紅斑角化癥一家系臨床和遺傳特征分析

高亞1 石繼海2

1.包頭醫(yī)學(xué)院 2.包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 皮膚科

紅斑角化癥一家系臨床和遺傳特征分析

高亞1 石繼海2

1.包頭醫(yī)學(xué)院 2.包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 皮膚科

檢測一中國漢族紅斑角化病家系的 GJB3、GJB4基因的致病性突變。探討紅斑角化病致病基因的分子發(fā)生機(jī)制。在本家系中未檢測到GJB3、GJB4基因突變。

紅斑角化；GJB3；GJB4；基因

1.1 臨床特點(diǎn)

本研究對(duì)象為在我院皮膚科門診收集的1例中國漢族紅斑角化癥病人整個(gè)家系的血樣并與 20例無親緣關(guān)系正常健康人做對(duì)照。該家系患者的臨床表現(xiàn)為紅斑角化病，先證者，女，40歲，全身紅斑、脫屑30余年。自幼即全身紅斑，每年夏秋季皮疹加重，冬季好轉(zhuǎn)。皮疹呈紅色，片狀，隨著光照加重，自覺瘙癢。先證者皮損組織病理檢查結(jié)果顯示為：網(wǎng)籃狀角化過度，灶狀角化不全，顆粒層增生，棘層肥厚，符合紅斑角化病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 先證者簽署皮損活檢切除術(shù)知情同意書后，選擇后背部一處典型皮損，常規(guī)消毒、鋪無菌洞巾，2%利多卡因局麻后切取皮損組織，縫合切口，70%酒精擦拭后無菌敷料覆蓋。

1.2.2 抽取紅斑角化癥先證者及其家人和 20例正常對(duì)照者靜脈血約4ml 置于 EDTAk2抗凝管中，標(biāo)本于－80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）用于擴(kuò)增已知DNA序列的DNA片段。反應(yīng)混合體系都在模板鏈在三種不同溫度下進(jìn)行 PCR變性-退火-延伸三個(gè)基本步驟的循環(huán)。全部過程可在 PCR 儀上自動(dòng)完成。 PCR 條件反應(yīng)循環(huán)設(shè)置：：94 ℃預(yù)變性 3 min；94 ℃ 30 s，55 ℃30 s，72 ℃ 1 min，32 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5min。取 2 μl PCR 產(chǎn)物行 2%瓊脂糖凝膠電泳分析。 產(chǎn)物放置于 4℃冰箱中保存。PCR 片段純化后用ABI3100 自動(dòng)測序儀，用 3730xl測序儀進(jìn)行雙向測序，用PolyPhred軟件包分析所得到的目的片段的測序結(jié)果。

2.結(jié)果

通過患者的臨床表現(xiàn)、病理結(jié)果及家譜分析確診為紅斑角化病， 先證者和20例健康對(duì)照均未測出突變點(diǎn)，所有個(gè)體中均未檢測到GJB3、GJB4基因突變。

先證者的GJB3測序結(jié)果在245位點(diǎn)處未見突變

健康對(duì)照者的GJB3測序結(jié)果在245位點(diǎn)處未見突變

先證者的GJB4測序結(jié)果在317位點(diǎn)處未見突變

健康對(duì)照者的GJB4測序結(jié)果在317位點(diǎn)處未見突變

3.討論

EKV由Mendes da Costa于1925年首次報(bào)道并命名，是一種罕見常染色體顯性的遺傳性角化性皮膚病。EKV有兩種皮損表現(xiàn)：一種為斑塊呈圖案形、逗點(diǎn)形、圓形或多環(huán)形，邊界清楚且斑塊相對(duì)固定的角化過度性皮損。另一種為斑塊呈不穩(wěn)定形，邊界清楚但斑塊分布相對(duì)散亂，形態(tài)、位置、數(shù)量、大小短時(shí)間內(nèi)極易變化或消失（常由內(nèi)外環(huán)境因素，如溫度、皮膚損傷、光照、壓力等的變化所誘發(fā)）。皮損多累計(jì)臀部和四肢伸側(cè)可伴有掌跖角化。EKV組織病理學(xué)表現(xiàn)為角化不全、角化過度,棘層不規(guī)則增厚，乳頭瘤樣增生，真皮非特異性炎性細(xì)胞浸潤。1997年 Richard 等[5] 利用多點(diǎn)連鎖分析和單倍體分析法，確定EKV 在GJB3上發(fā)生了突變。2000 年 Macari 等[2]在 1 例 患 EKV 家系中發(fā)現(xiàn)了GJB4 基因突變。2000年RihcdarG等[6] 對(duì)13個(gè)獨(dú)立的EKV家系進(jìn)行了基因突變的篩查分析,發(fā)現(xiàn)其中5個(gè)家系在GJB4上存在6種不同基因突變,但GJB3均未見突變,說明了EKV具有遺傳異質(zhì)性。此后的大量報(bào)道EKV 致病基因均有 GJB3 或 GJB4 的基因突變，并且EKV 在由GJB4 基因突變導(dǎo)致的角化范圍相對(duì)局限、病情相對(duì)GJB3 基因突變導(dǎo)致的臨床癥狀相比稍輕，以往各種研究表明EKV突變的表型與基因、種族、環(huán)境等有關(guān)，與基因型并不存在明確的關(guān)系。

PSEK又稱為 Gottron 綜合征或者對(duì)稱性進(jìn)行性先天性紅皮癥，首先由 Darier首次報(bào)道并命名。PSEK的皮損表現(xiàn)為：斑塊為角化過度性紅斑，呈對(duì)稱性、固定性，邊界清楚且斑塊上覆鱗屑。皮損常累及肘膝伸側(cè)可伴有掌跖角化，一般不累計(jì)面胸腹部，常與嬰幼兒期發(fā)病至青春期皮損最為嚴(yán)重。PSEK組織病理學(xué)表現(xiàn)為表皮角化過度、角化不全、顆粒細(xì)胞層細(xì)胞核可空泡化、棘層肥厚，真皮非特異性炎細(xì)胞浸潤等。PSEK的致病基因尚未確定，可疑致病基因包括LOR、GJB3 和GJB4基因等[3]，其發(fā)病機(jī)制仍需我們進(jìn)一步研究。

EKV和 PSEK為EKS 的兩種不同的臨床類型二者均為常染色體顯性遺傳性皮膚病病情并且具有不完全外顯和差異性表達(dá)，均具有遺傳異質(zhì)性，因?yàn)镋KV和PSEK的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)不同，EKV和PSEK可以認(rèn)為并非同一種疾病。EKV的致病基因定位于連接蛋白基因GJB3和GJB4。PSEK致病基因尚未最終確定，還需進(jìn)一步研究。

[1]進(jìn)行性對(duì)稱性紅斑角皮癥一家系報(bào)道[J].李海濤,郭朝霞,楊蓉婭.實(shí)用皮膚病學(xué)雜志.2013(06)

[2]進(jìn)行性對(duì)稱性紅斑角化癥1家系報(bào)道[J].袁相鳳,李平,崔勇,楊森. 中國皮膚性病學(xué)雜志.2010(01)

R473.5

A

1672-5018（2017）05-216-01