真菌灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析

聶文強(qiáng)，吳天祥,2,*，鐘 敏，蘆紅云

真菌灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析

聶文強(qiáng)1，吳天祥1,2,*，鐘 敏1，蘆紅云1

（1.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州大學(xué)明德學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

灰樹(shù)花多糖具有抗腫瘤、抗HIV、抗氧化等作 用，為探明灰樹(shù)花多糖合成的遺傳基礎(chǔ)，采用Illumina高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)灰樹(shù)花轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序，獲得74 575 910 個(gè)reads，10.4 G數(shù)據(jù)量；將測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行de novo拼接后得到18 077 個(gè)Unigene。對(duì)所得Unigene進(jìn)行不同數(shù)據(jù)庫(kù)比 對(duì)，在Nr數(shù)據(jù)庫(kù)中有11 651 個(gè)Unigene被注釋到，其中灰樹(shù)花轉(zhuǎn)錄組與變色栓菌相似序列最多（18.74%）；有8 332 個(gè)Unigene在GO數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋到，分為細(xì)胞組分、分子功能及生物學(xué)過(guò)程等3 大類(lèi)59 個(gè)分支；與KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，共有5 200 個(gè)Unigene被注釋?zhuān)謱?76 條代謝通路。從18 077 個(gè)Unigene中共找到1 155 個(gè)簡(jiǎn)單重復(fù)序列（simple sequence repeat，SSR）位點(diǎn)，其中單核苷酸重復(fù)最高，六核苷酸重復(fù)最少，A/T出現(xiàn)頻率最高。本研究中在KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)注釋到115 個(gè)Unigene與灰樹(shù)花多糖合成有關(guān)，這些Unigene及其注釋信息為今后深入開(kāi)展灰樹(shù)花多糖代謝途徑及相關(guān)功能基因等研究提供了依據(jù)。

灰樹(shù)花；菌絲體；轉(zhuǎn)錄組測(cè)序；功能注釋

灰樹(shù)花（Grifola frondosa）是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的藥食兩用真菌。多糖是灰樹(shù)花的主要活性成分，具有抗腫瘤[1-4]、抗HIV[5]、抗氧化[6-8]、清除自由基[8]、降血糖[9]、促進(jìn)膠原蛋白合成[10]、提高機(jī)體免疫力[11-12]等生物活性。

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是基于Illumina HiSeq等測(cè)序平臺(tái)，對(duì)特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有mRNA進(jìn)行測(cè)序。近年來(lái)，隨著轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)不斷發(fā)展和完善，為研究功能基因、生物學(xué)性狀的分子機(jī)制提供了全新的方法[13-14]。Yu Guojun等[15]對(duì)靈芝菌絲體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，獲得了18 892 個(gè)Unigene，其中1 389 個(gè)Unigene被京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）注釋到，分屬16 類(lèi)代謝途徑；Huang Yating等[16]對(duì)藥用真菌桑黃的菌絲體轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序分析，獲得25 811 個(gè)Unigene，并發(fā)現(xiàn)23 個(gè)候選基因可能與甾醇的生物合成有關(guān)；Yang Fang等[17]對(duì)白蟻蘑菇進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，獲得6 494 個(gè)Unigene，并發(fā)現(xiàn)在白蟻蘑菇中許多已知的酶類(lèi)和三萜皂苷的生物合成有關(guān)；Shu Shaohua等[18]對(duì)茯苓的菌絲體和菌核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分別獲得40 939 個(gè)Unigene和37 220 個(gè)Unigene，并發(fā)現(xiàn)在茯苓中萜類(lèi)化合物的生物合成只能通過(guò)甲戊二羥酸（mevalonic acid pathway，MVA）途徑；在草菇[19]、牛樟芝[20]、酵母[21]、紫背天葵[22]等多個(gè)物種的研究中都應(yīng)用了轉(zhuǎn)錄測(cè)序技術(shù)。

本課題組前期研究結(jié)果表明，在灰樹(shù)花液體發(fā)酵體系中添加天麻提取物或其主要成分均可顯著促進(jìn)灰樹(shù)花多糖的合成[23-27]?；谔炻樘崛∥锏却龠M(jìn)灰樹(shù)花多糖合成的機(jī)理尚不明確，本研究以真菌灰樹(shù)花菌絲體為材料，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，并對(duì)所有Unigene進(jìn)行生物信息學(xué)分析，探明灰樹(shù)花細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的相關(guān)基因，為研究天麻提取物促進(jìn)灰樹(shù)花多糖的合成的機(jī)理、進(jìn)一步挖掘功能基因及開(kāi)發(fā)分子標(biāo)記提供科學(xué)方法的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

