上海市一起蛋雞心包積水-肝炎綜合征的緊急流行病學(xué)調(diào)查

楊德全，朱九超，齊新永，鞠厚斌，周錦萍，劉春國(guó)，王靖飛

（1. 上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150001）

上海市一起蛋雞心包積水-肝炎綜合征的緊急流行病學(xué)調(diào)查

楊德全1，朱九超1，齊新永1，鞠厚斌1，周錦萍1，劉春國(guó)2，王靖飛2

（1. 上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150001）

2016年7月1日，上海市某蛋雞場(chǎng)62日齡蛋雞出現(xiàn)發(fā)病和死亡現(xiàn)象，多次用抗生素治療無(wú)效。為詳細(xì)了解雞場(chǎng)發(fā)病情況，分析導(dǎo)致疫病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素，以便及時(shí)提出行之有效的防控建議，通過(guò)詢(xún)問(wèn)、現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室診斷等方式開(kāi)展了緊急流行病學(xué)調(diào)查；采用描述性流行病學(xué)方法，對(duì)疫情特點(diǎn)、發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行了分析。實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果顯示，|群血清4型腺病毒核酸陽(yáng)性。調(diào)查發(fā)現(xiàn)：發(fā)病的前一周，該地氣溫波動(dòng)劇烈，造成雞只應(yīng)激；雞場(chǎng)生物安全體系不健全，無(wú)針對(duì)車(chē)輛和人員的消毒措施。結(jié)合臨床癥狀、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，確診該雞場(chǎng)暴發(fā)了心包積水-肝炎綜合征，是由∣群血清4型腺病毒引起的。通過(guò)注射特異性卵黃抗體及對(duì)癥治療，對(duì)可能引起此次暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行控制，疫情得到了有效控制。

蛋雞；心包積水-肝炎綜合征；∣群血清4型腺病毒；暴發(fā)調(diào)查；風(fēng)險(xiǎn)因素

心包積水-肝炎綜合征（Hydropericardiumhepatitis syndrome，HHS）也叫安卡拉病，是由∣群血清4型腺病毒感染雞等家禽引起的一種疾病，其典型癥狀是感染雞突然死亡，并伴有心包積水和肝炎[1]。該病于1987年3月首先報(bào)道于巴基斯坦卡拉奇附近的安卡拉地區(qū)，安卡拉病因此而得名[2]。2013 年我國(guó)雞群陸續(xù)暴發(fā)以肝臟壞死為特征的雞包涵體肝炎，死亡率為10%～30%。2014年突然出現(xiàn)典型的，以心包中出現(xiàn)淡黃色液體或凝膠樣物為特征的心包積水綜合征。隨后，該病在我國(guó)雞群中大面積暴發(fā)，死亡率達(dá)30%～90%。本病主要發(fā)生于3～5周齡肉雞。產(chǎn)蛋雞特別是產(chǎn)蛋高峰期的雞也有發(fā)病，死亡率一般不超過(guò)10%，但可引起產(chǎn)蛋率下降10%～30%[3]。研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)目前的∣群腺病毒流行毒株以血清4型為主[4]。

2016年7月21日，本中心門(mén)診接收一起病例。經(jīng)詢(xún)問(wèn)，該場(chǎng)62日齡蛋雞于7月1日開(kāi)始零星發(fā)病。經(jīng)病理剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診該病為近年來(lái)給養(yǎng)禽業(yè)造成重大損失的心包積水-肝炎綜合征。為控制該病的流行，詳細(xì)了解雞場(chǎng)發(fā)病情況，分析導(dǎo)致疫病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素，以便及時(shí)提出行之有效的防控建議，開(kāi)展了緊急流行病學(xué)調(diào)查。

1 方法

1.1 病例定義

疑似病例：2016年7月1日至27日，該雞場(chǎng)內(nèi)出現(xiàn)精神沉郁、閉目嗜睡、羽毛蓬亂，排黃綠色稀糞，突然倒地，兩腿在空中劃動(dòng)等癥狀，并在短時(shí)間內(nèi)死亡的雞。

確診病例：符合疑似病例，且經(jīng)病原學(xué)檢測(cè)為∣群血清4型腺病毒陽(yáng)性的雞。

1.2 調(diào)查方法

1.2.1 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查。對(duì)該場(chǎng)的布局、周邊環(huán)境、飼養(yǎng)管理模式，以及蛋雞的發(fā)病情況、臨床癥狀等進(jìn)行調(diào)查。

