RP-HPLC法測定參蒲止痛膠囊中咖啡酸的含量

陳艷梅 ，敬永升

1. 商丘市食品藥品檢驗檢測中心，河南 商丘 476000；2. 河南大學 藥學院，河南 開封 475004

RP-HPLC法測定參蒲止痛膠囊中咖啡酸的含量

陳艷梅1，敬永升2

1. 商丘市食品藥品檢驗檢測中心，河南 商丘 476000；2. 河南大學 藥學院，河南 開封 475004

〔目的〕 建立高效液相色譜法測定參蒲止痛膠囊中咖啡酸的含量?！卜椒ā?采用Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱，流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖溶液(25∶75)；流速：1.0 mL/min；檢測波長323 nm?！步Y果〕 咖啡酸在0.063 24～0.632 4 μg范圍內線性關系良好(r=0.999 9)，平均回收率為98.82%，RSD=0.69%(n=6)?！步Y論〕方法操作簡便，靈敏度高、結果準確可靠，可以作為參蒲止痛膠囊質量控制的手段。

參蒲止痛膠囊；咖啡酸；RP-HPLC

Abstract:〔Objective〕To establish an high performance liquid chromatography (HPLC) method for determination of caffeic acid in shenpu Analgesic capsule.〔Methods〕Agilengt Eclipse Plus-C18 chromatographic column was adopted. The mobile phase: methanol-phosphate buffer solution of 25-75 at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength of was 323 nm with external standard method.〔Results〕Caffeic acid shows a good linearity in the range of 0.063 24 ～ 0.632 4 μg/mL (r=0.999 9) and the average recovery was 98.82%，RSD=0.69%(n=6).〔Conclusion〕the method is simple, high sensitivity, accurate and reliable results and it can be used as a reference of Shenpu Analgesic capsule quality control mean.

Keywords: shenpu Analgesic capsule Caffeic acid RP-HPLC

參蒲止痛膠囊是經多年臨床和實踐證實具有較高療效的醫(yī)療機構制劑(批準號豫藥制字Z20121452),是由丹參、蒲公英、醋延胡索、澤蘭、紅花、當歸等九味中藥經混合、粉碎等工藝加工制成，具有活血散瘀、消腫止痛的功效，用于治療跌打損傷、淤血、疼痛等癥[1]。蒲公英為方中君藥,其主要藥效成分為咖啡酸，具有廣泛的抗菌抗病毒作用[2]。參蒲止痛膠囊作為醫(yī)院制劑,其質量標準收載于河南省醫(yī)療機構制劑標準中[3]。但其中僅有丹參對照藥材和丹參酮ⅡA的薄層鑒別方法，而缺少咖啡酸的檢測方法[4]。為了更好地控制該制劑的質量,筆者采用反相-高效液相色譜法(RP-HPLC)對該方君藥中的咖啡酸進行了含量測定。通過線性關系、精密度、準確度、重復性、穩(wěn)定性、回收率等一系列方法學驗證，證明該方法準確、靈敏、簡便快捷。其含量測定準確可靠，可以作為參蒲止痛膠囊中咖啡酸含量的質量控制標準。

1 儀器與試藥

Agilengt 1260高效液相色譜儀(自動進樣)； XS205DU電子分析天平(瑞典梅特勒)； DSQ10260超聲儀(上海特惠電子儀器有限公司)?？Х人釋φ掌?中國食品藥品檢定研究院，批號：110885-200102)；甲醇為色譜純，磷酸為分析純、水為重蒸餾水。參蒲止痛膠囊(民權縣中醫(yī)院提供，批號：160323、160722、160911)。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

對照品溶液的制備：取咖啡酸對照品10.54 mg，精密稱定，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲使完全溶解后，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得0.105 4 μg/L對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液3.00 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

供試品溶液的制備：取批號為160323的參蒲止痛膠囊樣品30粒，去掉囊殼，將內容物混合精密稱量，精密稱取相當于15粒膠囊內容物的重量，置10 mL棕色量瓶中。加甲醇溶液適量，浸漬2 h，超聲30 min。完全溶解后，用流動相稀釋并定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2 實驗條件的選擇

色譜條件： Thermo Scientific C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-pH=3.9磷酸鹽緩沖溶液(25∶75)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：323 nm；柱溫：室溫。對照品溶液、供試品溶液分別進樣10 μL，咖啡酸對照品溶液HPLC色譜圖，見圖1。供試品溶液HPLC色譜圖，見圖2。