灰樹(shù)花菌株（Grifola frondosa，菌種編號(hào)：51616）中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心；Total RNA Extractor（Trizol） 生工生物工程（上海）股份有限公司；Qubit2.0 RNA檢測(cè)試劑盒、Qubit2.0 DNA檢測(cè)試劑盒美國(guó)Thermo Fisher公司。

1.2 儀器與設(shè)備

BXM-30R立式滅菌鍋 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)；SW-CJ-1D凈化工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司；TG2-16G低速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)；Qubit2.0熒光計(jì) 美國(guó)Thermo Fisher公司；微型旋渦混合儀 上海滬西分析儀器 廠(chǎng)有限公司；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀美國(guó)Bio-Rad公司；電泳儀 北京市六一儀器廠(chǎng)。

1.3 方法

1.3.1 培養(yǎng)基配制

斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。

液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖30 g/L，酵母膏6 g/L，蛋白胨2 g/L，KH2PO40.5 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L；pH值自然。

發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖50 g/L，酵母膏10 g/L，蛋白胨5 g/L，KH2PO42 g/L，MgSO4·7H2O 2 g/L；pH值自然。

1.3.2 樣品制備

于母種試管中挑取黃豆粒大小菌絲塊接種于斜面中部，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)斜面。在培養(yǎng)好的斜面菌種切取蠶豆大小于液體培養(yǎng)基中，250 mL三角瓶裝液量為100 mL，置于25 ℃、150 r/min搖床培養(yǎng)7d。按10%的接種量，用移液槍量取液體種子于發(fā)酵培養(yǎng)基中，250 mL三角瓶裝液量為100 mL，置于25 ℃、150 r/min搖床培養(yǎng)12 d，過(guò)濾得灰樹(shù)花菌絲體。

1.3.3 總RNA的提取

總RNA提取方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。利用Qubit 2.0 RNA試劑盒檢測(cè)RNA濃度及瓊脂糖凝膠檢測(cè)RNA完整性以及基因組污染情況。檢測(cè)合格的RNA用于后續(xù)測(cè)序。

1.3.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)處理及分析

將測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)去除3’端測(cè)序接頭序列，去除融合后的reads尾部質(zhì)量在20以下的堿基，切除reads中含N部分序列并進(jìn)行污染評(píng)估。利用Trinity軟件（版本trinityrnaseq_rr20140717）通過(guò)序列之間的Overlap將序列延伸成Contig，再根據(jù)序列的Paired-end信息，將Contig連接成轉(zhuǎn)錄本序列；對(duì)拼接序列去重復(fù)，取長(zhǎng)度大于200 bp的序列，通過(guò)組裝的Component從潛在的可變剪接轉(zhuǎn)錄本選取組裝最長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本作為該樣品的Unigene序列，最后將Unigene序列進(jìn)行簡(jiǎn)單重復(fù)序列（simple sequence repeat，SSR）分析并與Nr、Nt、SwissProt、TrEMBL、CDD、PFAM、GO（gene ontology）、KOG、KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，取相似度大于30%且e小于10-5的注釋?zhuān)@得Unigene的注釋信息。

2 結(jié)果與分析

2.1 Unigene拼接

利用Trinity軟件對(duì)測(cè)序得到的原始reads數(shù)據(jù)進(jìn)行拼接，獲得的contig再次組裝得到33 898 個(gè)轉(zhuǎn)錄本，序列信息達(dá)54 167 696 bp（51.66 M），平均長(zhǎng)度1 597.96 bp，N50（判斷灰樹(shù)花菌絲體基因組拼接結(jié)果優(yōu)劣的依據(jù)）為2 969 bp，N90為718 bp。所得轉(zhuǎn)錄本進(jìn)一步拼接獲得18 077 個(gè)Unigene，Unigene總長(zhǎng)度為23 615 260 bp，平均組裝長(zhǎng)度為1 306.37 bp；最長(zhǎng)Unigene為19 899 bp，最短Unigene為201 bp；N50為2 885 bp，N90為445 bp。其中不小于500 bp和不小于1 000 bp分別占總數(shù)的50.33%和36.38%。