1.2.2 座談。與雞場(chǎng)負(fù)責(zé)人、飼養(yǎng)員座談，詳細(xì)了解雞場(chǎng)發(fā)病前和發(fā)病過(guò)程中的有關(guān)情況，包括歷史發(fā)病情況、發(fā)病前的飼養(yǎng)管理行為、免疫情況、用藥情況等。

1.2.3 查閱資料。查閱該場(chǎng)生產(chǎn)記錄、免疫檔案以及飼料和獸藥使用記錄等。

1.3 實(shí)驗(yàn)室診斷

隨機(jī)剖檢5只病死雞。每只雞無(wú)菌采集肝臟、脾臟和肺臟，混樣進(jìn)行禽流感、新城疫和∣群腺病毒病的病原學(xué)檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。對(duì)禽流感和新城疫，采用商品化熒光RT-PCR試劑盒（凱杰生物工程（深圳）有限公司）進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)∣群腺病毒，按照參考文獻(xiàn)[5]采用 PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。將PCR 產(chǎn)物膠回收后連接pMD18-T 載體，然后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，37 ℃ 培養(yǎng)16 h ；挑取單菌落，經(jīng) PCR 鑒定，將陽(yáng)性菌送上海桑尼生物公司測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)分析整理

對(duì)收集的數(shù)據(jù)，利用 Excel 進(jìn)行整理，采用描述性流行病學(xué)方法進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查結(jié)果

2.1.1 基本情況。該雞場(chǎng)位于上海市崇明區(qū)某村，周邊3 km內(nèi)沒(méi)有其他養(yǎng)殖場(chǎng)，場(chǎng)內(nèi)沒(méi)有其他畜禽；場(chǎng)內(nèi)管理粗放、布局簡(jiǎn)單，不分生產(chǎn)區(qū)和生活區(qū)；雞場(chǎng)緊靠鄉(xiāng)村公路，旁邊有河流。雞場(chǎng)的地理位置和周邊環(huán)境及布局見(jiàn)圖1。全場(chǎng)共有4棟雞舍，每棟舍存欄約8 000羽；采用棚內(nèi)網(wǎng)上養(yǎng)殖，不分區(qū)；場(chǎng)內(nèi)設(shè)施簡(jiǎn)陋，衛(wèi)生條件差，無(wú)生物安全措施。飼養(yǎng)的蛋雞品種為新楊黑，2016年4月30日從上海市某家禽育種公司購(gòu)入。據(jù)了解，該場(chǎng)之前一直飼養(yǎng)從江蘇省引進(jìn)的肉用種雞，在經(jīng)3 d的空舍消毒后，又飼養(yǎng)了該批蛋雞。

圖1 雞場(chǎng)地理位置和周邊環(huán)境及布局

2.1.2 臨床表現(xiàn)。初期，長(zhǎng)勢(shì)良好的雞只先發(fā)病，無(wú)明顯先兆癥狀，突然發(fā)病。病雞呈卷曲姿勢(shì)，表現(xiàn)精神沉郁、閉目嗜睡、羽毛蓬亂，排黃色稀糞便，兩腿在空中劃動(dòng)，數(shù)分鐘內(nèi)倒地死亡。

2.1.3 剖檢變化。剖檢發(fā)現(xiàn)病雞有明顯的心包積液特征。心包內(nèi)有10～30 mL的淡黃色清亮水樣或膠凍樣液體（時(shí)間長(zhǎng)者呈膠凍樣），病死時(shí)間越長(zhǎng)心包積液越多；肝臟腫大，外觀呈紅黃條紋狀，邊緣區(qū)域有黃白色壞死灶；肺水腫、充血；腎臟蒼白、腫大、出血（圖2）。

圖2 病雞剖檢變化

2.1.4 時(shí)間分布。7月1日開(kāi)始，有2棟雞舍的雞出現(xiàn)零星死亡；7月18日開(kāi)始，病死數(shù)量急劇增加；7月21日、22日，達(dá)到病死高峰；7月23日，病死數(shù)量逐漸減少（圖3）。經(jīng)禽流感和新城疫二聯(lián)活疫苗免疫和多次用藥診治，無(wú)明顯效果。

2.2 座談情況

通過(guò)與雞場(chǎng)負(fù)責(zé)人和1名飼養(yǎng)員座談，了解到病死雞只僅在第2棟和第4棟雞舍出現(xiàn)，而其他2棟的雞只無(wú)任何異常，具體情況如下：

2.2.1 歷史發(fā)病情況。此前雞只沒(méi)有出現(xiàn)類(lèi)似病癥及死亡情況。本場(chǎng)所有蛋雞均購(gòu)自上海市某家禽育種公司，且該公司也無(wú)此病發(fā)生。

