環(huán)氧合酶-2在口腔頜面鱗狀細(xì)胞癌中的表達及其對患者預(yù)后的影響研究

吳 訓(xùn)，于大海，蒙 寧，蘇紀(jì)平

·論著·

環(huán)氧合酶-2在口腔頜面鱗狀細(xì)胞癌中的表達及其對患者預(yù)后的影響研究

吳 訓(xùn)1，于大海2，蒙 寧1，蘇紀(jì)平3*

目的分析環(huán)氧合酶-2(COX-2)在口腔頜面鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)患者中的表達情況及其對患者預(yù)后的影響，以期為OSCC的診斷和治療提供有參考價值的分子生物學(xué)標(biāo)志物。方法選取2013年9月—2015年12月廣西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科符合納入標(biāo)準(zhǔn)的OSCC手術(shù)患者238例。收集患者一般資料。從2013年10月開始隨訪，隨訪截止日期2016年9月，記錄患者總體生存時間和無病生存時間。選取患者腫瘤實體組織、腫瘤邊界外1 cm癌旁組織、腫瘤邊界外2 cm以上正常組織以及頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)后Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織進行組織切片，采用免疫組化法檢測各組織中COX-2表達情況，實時熒光定量PCR法檢測COX-2 mRNA表達水平，Western blotting法檢測各組織中COX-2表達水平。結(jié)果癌組織，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織可見陽性顆粒分布且染色逐漸減弱，正常組織幾乎無著色。癌組織，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平高于正常組織(P<0.05)；癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平低于癌組織(P<0.05)；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平高于癌旁組織(P<0.05)；Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平高于Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平低于Ⅰ、Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織(P<0.05)；Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平低于Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平依次降低(P<0.05)。病理分級3級患者COX-2表達陽性率低于病理分級1、2級患者(P<0.05)；T3～4期患者COX-2表達陽性率高于T1～2期(P<0.05)；N1、N2期患者COX-2表達陽性率高于N0期患者，N2期患者COX-2表達陽性率低于N1期患者(P<0.05)。COX-2表達陽性患者總體生存時間和無病生存時間均短于COX-2表達陰性患者(P<0.05)。單因素、多因素Cox回歸分析結(jié)果均顯示，COX-2表達情況、病理分級、T分期、N分期是OSCC患者總體生存時間、無病生存時間的影響因素(P<0.05)。結(jié)論COX-2在OSCC中高表達，其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存時間關(guān)系密切，是OSCC患者預(yù)后不良的生物學(xué)標(biāo)志物。

口腔腫瘤；腫瘤,鱗狀細(xì)胞；環(huán)氧化酶2；預(yù)后

吳訓(xùn)，于大海，蒙寧，等.環(huán)氧合酶-2在口腔頜面鱗狀細(xì)胞癌中的表達及其對患者預(yù)后的影響研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2017，20(27)：3382-3390.[www.chinagp.net]

WU X,YU D H,MENG N,et al.Expression of cyclooxygenase-2 in oral squamous cell carcinoma and its influence on the prognosis[J].Chinese General Practice，2017，20(27)：3382-3390.

口腔頜面鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)在口腔惡性腫瘤中約占90%[1-9]，具有高復(fù)發(fā)率和低生存率等特點[10]。多種證據(jù)均提示，環(huán)氧合酶-2(COX-2)在OSCC的侵襲和轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮了重要作用[11-14]。因此，本研究分析了COX-2在OSCC患者中的表達情況及其對患者預(yù)后的影響，以期為臨床治療提供依據(jù)，為下一步的實驗提供堅實的基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 資料來源

1.1.1 組織樣本來源 選取2013年9月—2015年12月廣西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科符合納入標(biāo)準(zhǔn)的OSCC手術(shù)患者238例，其中男131例，女107例；年齡23～88歲，平均年齡(56.0±5.4)歲；OSCC分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期92例，Ⅲ期87例，Ⅳ期24例。納入標(biāo)準(zhǔn)：首診患者經(jīng)病理診斷為OSCC。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前有放化療史。本研究患者均知情同意，本研究獲得本院倫理委員會同意。

1.1.2 取材方法 組織樣本取材部位為腫瘤實體組織、腫瘤邊界外1 cm癌旁組織、腫瘤邊界外2 cm以上正常組織以及頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)后Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織。選取新鮮離體30 min內(nèi)的組織塊0.5～1.0 cm，放入液氮，置于-80 ℃冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 患者一般資料收集 包括性別、年齡、病理分級、病變部位、OSCC分期、TNM分期等。