圖1 Unigene GC含量分布圖Fig. 1 GC content distribution of Unigene

圖2 Unigene長(zhǎng)度分布圖Fig. 2 Length distribution of Unigene

由圖1中Un igene GC含量分布可知，Unigene的GC含量主要分布在40～60 對(duì)之間。由圖2可以看出，Unigene主要集中在200～300 bp之間和2 000 bp以上，其中在200～300 bp的最多為5 682 個(gè)，占總數(shù)的31.4%；大于2 000 bp為3 889 個(gè)，占總數(shù)的21.5%。

2.2 SSR分析

對(duì)灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行SSR位點(diǎn)分析，篩選標(biāo)準(zhǔn)為：1～6 個(gè)核苷酸序列重復(fù)次數(shù)分別為大于等于10、6、5、5、5和5，兩個(gè)SSR間最大間隔長(zhǎng)度100 bp。從18 077 個(gè)Unigene中共找到1 155個(gè)SSR位點(diǎn)，占總Unigene的6.39%，其中單核苷酸重復(fù)重復(fù)最高為780 個(gè)，占總重復(fù)序列的67.53%，其次是三核苷酸序列，共249 個(gè)，占總重復(fù)序列的21.56%，最少為五核苷酸序列，只有2 個(gè)，僅占0.17%（表1）。在檢出的SSR位點(diǎn)中，出現(xiàn)頻率最高的是A/T（721 個(gè)），其次是C/G（59 個(gè)）、AGC/CTG（53 個(gè)）、ACG/CGT（51 個(gè)）。上述SSR特征分析，有助于開(kāi)展灰樹(shù)花及其同屬物種的基因組差異分析、通用性標(biāo)記開(kāi)發(fā)和遺傳圖譜構(gòu)建的研究。

表1 灰樹(shù)花菌絲體SSR不同重復(fù)基序分布Table 1 Distribution of different repeat motifs in SSR analysis

2.3 Unigene的功能注釋

表2 Unigene 的功能注釋在各數(shù)據(jù)庫(kù)分布情況Table 2 Database distribution of Unigene functional annotation

通過(guò)BLAST程序?qū)nigene序列分別與Nr、Nt、SwissProt、TrEMBL、CDD、PFAM、GO、KOG、KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)。由表2可以看出，18 077 個(gè)Unigene全部成功比對(duì)，其中12 025 個(gè)Unigene至少在一個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中被注釋到，占總數(shù)的66.52%；1 766 個(gè)Unigene在所有的數(shù)據(jù)庫(kù)中都被注釋到，占總數(shù)的9.77%。在Nr和TrEMBL數(shù)據(jù)庫(kù)中被注釋到的Unigene最多，分別為11 651和11 507，占總數(shù)的64.45%和63.66%；在數(shù)據(jù)庫(kù)Nt中被注釋到的最少為3 643 個(gè)，僅占20.15%。

2.3.1 Unigene的Nr數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析

通過(guò)BLAST程序，將 Unigene序列與Nr數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，有11 651 個(gè)Unigene與Nr數(shù)據(jù)庫(kù)中記錄相同，占總Unigene的64.45%?；覙?shù)花轉(zhuǎn)錄組測(cè)序組裝的Unigene與變色栓菌的相似性最多，為2 184 個(gè)，占18.74%；其次是木質(zhì)素降解菌，比對(duì)上的Unigene為1 321 個(gè)，占11.34%。值得注意的是，有24.93%的Unigene屬于其他序列，可能包含了灰樹(shù)花菌絲體與大多數(shù)物種不同的、自身特有的基因序列（表3）。

2.3.2 Unigene的KOG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析

將灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組所有的Unigene與KOG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，有6 461 個(gè)Unigene與KOG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)上，占總Unige ne的35.74%。根據(jù)功能劃分，本研究中所獲灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組功能注釋的Unigene可分25 類(lèi)（圖3）；其中一般功能預(yù)測(cè)類(lèi)基最多，有816 個(gè)，占12.63%；其次為翻譯后修飾、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換、伴侶和翻譯，核糖體結(jié)構(gòu)和生物合成相關(guān)的基因，分別有763 個(gè)和723個(gè)，占11.81%和11.19%。而與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)只有5 個(gè)，與核結(jié)構(gòu)有關(guān)的只有6 個(gè)。

圖3 灰樹(shù)花Unigene的KOG分類(lèi)Fig. 3 KOG functional classifi cation of maitake Unigene

