6 種常見(jiàn)的易混入魚(yú)制品的動(dòng)物肉作為樣品，提取DNA后以此為模板采用建立的PCR方法進(jìn)行擴(kuò)增，驗(yàn)證該方法的特異性。

1.3.8 靈敏度實(shí)驗(yàn)

分別制備DNA水平和肉樣水平混合樣品進(jìn)行檢測(cè)，以考察所建立方法的檢測(cè)靈敏度。

1.3.8.1 魚(yú)肉樣檢出限

將草魚(yú)肉分別與雞、牛、羊、豬、鴨肉混合，制成含魚(yú)肉10%、1%、0.5%、0.1%、0.05%的混合樣后分成兩份，一份新鮮肉樣，一份經(jīng)過(guò)121 ℃處理15 min。提取混合肉樣DNA后，以此為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以確定本檢測(cè)方法對(duì)混合魚(yú)肉樣的檢出限。

1.3.8.2 DNA檢出限

將草魚(yú)及雞、牛、羊、豬、鴨肉的DNA稀釋到25 ng/μL，然后將草魚(yú)DNA分別與雞、牛、羊、豬、鴨的DNA混合，制成含草魚(yú)DNA 10%、1%、0.5%、0.1%、0.05%的混合DNA樣。以混合DNA樣為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以確定本方法對(duì)不同物種混合DNA的檢出限。

1.3.9 市售食品中魚(yú)源性成分的檢測(cè)

購(gòu)置市售的配料表中標(biāo)明含有魚(yú)成分的食品樣品30 份；標(biāo)明具體魚(yú)類的食品樣品18 份；配料表中不含魚(yú)成分的食品樣品20 份。使用所建立的PCR方法檢測(cè)其魚(yú)源性成分。

2 結(jié)果與分析

2.1 引物設(shè)計(jì)

通過(guò)對(duì)GenBank中部分魚(yú)線粒體基因序列的同源性比較分析，通過(guò)Primer Premier 5.0共設(shè)計(jì)了11 組引物（表1），將各組引物所擴(kuò)增的目標(biāo)序列分別與鴨（NC-022418.1）、鵝（KT427463.1）、雞（NC-007236.1）、蝦（NC-026834.1）、豬（NC-012095.1）、驢（NC-001788.1）、羊（NC-001941.1）、牛（AY526085.1）、鴿（NC-013978.1）和鷓鴣（NC-011817.1）的線粒體全基因序列進(jìn)行比較，選取引物的3’端和魚(yú)源序列完全匹配而與其他非魚(yú)類的序列不能互補(bǔ)的一組引物（圖1）。該組引物針對(duì)擴(kuò)增12S rRNA區(qū)的一段約98 bp的保守片段。上游引物NC-617/641F：CCTAGAGGAGCCTGTTCTAGAACCG，下游引物NC-693/714R：TTCACAGGGTAAGCTGACGACGG。

表1 本研究PCR的引物Table 1 PCR primer sequences used in this study

圖1 魚(yú)源性成分檢測(cè)引物NC-617/641F和NCC--669933/714R擴(kuò)增片段與其他物種線粒體DNA相應(yīng)片段的相似性比較Fig. 1 Identity comparison between sequences amplifi ed by fi sh specifi c primers (NC-617/641F and NC-693/714R) and corresponding region of mtDNA of other animals

2.2 引物特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為驗(yàn)證引物對(duì)于魚(yú)源性成分的特異性，將11 種淡水魚(yú)、13 種海水魚(yú)及雞、牛、羊、豬、鴨、蝦6 種常見(jiàn)的易混于魚(yú)制品的動(dòng)物DNA作為模板進(jìn)行擴(kuò)增。從圖2可以看出，11 種淡水魚(yú)均有特異性擴(kuò)增條帶，大小約98 bp，與預(yù)期大小相符，13 種海水魚(yú)中除鯧魚(yú)、鰻魚(yú)、帶魚(yú)外，其他10 種海水魚(yú)有特異擴(kuò)增條帶。表明該引物對(duì)于少數(shù)魚(yú)類無(wú)法檢測(cè)，使用時(shí)具有一定的局限性。從圖3可以看出，雞、牛、羊、豬、鴨、蝦6 種非魚(yú)類DNA模板的PCR擴(kuò)增均為陰性，表明該對(duì)引物特異性良好。

圖2 24 種魚(yú)類的魚(yú)源性成分特異性檢測(cè)電泳圖Fig. 2 Specifi c detection of fi sh-derived ingredients from 24 species of fi sh