1.2.2 隨訪 從2013年10月開始門診、信件和電話隨訪，術(shù)后前2年每1～3個月隨訪1次，之后每6個月隨訪1次，隨訪截止日期2016年9月，共隨訪9～36個月，平均隨訪(22.3±6.7)個月。記錄患者總體生存時間和無病生存時間。其中從患者開始手術(shù)到其死亡或隨訪截止日期為總體生存時間；從患者開始手術(shù)到患者復(fù)發(fā)或發(fā)生轉(zhuǎn)移為無病生存時間。

1.2.3 組織切片 全部組織樣本按照標(biāo)準(zhǔn)流程經(jīng)固定、脫水，石蠟包埋，普通切片機連續(xù)切片(4 μm)。

1.2.4 免疫組化法檢測各組織中COX-2表達情況 免疫組化SP法染色，二甲苯脫蠟，純乙醇脫苯，水化，入水，沖洗，以多克隆兔抗人用COX-2(Novus Biologicals，USA)作為一抗，孵育，滴加多酚氧化酶抗兔/山羊二抗IgG，孵育，DAB溶液顯色，棕色為COX-2表達陽性。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照。

1.2.5 實時熒光定量PCR法檢測COX-2 mRNA表達水平 分別取適量各組織標(biāo)本，加入Trizol試劑(50 mg/ml)，高速勻漿5 min；4 ℃ 12 000 r/min離心15 min(離心半徑8 cm)，小心吸取上清液550 ml，置于另一新的1.5 ml的EP管中，加入等體積的異丙醇，充分混勻后室溫靜置10 min；取5×g DNA Eraser Buffer(2 μl)、gDNA Eraser(1 μl)、總RNA(1 μg)依次加入0.6 ml EP管中，加入去離子水至10 μl，12 000 r/min離心2 min(離心半徑8 cm)，置于42 ℃恒溫水浴箱中2 min，取出置于冰上；在另一新EP管按反應(yīng)數(shù)+1的量配置Mix，混勻后12 000 r/min離心2 min(離心半徑8 cm)，然后每個EP管分裝10 μl，37 ℃恒溫水浴箱孵育15 min；85 ℃水浴5 s終止反應(yīng)，-20 ℃保存?zhèn)溆谩２捎肧YBR Green I嵌合熒光法，擴增內(nèi)參基因和目的基因，以GAPDH作為內(nèi)參。總反應(yīng)體系為20 μl，引物由Invitrogen公司合成，COX-2上游引物：5′-AAACTGTGGCAGAGGTGGAAAG-3′，下游引物：5′-GCGAAGATCCATGAGAATGAGAAG3′，產(chǎn)物長度102 bp；GAPDH上游引物：5′-GACAACTTTGGCATCGTGGA-3′，下游引物：ATGCAGGGATGATGTTCTGG′，產(chǎn)物長度133 bp。以正常組織為對照，采用2-ΔΔCt法計算各組織中COX-2 mRNA表達水平。

1.2.6 Western blotting法檢測各組織中COX-2表達水平 分別取適量各組織標(biāo)本，加入含有6 μl PSMF的RIPA緩沖液600 μl，冰上裂解細(xì)胞30 min；4 ℃ 12 000 r/min離心15 min(離心半徑8 cm)，收集上清液，獲得總蛋白；電泳，轉(zhuǎn)印至聚偏氟乙烯(PVDF)膜；加入抗COX-2(1∶500)及HRP標(biāo)記的GAPDH(1∶10 000)，4 ℃孵育過夜；TBST洗滌PVDF膜5 min×4次；暗室用ECL顯影，壓片；將底片利用掃描儀經(jīng)電腦轉(zhuǎn)化為JPG或BMP格式電子圖片存檔，應(yīng)用Image J軟件按照操作步驟對Western blotting底片各泳道和條帶進行判別，讀取出圖片中各蛋白條帶的積分光密度(IOD)值。采用目的蛋白條帶IOD值與內(nèi)參GAPDH條帶IOD值的比值作為目的蛋白表達水平。

