蜂膠對宮頸癌Hela細(xì)胞作用的探索

李少叢 周杰 王玉桂 焦盈盈

·實(shí)驗(yàn)研究·

蜂膠對宮頸癌Hela細(xì)胞作用的探索

李少叢 周杰 王玉桂 焦盈盈

目的 探討蜂膠成分咖啡酸苯乙酯(CAPE)對宮頸癌Hela細(xì)胞的作用。方法 選取對數(shù)生長期的Hela細(xì)胞, ①經(jīng)0、6、10、20、30、40 μl/ml(0 μl/ml組、6 μl/ml組、10 μl/ml組、20 μl/ml組、30 μl/ml組、40 μl/ml組)的CAPE培養(yǎng)液作用24 h, 其中0 μl/ml組為參照對象；②細(xì)胞培養(yǎng)24 h后, 加入20 μl/ml的CAPE培養(yǎng)液。培養(yǎng)液與Hela細(xì)胞作用時(shí)間分別為0、12、24、48、72 h(0 h組、12 h組、24 h組、48 h組、72 h組), 其中0 h組為參照對象。采用唑鹽比色法(MTT法)檢測不同濃度和作用時(shí)間的CAPE對Hela細(xì)胞的抑制率。結(jié)果 經(jīng)各濃度的CAPE培養(yǎng)液作用24 h, 不同CAPE濃度下Hela細(xì)胞的抑制率分別為0、1.05%、5.99%、18.92%、40.30%、47.05%, Hela細(xì)胞的抑制率隨CAPE培養(yǎng)液濃度的增大而增大, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。經(jīng)20 μl/ml 的CAPE作用0、12、24、48、72 h, Hela細(xì)胞抑制率分別為0、3.76%、19.78%、22.23%、37.53%, Hela細(xì)胞抑制率隨CAPE培養(yǎng)液作用時(shí)間的延長而增大, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 CAPE對宮頸癌Hela細(xì)胞具有抑制作用, 值得進(jìn)一步研究。

蜂膠；咖啡酸苯乙酯；宮頸癌；Hela細(xì)胞

宮頸癌是一種嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤, 為女性第二大致死癌癥［1］, 其中發(fā)展中國家約占80%［2］。近年來, 我國宮頸癌的發(fā)病率明顯增高, 且發(fā)病年齡有減小趨勢［3,4］。蜂膠在我國是傳統(tǒng)的藥品和保健品。目前, 蜂膠中已分離出多種有效化學(xué)成分［5］, 其中, CAPE為蜂膠的主要有效成分,已被證明具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)以及抗腫瘤等功能［6,7］。CAPE對多種腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的誘導(dǎo)凋亡作用, 如胰腺癌、肝癌、膽管癌等［7,8］, 同時(shí)值得關(guān)注的是, 其對正常細(xì)胞幾乎沒有抑制作用。目前, 關(guān)于蜂膠對宮頸癌作用的報(bào)道較少見, 因此, 本文擬探討不同濃度和作用時(shí)間的蜂膠對宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞培養(yǎng) 將宮頸癌Hela細(xì)胞置于37℃, 5 % CO2孵箱內(nèi), 使用含10% 胎牛血清的的DMEM培養(yǎng)基(內(nèi)含100 U/ml青霉素和鏈霉素)培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長情況, 每1～2天換液。于細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期時(shí), 進(jìn)行傳代, 傳代數(shù)<20。

1.2MTT法細(xì)胞檢測

1.2.1CAPE濃度對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng) 將對數(shù)生長期的Hela細(xì)胞消化, 取200 μl濃度為3×104/ml Hela細(xì)胞接種于96孔板, 培養(yǎng)24 h后, 分別加入0、6、10、20、30、40 μl/ml的CAPE(sigma公司, 美國)培養(yǎng)液, 作為0 μl/ml組、6 μl/ml組、10 μl/ml組、20 μl/ml組、30 μl/ml組、40 μl/ml組,其中0 μl/ml組為參照對象, 各組設(shè)4個(gè)平行樣。20 h后每孔加入20 μl濃度為5 mg/ml 的MTT, 再孵育4 h后, 棄去上清液,每孔加入150 μl 二甲基亞砜(DMSO), 振蕩5 min后, 使用酶標(biāo)儀(參考波長630 nm、背景波長570 nm)測量各組吸光度(A)值。按以下公式計(jì)算細(xì)胞抑制率：抑制率(%)=(1-各組平均吸光度值/0 μl/ml組平均吸光度值)×100%。