2.3.3 Unigene的GO數(shù)據(jù)庫(kù)注釋分析

GO分類(lèi)是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化分類(lèi)體系，適用于各個(gè)物種，能對(duì)基因進(jìn)行限定和描述。對(duì)灰樹(shù)花菌絲體Unigene進(jìn)行GO功能分析，有8 332個(gè)Unigene被注釋到，分為生物過(guò)程、細(xì)胞組成、分子功能3 大類(lèi)59 個(gè)分支（圖4）。統(tǒng)計(jì)每一類(lèi)的基因數(shù)量發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞組成類(lèi)的19 個(gè)分支中，涉及本轉(zhuǎn)錄組的Unigene最多，為26 962 個(gè)；生物過(guò)程類(lèi)次之，為26 051 個(gè)；分子功能類(lèi)最少，為11 573 個(gè)。其中代謝過(guò)程（5 272 個(gè)）、細(xì)胞過(guò)程（5 714 個(gè)）、細(xì)胞（6 016 個(gè)）、細(xì)胞器（4 532 個(gè)）、細(xì)胞組分（6 014 個(gè)）、催化活性（4 651 個(gè)）及連接（4 742 個(gè)）功能組中涉及的Unigene較多，病毒（3 個(gè)）、病毒組分（3 個(gè)）、通道調(diào)節(jié)活性（2 個(gè)）、金屬伴侶活性（6 個(gè)）、受體調(diào)節(jié)活性（1 個(gè)）、蛋白標(biāo)簽（3 個(gè)）及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子活性（7 個(gè)）功能組涉及的Unigene較少（表4）。

表4 灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組GO功能分類(lèi)的Unigene分布TTaabbllee 44 MMaaiittaakkee UUnniiggeennee ddiissttrriibbuuttiioonn iinn ggeennee oonnttoollooggyy

2.3.4 Unigene的KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)注釋分析

KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)能夠系統(tǒng)分析基因產(chǎn)物在細(xì)胞中的代謝途徑以及功能。將灰樹(shù)花菌絲體的Unigene注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行代謝分類(lèi)分析，有5 200個(gè)Unigene被注釋到，占總Unigene的28.77%。被注釋到的通路有376 條，其中核糖體（400 個(gè)）、碳代謝（313 個(gè)）、氨基酸生物合成（245 個(gè)）通路涉及的Unigene較多（表5）。灰樹(shù)花多糖具有抗腫瘤、抗HIV、抗氧化等作用，本研究中在KEGG代謝途徑數(shù)據(jù)庫(kù)注釋到115 條Unigene與灰樹(shù)花多糖合成有關(guān)。這些Unigene及其注釋信息為今后深入開(kāi)展灰樹(shù)花多糖代謝途徑及相關(guān)功能基因等研究提供了理論支持。

表5 KEGG注釋Unigene最多的前20 位代謝通路Table 5 Top 20 pathways with the largest number of annotated Unigenes in KEGG

2.4 Unigene的CDS預(yù)測(cè)

圖4 灰樹(shù)花轉(zhuǎn)錄組CDS長(zhǎng)度分布圖Fig. 4 CDS length distribution for digital transcriptome of maitake

獲取Nr數(shù)據(jù)庫(kù)最佳比對(duì)結(jié)果，通過(guò)該結(jié)果確定Unigene的ORF的讀碼框，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)碼子表確定其CDS及編碼氨基酸序列，未比對(duì)上的Unigene通過(guò)OrfPredict軟件預(yù)測(cè)其CDS序列。最終得到CDS序列片段18 040 個(gè)，其中長(zhǎng)度為200 bp最多，為5 522 個(gè)；長(zhǎng)度為100 bp的次之，為3 198個(gè)；長(zhǎng)度為1 900 bp的最少，為155 個(gè)，序列長(zhǎng)度分布見(jiàn)圖4。

3 討論與結(jié)論

本研究采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)灰樹(shù)花菌絲體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。采用生物信息學(xué)軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果組裝得到18 077 個(gè)Unigene，在所有的Unigene中共檢測(cè)到1 155 個(gè)SSR位點(diǎn)，并對(duì)其進(jìn)行了特征分析，這為灰樹(shù)花及其同屬物種的基因組差異分析、通用性標(biāo)記開(kāi)發(fā)和遺傳圖譜構(gòu)建的研究提供了依據(jù)。