2.2.2 飼養(yǎng)管理情況。場(chǎng)內(nèi)飼料是由預(yù)混料混合玉米、麩皮等制成的，無(wú)霉變異常。場(chǎng)內(nèi)管理較混亂，具體表現(xiàn)為：飼養(yǎng)員定期離場(chǎng)回家；對(duì)進(jìn)場(chǎng)車(chē)輛和人員無(wú)消毒措施；將病死雞直接棄于垃圾桶，待收集滿后送無(wú)害化處理中心進(jìn)行無(wú)害化處理。

圖3 2棟雞舍病死雞數(shù)量變化趨勢(shì)

圖4 上海市崇明區(qū)2016年6月下旬至7月份氣溫走勢(shì)

2.2.3 免疫情況。雞只免疫由鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站防疫員完成。第2棟和第4棟雞只分別于2016年7月7日和8日免疫禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗。

2.2.4 用藥治療情況。發(fā)病后第3天，雞場(chǎng)用鹽酸多西環(huán)素可溶性粉進(jìn)行拌料；期間用過(guò)青霉素、阿莫西林等，但均沒(méi)有治療效果。用保肝、利尿藥治療，效果也一般。7月22日對(duì)每只雞注射2 mL腺病毒特異性卵黃抗體，3 d后效果明顯。

2.2.5 天氣情況。舍內(nèi)保溫效果差，受外界氣溫影響大。據(jù)了解，7月1日發(fā)病的前一周，該地多為陰雨天氣，且氣溫變化劇烈。2016年6月下旬至7月的氣溫走勢(shì)如圖4所示。

2.2.6 周邊情況。周?chē)? km 范圍內(nèi)沒(méi)有養(yǎng)禽場(chǎng)；3 km 范圍外的養(yǎng)殖場(chǎng)和3 km 范圍內(nèi)的農(nóng)戶散養(yǎng)禽均未出現(xiàn)類(lèi)似病癥。

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果

對(duì)采集的病料進(jìn)行禽流感病毒、新城疫病毒、∣群腺病毒檢測(cè)和細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果顯示：采集的5份病料中，禽流感病毒和新城疫病毒均為陰性；4份病料中，∣群腺病毒PCR電泳出現(xiàn) 1 319 bp 的目的片段，為陽(yáng)性（圖5）。5份病料中，均未分離培養(yǎng)出細(xì)菌。對(duì)其中的1份陽(yáng)性產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)hexon基因序列分析，結(jié)果顯示，該場(chǎng)的毒株與2015年我國(guó)分離的兩株毒株（KU587519.1、KX364099.1）親緣關(guān)系最近，同屬于∣群血清4型腺病毒（圖6），與∣群腺病毒其他11個(gè)血清型位于同一大分支，而與FAV-Ⅱ（AY849321.1、AF074946.1）和FAV-Ⅲ（Y09598.1）兩個(gè)分支親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

圖5 禽腺病毒電泳圖譜

圖6 FAV hexon基因核苷酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

2.4 干預(yù)治療實(shí)施效果

確診后，指導(dǎo)該雞場(chǎng)于7月22日對(duì)每只雞注射2 mL腺病毒特異性卵黃抗體，停止使用抗生素；使用葡萄糖、維生素C、活力健、龍膽瀉肝散等保肝通腎藥品。做好生物安全措施：加強(qiáng)對(duì)進(jìn)出車(chē)輛及人員的消毒，及時(shí)清除病死雞尸體、垃圾等；對(duì)雞舍內(nèi)外進(jìn)行消毒。采取措施3 d后，兩棟舍的雞群死亡數(shù)量顯著降低，至7月30日?qǐng)鰞?nèi)疫情得到有效控制。

3 討論

3.1 場(chǎng)址

此雞場(chǎng)緊靠鄉(xiāng)村道路和河道，管理水平較差，存在暴發(fā)各種傳染病的潛在威脅因素。

3.2 天氣

發(fā)病的前一周，該地一直是陰雨天氣，且溫度波動(dòng)劇烈。該天氣因素可能造成雞只應(yīng)激，導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降，雞只很容易感染發(fā)病。因而，天氣原因可能是造成本次疫病暴發(fā)的誘因。