圖3 6 種非魚(yú)類魚(yú)源性成分特異性檢測(cè)電泳圖Fig. 3 Specifi c detection of six non-fi sh-derived ingredients

2.3 PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果

將部分常見(jiàn)魚(yú)類的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化后送測(cè)序公司測(cè)序，結(jié)果見(jiàn)表2，測(cè)序結(jié)果進(jìn)一步證明設(shè)計(jì)的引物特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高。

表2 部分魚(yú)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果Table 2 Sequencing results of PCR amplifi ed products of DNA extracted from several fi sh species

2.4 方法靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為了確定該方法的混樣檢出限，分別從肉樣水平和DNA水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。

2.4.1 魚(yú)肉樣品檢出限

將新鮮草魚(yú)肉按不同比例摻入其他動(dòng)物肉中，混合后提取DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。從圖4可以看出，草魚(yú)肉混合雞肉和牛肉時(shí)，該方法檢測(cè)魚(yú)源性成分的檢出限為0.5%，混合羊肉、豬肉、鴨肉時(shí)，該方法檢測(cè)魚(yú)源性成分的檢出限為0.1%。從圖5可以看出，在對(duì)混合肉樣高溫處理（121 ℃處理15 min）后提取DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中混合羊肉的樣品檢出限為0.1%，混合雞、牛、豬、鴨的樣品檢出限為0.5%。因此，確定該方法用于混合肉樣檢測(cè)魚(yú)源性成分時(shí)的檢出限為0.5%。

圖4 新鮮肉樣混合水平靈敏性檢測(cè)結(jié)果Fig. 4 Sensitivity of PCR for detecting mixed fresh meat samples

圖5 經(jīng)過(guò)高溫高壓處理的肉樣混合水平靈敏性檢測(cè)結(jié)果Fig. 5 Sensitivity of PCR for detecting mixed cooked meat samples

2.4.2 DNA檢出限實(shí)驗(yàn)結(jié)果

草魚(yú)DNA混合不同動(dòng)物DNA制成含魚(yú)DNA不同質(zhì)量濃度梯度的DNA混合樣，從圖6可以看出，草魚(yú)DNA混合雞、牛、羊、豬、鴨DNA在0.5%水平時(shí)，能看到目的擴(kuò)增條帶。在0.1%水平時(shí)，PCR擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。因此該方法對(duì)DNA混樣的檢出限為0.5%。

圖6 DNA混合水平靈敏性檢測(cè)結(jié)果Fig. 6 Sensitivity of PCR for detecting mixed DNA

2.5 市售食品中魚(yú)源性成分的檢測(cè)結(jié)果

表3 市售食品中魚(yú)源性成分的檢測(cè)結(jié)果Table 3 Detection of fi sh-derived ingredients in commercial foods

使用本研究建立的PCR方法對(duì)市售樣品中的魚(yú)源性成分進(jìn)行檢測(cè)。從表3可以看出，在隨機(jī)采購(gòu)的30 種配料表中標(biāo)明含有魚(yú)成分的食品樣品中，27 個(gè)樣品檢出陽(yáng)性，其中3 個(gè)標(biāo)明含有海水魚(yú)成分的魚(yú)制品檢測(cè)結(jié)果為陰性，這與所建立的方法特異性實(shí)驗(yàn)中部分海水魚(yú)不能檢出的結(jié)果一致。配料表中標(biāo)明含某種魚(yú)類的18 個(gè)食品樣品均能檢出魚(yú)源性成分。配料表中不含魚(yú)成分的20 種食品樣品中均未檢出魚(yú)源性成分。所采購(gòu)的食品樣品或出自大型食品制造商或具有完整的魚(yú)肉組織，一定程度上避免了食品的摻假，因此可以看出所建立的方法在實(shí)際產(chǎn)品的應(yīng)用中只有少數(shù)魚(yú)類無(wú)法檢出，基本滿足在檢測(cè)中進(jìn)行初篩的要求。