2 結(jié)果

2.1COX-2表達情況COX-2主要分布于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色顆粒狀，彌漫性分布。癌組織，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織可見陽性顆粒分布且染色逐漸減弱，正常組織幾乎無著色(見圖1，本文圖1彩圖見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應(yīng)文章)。

注：A為正常組織，B為癌組織，C為癌旁組織，D為Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織，E為Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織，F(xiàn)為Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織，G為Ⅳ區(qū)淋巴結(jié)組織，H為Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織

圖1 免疫組化法檢測各組織中COX-2表達情況(免疫組化染色，×200)

Figure1 Expression of COX-2 in different tissue specimens taken from OSCC patients detected by immunohistochemical staining

2.2 COX-2 mRNA表達水平 各組織中COX-2 mRNA表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中癌組織，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平高于正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平低于癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平高于Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平低于Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平低于Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平低于Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

Table1ComparisonofCOX-2mRNAexpressionindifferenttissuespecimenstakenfromOSCCpatients

組織標(biāo)本數(shù)COX-2mRNA正常組織2381.0±0.0癌組織23860.2±26.4a癌旁組織2382.4±1.6abⅠ區(qū)淋巴結(jié)組織30128.2±17.9abcⅡ區(qū)淋巴結(jié)組織29037.2±20.7abcdⅢ區(qū)淋巴結(jié)組織28826.6±16.4abcdeⅣ區(qū)淋巴結(jié)組織27620.2±21.2abcdefⅤ區(qū)淋巴結(jié)組織1819.9±6.5abcdefF值25.231P值<0.001

注：COX-2=環(huán)氧合酶-2；與正常組織比較，aP<0.05；與癌組織比較，bP<0.05；與癌旁組織比較，cP<0.05；與Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，dP<0.05；與Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，eP<0.05；與Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，fP<0.05

2.3 COX-2表達水平 各組織中COX-2表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。其中癌組織，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平高于正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平低于癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平低于Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平低于Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平低于Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平低于Ⅳ區(qū)淋巴結(jié)組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2、圖2)。

Table2ComparisonofCOX-2expressionindifferenttissuespecimenstakenfromOSCCpatients

組織標(biāo)本數(shù)COX-2正常組織2380.9±0.4癌組織23810.3±1.8a癌旁組織2382.2±0.6abⅠ區(qū)淋巴結(jié)組織3018.7±1.0abcⅡ區(qū)淋巴結(jié)組織2907.8±0.7abcdⅢ區(qū)淋巴結(jié)組織2886.8±0.8abcdeⅣ區(qū)淋巴結(jié)組織2765.2±0.8abcdefⅤ區(qū)淋巴結(jié)組織1813.6±0.9abcdefgF值333.258P值<0.001

注：與正常組織比較，aP<0.05；與癌組織比較，bP<0.05；與癌旁組織比較，cP<0.05；與Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，dP<0.05；與Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，eP<0.05；與Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，fP<0.05；與Ⅳ區(qū)淋巴結(jié)組織比較，gP<0.05

注：COX-2=環(huán)氧合酶-2，1～8分別為正常組織、癌組織、癌旁組織、Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織、Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織、Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織、Ⅳ區(qū)淋巴結(jié)組織、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織

圖2 Western blotting法檢測各組織中COX-2表達水平的聚丙烯酰胺凝膠電泳圖

Figure2 Polyacrylamide gel electrophoresis of COX-2 expression level in different tissue specimens taken from OSCC patients detected by Western blotting

2.4 不同特征患者COX-2表達陽性率比較 不同性別、年齡、病變部位患者COX-2表達陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同病理分級、T分期、N分期患者COX-2表達陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中病理分級3級患者COX-2表達陽性率低于病理分級1、2級患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；N1、N2期患者COX-2表達陽性率高于N0期患者，N2期患者COX-2表達陽性率低于N1期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表3)。

2.5 不同COX-2表達情況患者生存時間比較 238例患者的總體生存時間為(37.9±0.6)個月，無病生存時間為(23.0±10.4)個月。COX-2表達陽性患者總體生存時間和無病生存時間均短于COX-2表達陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.209、15.843，P值均<0.001，見圖3、4)。

