鹽酸法舒地爾注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的方法學(xué)驗(yàn)證

劉麗英程延慶

1.哈爾濱樂(lè)泰藥業(yè)有限公司 150000；2.哈爾濱弗曼德生物科技有限公司 150000

鹽酸法舒地爾注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的方法學(xué)驗(yàn)證

劉麗英1程延慶2

1.哈爾濱樂(lè)泰藥業(yè)有限公司 150000；2.哈爾濱弗曼德生物科技有限公司 150000

為了保證鹽酸法舒地爾注射液相應(yīng)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)檢測(cè)方法具有良好的專(zhuān)屬性以及靈敏性，并且確保相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果能夠具有較高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，特此進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

鹽酸法；細(xì)菌；舒地爾注射液；肉毒素

1.實(shí)驗(yàn)材料

鱟試劑：湛江市安度斯生物有限公司生產(chǎn)，批號(hào)1005240，規(guī)格5ml。

細(xì)菌內(nèi)毒素相應(yīng)檢查用水：批號(hào)201070，效價(jià)120EU/支，中國(guó)藥品生物制品檢定所生產(chǎn)。

供試品：自制，批號(hào) 20110301、20110302、20110303，規(guī)格：2ml：30mg。

旋渦混合器：XW-80A型，廠(chǎng)家：上海醫(yī)大儀器廠(chǎng)。

電熱恒溫水浴鍋：DK-98-Z型，廠(chǎng)家：天津泰斯特儀器有限公司。

2.靈敏度復(fù)核

在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中要充分的重視相關(guān)操作規(guī)范，首先需要把細(xì)菌內(nèi)毒素的相關(guān)檢查水當(dāng)做溶劑，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的相關(guān)工作標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行相應(yīng)的溶解操作，在這個(gè)過(guò)程中為了能夠保證這一操作能夠具有良好的效果，還需要實(shí)驗(yàn)人員能夠進(jìn)行相應(yīng)的搖勻操作，使得實(shí)驗(yàn)藥品和實(shí)驗(yàn)溶解劑能夠完全的融合，在完成了這一操作的基礎(chǔ)之后還需要實(shí)驗(yàn)人員將這些藥劑制成2.0λ規(guī)格、1.0λ規(guī)格、0.5λ規(guī)格、0.25λ規(guī)格的細(xì)菌內(nèi)毒素相關(guān)的工作標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的溶液，在實(shí)驗(yàn)室各種實(shí)驗(yàn)設(shè)備全面的情況下，每次在進(jìn)行稀釋的過(guò)程中還需要將溶液放置到漩渦混合器上面進(jìn)行混合操作，并且還要保證儀器的使用時(shí)間在三十秒以上。在后續(xù)的施工之中也要充分的遵照各環(huán)節(jié)的操作規(guī)范，一般情況下在使用細(xì)菌內(nèi)毒素相應(yīng)的檢查水作為溶劑，對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行相應(yīng)稀釋操作的時(shí)候會(huì)采用以下的稀釋流程：120EU+1ml水—→120EU/ml—→2EU/ml—→1.0EU/ml（4λ）—→0.5EU/ml—→0.25EU/ml—→0.125EU/ml—→0.0625EU/ml

為了使實(shí)驗(yàn)的結(jié)果能夠具有較強(qiáng)的說(shuō)服力以及科學(xué)性，本次實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行檢驗(yàn)的過(guò)程中采用對(duì)照試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方式，并且同時(shí)設(shè)置了四組對(duì)照實(shí)驗(yàn)組，在每個(gè)實(shí)驗(yàn)室管之都放滴入了零點(diǎn)一毫升的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的溶液。與此同時(shí)，還要使用內(nèi)毒素相應(yīng)的檢查水制作出兩支陰性的對(duì)照試驗(yàn)試試管。為了保證藥品能夠完全的融合，還需要在完成融合之后，將試管進(jìn)行輕微的搖晃混勻。另外，還需要在試管的端口處使用相應(yīng)的封口材料對(duì)試管口進(jìn)行封口操作，之后將處理完畢的試管以垂直的角度，逐漸的放入到水溫為三十六攝氏度到三十八攝氏度之間的溫水中，維持這一溫度狀態(tài)五十八攝氏度到六十二攝氏度之間之后進(jìn)行相應(yīng)的觀(guān)察工作，實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)結(jié)果記錄如表.

