H型高血壓患者代謝性相關(guān)指標(biāo)及MTHFR基因多態(tài)性分析

劉玲玲+唐智+肖林

[摘要]目的 分析MTHFR基因在高血壓患者中的多態(tài)性，探討H型高血壓與同型半胱氨酸（Hcy）等代謝性生化指標(biāo)的關(guān)系。方法 選取2013年7月～2016年6月我院收治的100例H型高血壓患者和100例普通高血壓患者為研究對象，檢測兩組的血漿同型半胱氨酸（Hcy）和血脂、血糖等生化指標(biāo)，比較MTHFR基因多態(tài)性。結(jié)果 H型高血壓組的Hcy、尿酸（UA）、肌酐（Cr）水平明顯高于普通高血壓組（t=14.989、6.672、4.832，P<0.05）；H型高血壓組的MTHFR 677C/T 基因型頻率分布以T等位基因為主，普通高血壓組以C等位基因頻率分布為主（P<0.05）。結(jié)論 高Hcy、UA、Cr水平與H型高血壓的發(fā)生密切相關(guān)，MTHFR基因677C/T純合突變TT基因型可能是H型高血壓的重要遺傳因素。

[關(guān)鍵詞]H型高血壓；MTHFR；基因多態(tài)性；同型半胱氨酸

[中圖分類號] R544.1 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）08（c）-0098-04

[Abstract]Objective To analyze the polymorphism of MTHFR gene in patients with hypertension，and to explore the relationship between H-type hypertension and metabolic biochemical indexes such as homocysteine （Hcy）.Methods 100 patients with H-type hypertension and 100 patients with general hypertension treated in our hospital from July 2013 to June 2016 were selected as study subjects.Plasma homocysteine （Hcy） and blood lipids，blood glucose and other biochemical indicators were detected in two groups，and the polymorphism of MTHFR gene was compared.Results Hcy，uric acid （UA），creatinine （Cr） level in the H-type hypertension group were significantly higher than those in the general hypertension group （t=14.989，6.672，4.832，P<0.05）.The frequency distribution of MTHFR 677C/T genotype frequency of the H-type hypertension group was mainly T allele，and the frequency distribution of C allele was dominant in the general hypertension group （P<0.05）.Conclusion The level of Hcy，UA and Cr are closely related to the occurrence of H-type hypertension.Homozygous mutant TT genotype of MTHFR gene 677C/T may be an important genetic factor of H-type hypertension.

[Key words]H-type hypertension；MTHFR；Gene polymorphism；Homocysteine

高血壓是影響心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)，血漿同型半胱氨酸（homocysteine， Hcy）水平>10 μmol/L的原發(fā)性高血壓即為H型高血壓（H-type hypertension）[1]。H型高血壓患者Hcy水平較普通高血壓患者顯著升高，而Hcy是動脈粥樣硬化性心血管疾病強有力的預(yù)測因子[2]，且與腦卒中發(fā)生存在密切的關(guān)系[3]。亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）可使同型半胱氨酸轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸，參與甲基化反應(yīng)。本文重點探討H型高血壓患者代謝性相關(guān)指標(biāo)及分析MTHFR基因多態(tài)性，以期為H型高血壓的治療及相關(guān)并發(fā)癥的預(yù)防提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年7月～2016年6月經(jīng)本院確診的100例H型高血壓患者和100例普通高血壓患者為研究對象。入選標(biāo)準(zhǔn)：入選的病例組患者嚴(yán)格按照高血壓病JNCⅦ診斷標(biāo)準(zhǔn)。H型高血壓組患者：男68例，女32例，年齡40～72歲，平均（59.31±10.52）歲；普通型高血壓組患者男64例，女36例，年齡43～75歲，平均（61.24±10.78）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并急慢性腎功能不全、心功能不全、妊娠或正口服避孕藥或其他可能影響血壓藥物患者；②近1個月內(nèi)服用維生素B6、葉酸、維生素B12等影響血漿Hcy水平的藥物患者；③繼發(fā)性高血壓或者血壓難以控制達標(biāo)者。兩組患者的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 Hcy的檢測 采集患者空腹靜脈血3 ml，3000 r/min離心10 min（離心半徑3 cm）后置于-80℃冰箱待檢。Hcy檢測采用循環(huán)酶法，試劑盒由臺灣臺塑生醫(yī)科技股份有限公司提供，操作按照試劑盒說明進行。

1.2.2生化指標(biāo)檢測 采集所有患者空腹靜脈血4 ml，高速離心后取血清，檢測三酰甘油（TG）、總膽固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDL）、血糖（GLU）、尿酸（UA）及肌酐（Cr）含量。本研究采用奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀及原裝配套試劑盒，檢測方法：酶學(xué)比色法。endprint

1.2.3 MTHFR 基因多態(tài)性分析 MTHFR基因多態(tài)性檢測采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）法，提取樣本基因DNA，采用PCR-RFLP法擴增MTHFR 677C/T基因片段，擴增片段及產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶進行酶切后，使用2%瓊脂糖凝膠電泳分離，紫外線凝膠成像儀判斷基因型，觀察不同類型高血壓患者MTHFR基因多態(tài)性及677C/T基因片段分布。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，Hcy等生化指標(biāo)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗；MTHFR基因型頻率采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組患者不同生化指標(biāo)的比較