2.6 生存時間的影響因素分析

2.6.1 單因素Cox回歸分析 分別以總體生存時間、無病生存時間(連續(xù)性變量)為因變量，COX-2表達情況(賦值：陰性=0，陽性=1)、性別(賦值：男=0，女=1)、年齡(賦值：<60歲=0，≥60歲=1)、病理分級(賦值：1級=1，2級=2，3級=3)、病變部位(賦值：舌部=0，牙齦或口底=1，其他=2)、T分期(賦值：T1～2期=0，T3～4期=1)、N分期(賦值：N0期=0，N1期=1，N2期=2)為自變量，進行單因素Cox回歸分析，結(jié)果顯示，COX-2表達情況、病理分級、T分期、N分期是OSCC患者總體生存時間、無病生存時間的影響因素(P<0.05，見表4、5)。

表3 不同特征患者COX-2表達陽性率比較〔n(%)〕

Table3 Comparison of positive rate of COX-2 expression in OSCC patients with different characteristics

特征例數(shù)COX-2表達陽性χ2值P值性別0.1470.842 男131116(88.5) 女10793(86.9)年齡(歲)3.4280.071 <609588(92.6) ≥60143121(84.6)病理分級(級)10.7260.005 111099(90.0) 28883(94.3) 34030(75.0)bc病變部位0.7750.679 舌部133119(89.5) 牙齦或口底7766(85.7) 其他2824(85.7)T分期(期)5.0900.026 T1～2143120(83.9) T3～49589(93.7)N分期(期)a31.511<0.001 N0416323(77.6) N1413378(91.5)d N2507434(85.6)de

注：a為按照淋巴結(jié)清掃數(shù)目計算；與病理分級1級比較，bP<0.05；與病理分級2級比較，cP<0.05；與N0期比較，dP<0.05；與N1期比較，eP<0.05

圖3 不同COX-2表達情況患者總體生存時間

圖4 不同COX-2表達情況患者無病生存時間

Table4 Univariate Cox regression analysis of influencing factors for OS in OSCC patients

變量回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤Waldχ2值P值HR值95%CICOX-2表達情況-1.9200.9114.4440.0350.147(0.025,0.874)性別0.3680.8340.1950.6591.445(0.282,7.406)年齡-0.2600.5530.2210.6380.771(0.261,2.278)病理分級-1.5220.5856.7760.0090.218(0.069,0.687)病變部位1.4610.9872.1930.1394.311(0.623,29.817)T分期-2.9060.82212.513<0.0010.055(0.011,0.274)N分期-3.3881.0919.6450.0020.034(0.004,0.287)

2.6.2 多因素Cox回歸分析 分別以總體生存時間、無病生存時間(連續(xù)性變量)為因變量，COX-2表達情況(賦值：陰性=0，陽性=1)、性別(賦值：男=0，女=1)、年齡(賦值：<60歲=0，≥60歲=1)、病理分級(賦值：1級=0，2級=1，3級=2)、病變部位(賦值：舌部=0，牙齦或口底=1，其他=2)、T分期(賦值：T1～2期=0，T3～4期=1)、N分期(賦值：N0期=0，N1期=1，N2期=2)為自變量，進行多因素Cox回歸分析，結(jié)果顯示，COX-2表達情況、病理分級、T分期、N分期是OSCC患者總體生存時間、無病生存時間的影響因素(P<0.05，見表6、7)。

表5 OSCC患者無病生存時間影響因素的單因素Cox回歸分析

Table5 Univariate Cox regression analysis of influencing factors for DFS in OSCC patients

變量回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤Waldχ2值P值HR值95%CICOX-2表達情況-1.5660.29528.090<0.0010.209(0.117,0.373)性別0.3550.3720.9120.3401.426(0.688,2.426)年齡-0.4720.2752.9550.0860.624(0.364,1.068)病理分級-0.7190.3085.4430.0200.487(0.267,0.891)病變部位0.4741.0860.1900.6631.606(0.191,13.487)T分期-0.6180.2844.7190.0300.539(0.309,0.941)N分期-0.5190.3062.8770.0490.595(0.326,1.084)

表6 OSCC患者總體生存時間影響因素的多因素Cox回歸分析

Table6 Multivariate Cox regression analysis of influencing factors for OS in OSCC patients

變量回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤Waldχ2值P值HR值95%CICOX-2表達情況-1.1310.5474.2780.0390.323(0.110,0.943)病理分級-2.0160.7696.8760.0090.133(0.030,0.601)T分期-1.2520.5565.0630.0240.286(0.096,0.851)N分期-3.0810.85213.081<0.0010.046(0.009,0.244)