將Unigene與Nr數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，與變色栓菌的相似序列最 多，為2 184 個(gè)，在Swissprot數(shù)據(jù)庫(kù)中檢測(cè)到蛋白同源序列有7 777 條；與KOG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，注釋到的6 461 個(gè)Unigene在真核生物功能系統(tǒng)中分為25 類(lèi)，其中一般功能預(yù)測(cè)類(lèi)最多；利用GO數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行功能注釋?zhuān)蓪⒆⑨尩降? 332個(gè)Unigene分為生物過(guò)程、細(xì)胞組成、分子功能3 大類(lèi)59 個(gè)分支；KEGG通路注釋?zhuān)⑨尩? 200個(gè)Unigene涉及376 條代謝通路，其中有115 個(gè)Unigene與灰樹(shù)花多糖合成有關(guān)，這些數(shù)據(jù)為研究灰樹(shù)花多糖合成途徑提供了依據(jù)。

袁衛(wèi)東等[28]2015年采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)灰樹(shù)花子實(shí)體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，獲得了63 137個(gè)Unigene。將Unigene與Nr數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，與變色栓菌的相似序列最多；在GO數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋到3 大類(lèi)35 個(gè)分支，其中最多的是生物過(guò)程分支；有27 472 個(gè)Unigene在KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中被注釋到239 條代謝途徑。與上述研究結(jié)果相比本實(shí)驗(yàn)建立的灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得的Unigene相對(duì)較少，但Unigene的GO功能分類(lèi)有生物過(guò)程、細(xì)胞組成、分子功能3 大類(lèi)59 個(gè)分支，KEGG通路注釋?zhuān)⑨尩?76 條代謝通路。

本研究采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)灰樹(shù)花菌絲體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，獲得了大量灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組信息，并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，為深入開(kāi)展灰樹(shù)花多糖合成機(jī)理、灰樹(shù)花分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)等研究提供了豐富的數(shù)據(jù)資源。

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Transcriptome Sequencing and Analysis of Grifola frondosa Mycelia

NIE Wenqiang1, WU Tianxiang1,2,*, ZHONG Min1, LU Hongyun1
(1. School of Liquor and Food Engineering, Guizhou University, Guiyang 550025, China;2. Mingde College of Guizhou University, Guiyang 550025, China)

The exopolysaccharide of Grifola frondosa possesses anti-tumor, anti-HIV, and anti-oxidant effects. In order to investigate the genet ic basis for polysaccharide synthesis by G. frondosa, the transcriptome of G. frondosa was sequenced by high-throughput sequencing technology. A total of 74 575 910 reads and 10.4 G data were generated, which formed 18 077 Unigenes after de novo splicing. A total of 11 651 Unigenes we re annotated in the Nr database. Among them, G. frondosa transcriptome had the most similar sequence (18.74%) to M. tumefaciens. A total of 8 332 Unigenes were annotated in the GO database, which were divided into 3 major categories∶ molecular composition, molecular function and biological processes, including 59 branches. Compared with the KEGG database, 5 200 Unigenes were annotated which belonged to 376 metabolic pathways. A total of 1 155 simple sequence repeat (SSR) loci were found in 18 077 Unigenes, among which the highest repeat was single nucleotide whereas the repetition of hexanucleotide was the least, and the frequency of A/T was the highest. In this s tudy, 115 unigenes which have been annotated in the database of KEGG were related to the biosynthesis of polysaccharide by G. frondosa. These annotated Unigenes and the information about them can lay the foundation for further studies on polysaccharide metabolism pathways and related functional genes in G. frondosa.

Grifola frondosa; myce lium; transcriptome sequencing; functional annotation

Q939.99

A

1002-6630（2017）20-0006-06

聶文強(qiáng), 吳天祥, 鐘敏, 等. 真菌灰樹(shù)花菌絲體轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(20)∶ 6-11. DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201720002. http∶//www.spkx.net.cn

NIE Wenqiang, WU Tianxiang, ZHONG Min, et al. T ranscriptome sequencing and analysis of Grifola frondosa mycelia[J].Food Science, 2017, 38(20)∶ 6-11. (in Chinese with English abstract) DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201720002. http∶//www.spkx.net.cn

2016-10-24

國(guó)家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目（31460537）

聶文強(qiáng)（1993—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)樯镄畔W(xué)。E-mail：648462055@qq.com

*通信作者：吳天祥（1965—），男，教授，博士，研究方向?yàn)榘l(fā)酵工程和生物轉(zhuǎn)化。E-mail：txwu@gzu.edu.cn

DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201720002