H型高血壓組的Hcy、UA、Cr水平明顯高于普通高血壓組（P<0.05）；兩組患者的TG、CHO、LDL、GLU水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗

使用 Hardy-weinberg 遺傳平衡檢驗軟件對兩組人群3個位點的基因型分布進行平衡檢驗，結(jié)果顯示普通高血壓組符合 Hardy-weinberg 遺傳平衡。樣本代表性良好（表2）。

2.3 酶切反應(yīng)結(jié)果

MTHFR C677T位點基因型 CC出現(xiàn)282 bp條帶；CT為282、176、106 bp三個條帶；TT為176、106 bp 兩個條帶（圖1）。

2.4 測序結(jié)果

根據(jù)測序圖的單峰、雙峰來判斷基因型，單峰為純合基因型，雙峰為雜合基因型。C677C和T677T均為單峰，C677T為雙峰（圖2）。

2.5兩組患者MTHFR基因型頻率及等位基因頻率分布的比較

H型高血壓組MTHFR 677C/T 基因型頻率分布以T等位基因為主，普通高血壓組以C等位基因頻率分布為主，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表3）。

3 討論

H型高血壓是伴同型半胱氨酸升高的高血壓，它包括高血壓、高Hcy兩種危險因素。已有研究證明，Hcy作為蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，是動脈粥樣硬化性心血管疾病強有力的預(yù)測因子[4]，1969年，哈佛病理學(xué)家Mcully教授首次提出Hcy可導(dǎo)致血管動脈粥樣硬化。2004年，Stroke雜志上對Hcy血管損傷機制給予全面闡述：通過氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷內(nèi)皮細(xì)胞；通過炎癥因子破壞機體凝血和纖溶平衡，使機體處于血栓前狀態(tài)通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的增殖等，從而加速血管內(nèi)動脈粥樣硬化的過程。因為Hcy在動脈粥樣硬化的啟動與發(fā)展中的顯著地位，西方科學(xué)界把它稱為“21世紀(jì)新的膽固醇”。已經(jīng)有研究證實，血漿Hcy每升高5 μmol/L，腦卒中風(fēng)險增高59%，因此，血漿Hcy水平對預(yù)測動脈粥樣硬化性心血管疾病、腦卒中有重要意義[2-3]。關(guān)于心腦血管疾病的發(fā)生與Hcy的關(guān)系，總結(jié)可能的發(fā)病機制如下[5]：①Hcy對心臟、腦部血管內(nèi)皮細(xì)胞具有一定的毒性作用，以及Hcy可導(dǎo)致血液中血小板的黏附性增加；②已有研究證明[6]，Hcy及其衍生物能使血小板聚集和凝血因子Ⅴ的活性受到影響，主要是Hcy及其衍生物會增加血小板凝血惡烷的產(chǎn)生；③Hcy可能影響血栓調(diào)節(jié)素的表達和蛋白C的活性，而表現(xiàn)為一種血栓劑?？傊?，大量的研究表明，高Hcy血癥是心腦血管疾病發(fā)生的重要的獨立的危險因素之一。由我國科學(xué)家自主研發(fā)的Ⅰ類新藥依那普利葉酸片已證實具有良好的控制H型高血壓的療效，并對亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T TT基因型患者降壓降Hcy效果更佳[7]；在以往的研究中，高血壓的發(fā)生和血脂、血糖等代謝異常密切相關(guān)[8-11]。H型高血壓是血漿Hcy水平>10 μmol/L的原發(fā)性高血壓。本研究中，H型高血壓組，中Hcy、UA、Cr水平明顯高于普通高血壓組，兩組患者的TG、CHO、LDL、GLU水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示高血脂、高血糖是導(dǎo)致高血壓發(fā)病的重要因素，而Hcy、UA、Cr與H型高血壓的發(fā)生密切相關(guān)。

本研究中，H型高血壓組MTHFR 677C/T基因型頻率分布以T等位基因為主，普通高血壓組以C等位基因頻率分布為主。MTHFR 基因定位于染色體1q36.3，第C677T位點突變是目前已知的人類最常見且最重要的，其會影響酶的熱敏感性，降低酶活性。血清MTHFR中C677T的突變可導(dǎo)致血漿中Hcy和亞甲基四氫葉酸濃度上升，降低甲基化水平[12-15]。

本研究結(jié)果表明，高Hcy、UA、Cr水平與H型高血壓的發(fā)生密切相關(guān)，MTHFR基因677C/T純合突變TT基因型可能是H型高血壓的重要遺傳因素，因此，臨床對H型高血壓患者需同時給予降血壓和降血漿Hcy的藥物治療，可預(yù)防腦卒中的發(fā)生，改善患者預(yù)后。

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（收稿日期：2017-05-12 本文編輯：許俊琴）endprint