3.3 生物安全體系

此雞場(chǎng)生物安全體系不健全，無(wú)消毒池，對(duì)進(jìn)出雞場(chǎng)的車(chē)輛和人員無(wú)消毒措施，且出現(xiàn)發(fā)病的第2棟和第4棟雞舍緊挨走廊，車(chē)輛和人員進(jìn)出頻繁，增加了疫病傳入的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，2014—2015年江蘇、河南、山東、安徽等地暴發(fā)了高死亡率的心包積水-肝炎綜合征，并蔓延至全國(guó)大部分雞場(chǎng)[4，6]，因此推測(cè)造成本次疫情暴發(fā)的主要原因可能是未執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施。

4 結(jié)論及建議

通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理剖檢及PCR檢測(cè)，確診此次雞場(chǎng)發(fā)生的疫情是由Ⅰ群血清4型腺病毒引起的心包積水-肝炎綜合征。

建議健全生物安全體系，提高場(chǎng)區(qū)內(nèi)的飼養(yǎng)管理水平，改善舍內(nèi)外的衛(wèi)生狀況，及時(shí)清理垃圾、病死雞等，做好帶雞噴霧消毒和空舍徹底消毒；在氣溫波動(dòng)劇烈時(shí)，提高風(fēng)險(xiǎn)管理意識(shí)，提前采取保護(hù)措施，以減少對(duì)雞群造成的應(yīng)激傷害；有針對(duì)性地合理用藥，不盲目濫用藥物治療，避免病情拖延；發(fā)病時(shí)及時(shí)對(duì)雞群進(jìn)行腺病毒特異性卵黃抗體治療，5 d 后接種腺病毒疫苗，防止疫情復(fù)發(fā)。

[1] SAIF Y M. 禽病學(xué)[M]. 12 版. 蘇敬良，高福，索勛，主譯. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2012：289-300.

[2] JAFFERY M S. A treatise on Angara disease（hydropericardium pulmonary oedema-hepa tonephritis syndrome）[J]. J Pakistan Vet Med Asso，1988，34：1-33.

[3] 王慧，程小果，郭建友，等. 近期雞群I群禽腺病毒的流行與防治[J]. 上海畜牧獸醫(yī)通訊，2016（2）：62-63.

[4] LI H X，WANG J，QIU L Y，et a1. Fowl adenovirus species C serotype 4 is attributed to the emergence of hepatitishydropericardium syndrome in chickens in China[J]. Infect Genet Evol，2016，45：230-241.

[5] RAUE R，HESS M. Hexon based PCRs combined with restriction enzyme analysis for rapid detection and differentitation of fowl adenoviruses and egg drop syndrome virus [J]. Journal of virological methods，1998，73（2）：211-217.

[6] 史玉穎，劉玉山，于可響. 解析當(dāng)前流行的安卡拉病[J].家禽科學(xué)，2016（11）：33-35.

（責(zé)任編輯：朱迪國(guó)）

An Emergency Epidemiological Investigation of Hydropericardium-hepatitis Syndrome in a Chicken Layer Farm of Shanghai City

Yang Dequan1，Zhu Jiuchao1，Qi Xinyong1，Ju Houbin1，Zhou Jinping1，Liu Chunguo2，Wang Jingfei2
（1. Shanghai Animal Disease Control Center，Shanghai 201103；2. State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology，Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Harbin，Heilongjiang 150001）

The morbidity and mortality of 62-day-old laying hens in a certain layer farm occurred on July 1st，2016，in Shanghai City. No obvious effect was obtained by repeatedly antibiotic treatment. In order to know the morbidity in detail，to analyze the possible risk factors of the disease，and to put forward prevention and control measures timely，an emergency epidemiological investigation on this outbreak was carried out by field investigation in combination with laboratory diagnosis. Results showed that group serotype 4 nucleic acid was positive. It was found that the temperature fluctuated sharply a week before the onset of the disease，which caused the chicken to be stressed. In addition，the biosafety system in this poultry farm was not perfect，and there was no vehicle and personnel disinfection measures，which increased the risk of adenovirus infection. According to the clinical symptoms，pathological examination and laboratory diagnosis，diagnosis of the chicken farm in the hydropericardium hepatitis syndrome was caused by group serum adenovirus type 4. By injecting specific yolk antibody and symptomatic treatment，the risk factors that might cause the outbreak were controlled，and the epidemic situation was effectively controlled.

laying hen；Hydropericardium-hepatitis syndrome；Fowl adenovirus group ∣ serotype 4；outbreak investigation；risk factors

S852.65

A

1005-944X（2017）09-0007-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.09.003

上海市農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)性項(xiàng)目（滬農(nóng)科攻字〔2014〕第7-3-3號(hào)）

周錦萍、劉春國(guó)、王靖飛