3 討 論

肉制品摻假是主要的食品摻假問(wèn)題之一，利用PCR方法檢測(cè)牛、羊、豬等源性成分的研究已經(jīng)很成熟[26-28]。然而，目前國(guó)內(nèi)利用PCR方法檢測(cè)魚(yú)源性成分的研究較少，賀云霞等[29]建立的檢測(cè)飼料中魚(yú)源性成分的PCR方法能有效檢出鯉魚(yú)、鱈魚(yú)、鲅魚(yú)等10 種魚(yú)類，龐杰等[30]建立的檢測(cè)飼料中魚(yú)源性成分定量檢測(cè)的實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)能有效檢出四大家魚(yú)（青魚(yú)、草魚(yú)、鰱魚(yú)、鳙魚(yú)）和鯉魚(yú)、鯽魚(yú)、框鯉、武昌魚(yú)、鯰魚(yú)，但對(duì)石斑魚(yú)、鱈魚(yú)、鱔魚(yú)等不能檢出。國(guó)外利用PCR方法檢測(cè)魚(yú)源性成分的研究主要是針對(duì)海洋魚(yú)類[31-32]。本研究建立的檢測(cè)魚(yú)及其制品中魚(yú)源性成分的PCR方法特異性強(qiáng)，能檢出的淡水魚(yú)類占我國(guó)淡水養(yǎng)殖總量的70%以上，能檢出的海水魚(yú)類占我國(guó)海水魚(yú)產(chǎn)量的15%以上[2]，不能檢出所有魚(yú)類，這是因?yàn)轸~(yú)類所處的生態(tài)環(huán)境、繁殖方式各異，遺傳變異方式多樣，采用一對(duì)引物特異性檢測(cè)所有魚(yú)類具有一定的困難[33]，但是可以作為前人建立的PCR方法的補(bǔ)充，進(jìn)一步擴(kuò)大檢測(cè)魚(yú)的種類。我國(guó)為當(dāng)今世界上淡水養(yǎng)殖最為發(fā)達(dá)的國(guó)家之一以及考慮到國(guó)人的飲食習(xí)慣，魚(yú)制品多采用產(chǎn)量高且廉價(jià)的淡水魚(yú)類，因此本方法適用于檢測(cè)大多數(shù)魚(yú)制品中的魚(yú)源性成分。

所建立的食品中魚(yú)源性成分PCR檢測(cè)方法的靈敏度較高，無(wú)論是肉樣混合還是DNA混合均可做到0.5%水平而SB/T 10379—2012《速凍調(diào)制食品》中規(guī)定魚(yú)類速凍調(diào)制食品的命名中應(yīng)含主料不小于8%[34]，該方法的檢出限滿足要求，可對(duì)食品標(biāo)簽的真實(shí)性進(jìn)行監(jiān)控，從而保障消費(fèi)者的權(quán)益和健康，維護(hù)市場(chǎng)秩序，同時(shí)為魚(yú)制品中魚(yú)源性成分檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化提供了依據(jù)。

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Establishment of PCR Method for Detection of Fish-Derived Ingredients in Fish and Fish Products

CHENG Yuehua1, LU Lixia1,2,*, LI Yi1,2, XIONG Xiaohui1,2, CHEN Xiaoyu1, ZHANG Yiqing3
(1. College of Food Science and Light Industry, Nanjing Tech University, Nanjing 210009, China;2. Jiangsu Public Technical Service Center for Rapid Detection of Food Safety, Nanjing 210009, China;3. Suzhou Food and Drug Administration, Suzhou 215000, China)

Objective∶ To establish a rapid, specifi c and sensitive polymerase chain reaction (PCR) method for the detection of fi sh-derived ingredients. Methods∶ A set of primers was used to selectively amplify a short DNA fragment of the fi sh mitochondrial 12S rRNA gene. The specificity was evaluated by analyzing 24 kinds of fish as well as meat, poultry and shrimp, commonly added in fish products. The sensitivity was evaluated by amplifying DNA extracted from grass carp mixed with meat from other animal species. Results∶ The method established could specifically detect fish-derived ingredients with a sensitivity of 0.5%. Conclusion∶ This PCR method is a rapid, sensitive and specifi c method for preliminary screening of fi sh-derived ingredients in foods, and is of important signifi cance to safeguard the interests of consumers and standardize the market order.

polymerase chain reaction (PCR); 12S rRNA gene; fi sh-derived ingredients; detection; food

Q789

A

1002-6630（2017）20-0279-07

程月花, 陸利霞, 李壹, 等. PCR法檢測(cè)魚(yú)及其制品中的魚(yú)源性成分[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(20)∶ 279-285. DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201720041. http∶//www.spkx.net.cn

CHENG Yuehua, LU Lixia, LI Yi, et al. Establishment of PCR method for detection of fi sh-derived ingredients in fi sh and fi sh products[J]. Food Science, 2017, 38(20)∶ 279-285. (in Chinese with English abstract) DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201720041. http∶//www.spkx.net.cn

2016-09-21

江蘇省科技廳重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（BE20160803）；蘇州市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（SS201427）

程月花（1991—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称钒踩c檢測(cè)。E-mail：chengyuehua7@163.com

*通信作者：陸利霞（1972—），女，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称钒踩c檢測(cè)。E-mail：lixialu@njtech.edu.cn

DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201720041