在上述色譜條件下，咖啡酸保留時間約為14.3 min，理論板數(shù)按咖啡酸計算不低于3 000。

圖1 對照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系 取2.1項下咖啡酸對照品溶液，經0.22 μm的微孔濾膜濾過，注入進樣瓶，以2.2項下色譜條件，分別進樣2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，各進樣量重復進樣3次，繪制色譜圖，分別記錄峰面積，取3次峰面積的平均值，以峰面積A對進樣量m(μg)進行線性回歸，得回歸方程：

A=6 007.8 m-11.803，r=0.999 9。

結果顯示，咖啡酸在0.063 24 μg～0.632 4 μg質量范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗 取2.1項下咖啡酸對照品溶液，經0.22 μm的微孔濾膜濾過，注入進樣瓶，連續(xù)進樣6次，每次進樣10 μL，繪制色譜圖，分別記錄峰面積，計算其相對標準偏差RSD=0.44% (n=6)。結果表明，該方法精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取同一批號的供試品按2.1項下供試品溶液的配制方法制備供試品溶液，經0.22 μm的微孔濾膜濾過，分別在4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h進樣測定，每次進樣量為10 μL，繪制色譜圖，記錄峰面積，計算其相對標準偏差RSD=1.38%(n=6)。結果表明,供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

2.3.4 重復性試驗 取同一批號的供試品按2.1項下供試品溶液的配制方法制備供試品溶液6份，經0.22 μm的微孔濾膜濾過，注入進樣瓶，每份每次進樣10 μL，繪制色譜圖，記錄峰面積，計算其相對標準偏差RSD=1.25%。結果表明,該方法重復性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 采用加樣回收法，精密量取6份已知含量的供試品溶液5.00 mL，置10 mL棕色量瓶中，定量加入對照品儲備液1.50 mL，用甲醇溶液定容、搖勻，經0.22 μm的微孔濾膜濾過，每次進樣10 μL，記錄色譜圖，計算回收率。測得咖啡酸的平均回收率為98.82%，RSD=0.69%(n=6)，結果顯示，該方法準確度較高。

2.4 含量測定

取三個批號的參蒲止痛膠囊樣品，按2.1項下供試品溶液配制方法，制備每個批號的供試品溶液，分別用0.22 μm的微孔濾膜濾過，注入進樣瓶，按2.2項下色譜條件每次進樣10 μL，繪制色譜圖，記錄峰面積，由每個批號峰面積的平均值按外標法計算參蒲止痛膠囊中咖啡酸的含量(mg/粒)，結果見表1。

表1 含量測定結果

3 討論

本實驗采用反相高效液相色譜法測定參蒲止痛膠囊中咖啡酸的含量，以甲醇-磷酸鹽緩沖溶液(25∶75)為流動相，流速為1.0 mL/min；檢測波長為323 nm。線性關系考察得知，咖啡酸在0.063 24～0.632 4 μg范圍內線性關系良好(r=0.999 9)，平均回收率為98.82%，RSD=0.69%,n=6。且精密度好、準確度高、穩(wěn)定性及重復性均較好，作為參蒲止痛膠囊中咖啡酸含量測定的可靠方法，可作為測定參蒲止痛膠囊中咖啡酸質量控制的依據(jù)。

[1] 朱德杰.HPLC法測定蒲公英片中咖啡酸的含量[J]. 數(shù)理醫(yī)藥學雜志, 2013,29(6):704-705.

[2] 丘偉，李芳桂. HPLC法測定復方溪黃草顆?？Х人岬暮縖J].中醫(yī)藥導報, 2014，20(11): 98-99.

[3] 王秀梅，玉華.HPLC法測定蒙藥查干掃日勞-4湯中咖啡酸的含量[J].內蒙古民族大學學報,2015,30(1):71-72.

[4] 萬茵，黃婧嫣等. HPLC同時測定毛蕊花糖苷、咖啡酸和羥基酪醇[J].分析實驗室, 2016, 35(1)30-33.

[責任編輯段金卯]

DeterminationofCaffeicacidinshenpuAnalgesiccapsulebyRP-HPLC

CHEN Yanmei1, JING Yongsheng

1.Shangqiu Food and Drug Inspection Testing Center, Shangqiu , Henan Shangqiu 476000,China; 2. Pharmaceutical College of He Nan University, Kai Feng, 475004, China

R927.2

A

1672-7606(2017)03-0177-02

2016-11-17

陳艷梅(1982-)，女，河南永城人，主管藥師，研究方向：藥物分析。