1.2.2CAPE作用時(shí)間對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng) 方法同上,細(xì)胞培養(yǎng)24 h后, 加入20 μl/ml的CAPE培養(yǎng)液。培養(yǎng)液與Hela細(xì)胞作用時(shí)間分別為0、12、24、48、72 h, 作為0 h組、12 h組、24 h組、48 h組、72 h組, 其中0 h組為參照對象,各組設(shè)4個(gè)平行樣, 檢測吸光度(A)值和細(xì)胞抑制率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1CAPE濃度對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng) 經(jīng)各濃度的CAPE培養(yǎng)液作用24 h, 不同CAPE濃度下Hela細(xì)胞的抑制率分別為0、1.05%、5.99%、18.92%、40.30%、47.05%, Hela細(xì)胞的抑制率隨CAPE培養(yǎng)液濃度的增大而增大, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。見表1。

表1 MTT法檢測CAPE濃度對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng)

表1 MTT法檢測CAPE濃度對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng)

注：與0 μl/ml組比較,aP＜0.05

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2.2CAPE作用時(shí)間對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng) 經(jīng)20 μl/ml的CAPE作用0、12、24、48、72 h, Hela細(xì)胞抑制率分別為0、3.76%、19.78%、22.23%、37.53%, Hela細(xì)胞抑制率隨CAPE培養(yǎng)液作用時(shí)間的延長而增大, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 MTT法檢測CAPE作用時(shí)間對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng)

表2 MTT法檢測CAPE作用時(shí)間對Hela細(xì)胞的抑制效應(yīng)

注：與0 h組比較,aP＜0.05

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3 討論

宮頸癌是女性僅次于乳腺癌的惡性腫瘤, 為女性第二大致死癌癥［1］, 發(fā)病率和死亡率都較高。早期宮頸癌患者無特異性癥狀和體征, 大部分患者確診時(shí)已為中晚期, 錯(cuò)失了手術(shù)時(shí)機(jī), 多以放、化療延緩病情進(jìn)展。但放、化療均存在副作用, 在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)可能對正常細(xì)胞產(chǎn)生損害。因此探求無毒副作用治療宮頸癌的藥物, 是影響婦女健康和生活質(zhì)量的重大課題。

本研究表明, 在研究所處的范圍內(nèi), Hela細(xì)胞的抑制率隨CAPE培養(yǎng)液濃度的增大而增大, Hela細(xì)胞抑制率隨CAPE培養(yǎng)液作用時(shí)間的延長而增大, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 可見CAPE對宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。

綜上所述, 蜂膠對宮頸癌具有潛在治療功能, 值得進(jìn)一步研究。

［1］ 馬亞琪, 劉愛軍.宮頸癌及癌前病變病理診斷及研究進(jìn)展.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志, 2015, 31(11):803-805.

［2］ 叢曉鳳, 楊雷, 劉子玲.宮頸癌的三級預(yù)防策略.中國婦幼保健, 2014, 29(15):2462-2464.

［3］ 王愛麗.扶正固本湯聯(lián)合化療用于宮頸癌患者臨床療效及安全性分析.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 24(22):51-53.

［4］ Zhao YB, Wang JH, Chen XX, et al.Values of three different preoperative regimens in comprehensive treatment for young patients with stage Ib2 cervical cancer.Asian Pac J Cancer Prev, 2012, 13(4):1487-1489.

［5］ Zhang JL, Wang K, Hu FL.Advance in studies on antioxidant activity of propolis and its molecular mechanism.China Journal of Chinese Materia Medica, 2013, 38(16):2645-2652.

［6］ 玄紅專, 李振, 付崇羅, 等.咖啡酸苯乙酯抗腫瘤活性的分子機(jī)制研究進(jìn)展.食品研究與開發(fā), 2013(11):97-100.

［7］ 王秀芳, 翟嵩, 黨雙鎖.咖啡酸苯乙酯的藥理作用及機(jī)制研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)地理分冊, 2010, 31(3):187-190.

［8］ 王紫燕, 王瑩瑩, 曾曉雄, 等.蜂膠中CAPE對HGF誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞侵襲和遷移能力的抑制作用.食品科學(xué), 2017, 38(1):203-209.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.17.114

2017-07-05］

252000 山東省聊城市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科(李少叢王玉桂 焦盈盈)；聊城職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理學(xué)院(周杰)