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果（0.25EU/ml）

結(jié)果：根據(jù)公式λc=lg-1（∑X/4），計(jì)算出λc=0.210 EU/ml，λ c在0.5λ～2.0λ范圍內(nèi)。因此該批號(hào)的鱟試劑靈敏度符合要求。

表2 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果（0.125EU/ml）

結(jié)果：根據(jù)公式λc=lg-1（∑X/4），計(jì)算出λc=0.105 EU/ml。λ c在0.5λ～2.0λ范圍內(nèi)。

3.限度的確定

采用公式 L＝K/M（M：以成人每公斤體重每小時(shí)給藥的最大劑量來(lái)計(jì)算），本品為注射劑，根據(jù)用法用量，成人一日2～3次，每次30mg，以 50～100ml的生理鹽水或葡萄糖注射液稀釋后靜脈滴注，每次靜滴時(shí)間約為30分鐘，注射時(shí)間不足1小時(shí)，按1小時(shí)計(jì)算。

按最大靜滴量100ml/小時(shí)計(jì)算，中國(guó)人平均體重60kg計(jì)算，則M＝100÷60÷1=1.67ml/kg/h，故本品的細(xì)菌內(nèi)毒素的理論限值：L＝5÷1.67=3 Eu/ml。

4.預(yù)干擾試驗(yàn)

4.1 供試品溶液的制備

以鱟試劑靈敏度0.125Eu/ml為基準(zhǔn)，按MVD＝LC/λ＝0.5/0.125＝4倍（C按1.0ml/ml計(jì)算），當(dāng)靈敏度為λ=0.25EU/ml時(shí)，供試品溶液的最大稀釋倍數(shù)為：2倍。

4.2 含供試品及內(nèi)毒素混合溶液的制備

鱟試劑靈敏度為 0.25EU/ml：取供試品溶液 0.1ml與 1.0 EU/ml內(nèi)毒素溶液0.1ml以1：1比例混合；依此方法依次制成供試品稀釋倍數(shù)為1、2、4、8分別與1.0EU/ml內(nèi)毒素1：1的混合溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。

鱟試劑靈敏度為0.125EU/ml：取供試品溶液0.1ml與0.5 EU/ml內(nèi)毒素溶液0.1ml以1：1比例混合；依此方法依次制成供試品稀釋倍數(shù)為1、2、4、8分別與0.5EU/ml內(nèi)毒素1：1的混合溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。

5.干擾實(shí)驗(yàn)的分析研究

為了保證對(duì)干擾實(shí)驗(yàn)的相關(guān)研究的準(zhǔn)確性，本次試驗(yàn)采用二零一零年版本的中國(guó)藥典記錄中附錄所記載的實(shí)驗(yàn)方式，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素相應(yīng)的檢查法實(shí)施了干擾實(shí)驗(yàn)。選λ=0.125EU/ml和λ=0.25EU/ml鱟試劑。將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品分別用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至4λ、2λ、1λ、0.5λ內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液（Es）。分取細(xì)菌內(nèi)毒素系列濃度分別與供試品溶液（稀釋倍數(shù)分別為4倍、2倍）按1：1的比例混合制成 2λ、1λ、0.5λ、0.25λ的含內(nèi)毒素的供試品溶液（Et），并同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照，37℃±1℃保溫1小時(shí)，結(jié)果見(jiàn)表3以及表4。

供試品稀釋過(guò)程：1支供試品（2ml：30mg）—→15mg/ml—→7.5mg/ml

內(nèi)毒素溶液的稀釋濃度：120EU+1ml水—→120 EU/ml—→2.0EU/ml—→1.0EU/ml—→0.5EU/ml—→0.25EU/ml—→0.125EU/ml

表3 干擾試驗(yàn)結(jié)果（鱟試劑：湛江安度斯生物制品廠(chǎng)0.125EU/ml）

結(jié)果：ES在 0.5λ-2λ范圍內(nèi)，且 Et也在 0.5ES-2λES之間，說(shuō)明供試品稀釋4倍對(duì)檢測(cè)沒(méi)有干擾。

表4 干擾試驗(yàn)結(jié)果（鱟試劑：湛江安度斯生物制品廠(chǎng)0.25EU/ml）

結(jié)果：ES在 0.5λ-2λ范圍內(nèi)，且 Et也在 0.5ES-2λES之間，說(shuō)明供試品稀釋2倍對(duì)檢測(cè)沒(méi)有干擾。

6.樣品的檢查

依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄XI E），觀(guān)察并記錄結(jié)果，結(jié)果見(jiàn)表5

表5 三批樣品細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定結(jié)果

7.結(jié)束語(yǔ)

本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)研究結(jié)果能夠看出，本品的細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)檢測(cè)方法具有良好的專(zhuān)屬性以及靈敏性，因此本法可作為鹽酸法舒地爾注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法。

[1] 孫菊元，顧炳仁.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢測(cè)注射用鹽酸大觀(guān)霉素中細(xì)菌內(nèi)毒素的研究[J].海峽藥學(xué).1999（04）

[2] 張燦，劉文君，張明露，田芳，楊毅，安代志.水中細(xì)菌內(nèi)毒素污染特性及檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].環(huán)境科學(xué).2014（04）

[3] 吳鑫，吳向群，周志良，朱碧君.鹽酸異丙嗪注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)[J].齊魯藥事.2012（05）

R111.3

A

1672-5018（2017）02-020-1