表7 OSCC患者無病生存時間影響因素的多因素Cox回歸分析

Table7 Multivariate Cox regression analysis of influencing factors for DFS in OSCC patients

變量回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤Waldχ2值P值HR值95%CICOX-2表達情況-1.5000.29425.972<0.0010.223(0.125,0.397)病理分級-0.8300.3156.9590.0080.436(0.235,0.808)T分期-0.6210.2745.1270.0240.537(0.314,0.920)N分期-0.4580.2902.5020.0460.663(0.359,1.116)

3 討論

COX-2基因定位于染色體1q25.2-q25.3，全長約8.3 kb[15-17]，是一種由催化致炎物質(zhì)地諾前列酮合成的重要限速酶，在體內(nèi)呈誘導(dǎo)性表達，僅在細(xì)胞受到刺激時迅速合成，參與各種病理生理過程，包括炎癥、發(fā)熱、疼痛等[18-19]。多種人類惡性癌組織中均可發(fā)現(xiàn)COX-2高表達[20-26]。目前，有關(guān)COX-2在消化道腫瘤中的研究比較多[1-9]，而口腔作為消化道的起始端，有關(guān)COX-2在OSCC中的研究卻相對較少。本研究組通過前期研究和查閱大量國內(nèi)外文獻的數(shù)據(jù)也發(fā)現(xiàn)，COX-2表達水平在OSCC中明顯上升，提示其可能在OSCC的發(fā)生發(fā)展中起到了關(guān)鍵的作用[27-29]。

本研究結(jié)果顯示，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織可見陽性顆粒分布且染色逐漸減弱，正常組織幾乎無著色；癌組織，癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平高于正常組織；癌旁組織，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平低于癌組織；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平高于癌旁組織；提示COX-2與細(xì)胞的增殖、分化密切相關(guān)，在OSCC惡變的早期階段即有COX-2的參與，臨床表現(xiàn)為紅腫熱痛的炎癥狀態(tài)，說明COX-2表達水平增高是癌癥發(fā)生的早期事件[30]。AKITA等[31]報道，在口腔黏膜病變中，從過度增生、輕度異常增生、中度異常增生到重度異常增生OSCC中COX-2表達水平依次升高。Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2 mRNA表達水平高于Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織，COX-2表達水平低于Ⅰ區(qū)淋巴結(jié)組織；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平低于Ⅰ、Ⅱ區(qū)淋巴結(jié)組織；Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2及其mRNA表達水平低于Ⅲ區(qū)淋巴結(jié)組織；Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2表達水平低于Ⅳ區(qū)淋巴結(jié)組織；表明OSCC頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移常見于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ區(qū)，在選擇頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)范圍時應(yīng)當(dāng)包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ區(qū)，以減少轉(zhuǎn)移、降低復(fù)發(fā)率，這與OSCC轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)多位于Ⅱ、Ⅲ平面的報道一致[32]。

本研究結(jié)果顯示，病理分級3級患者COX-2表達陽性率低于病理分級1、2級患者，這也與文獻報道一致[28]，表明COX-2在OSCC組織中的過度表達與OSCC的發(fā)生發(fā)展存在著一定的聯(lián)系。國內(nèi)學(xué)者錢永等[11]發(fā)現(xiàn)，在舌鱗癌細(xì)胞中COX-2高表達，認(rèn)為COX-2對舌鱗癌細(xì)胞的增殖可能起重要作用。CHEN等[33]研究顯示，17例有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者肝轉(zhuǎn)移灶COX-2表達水平高于原發(fā)灶、正常腸黏膜組織。本研究結(jié)果顯示，不同病理分級、T分期、N分期患者之間的COX-2表達陽性率有差異，與多數(shù)研究結(jié)果一致[19,29,34-36]。而BAYAZIT等[37]認(rèn)為，COX-2表達陽性與腫瘤的原發(fā)位置、T分期、N分期、生存率、復(fù)發(fā)或肺轉(zhuǎn)移沒有關(guān)系。本研究組推測這可能與腫瘤不同組織來源所誘發(fā)的生物學(xué)行為不同有關(guān)，又或者是因為喉癌所引起的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相對于舌癌要少，這需要更多的研究證實。N1、N2期患者COX-2表達陽性率高于N0期患者，提示其與OSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，本研究組推測這可能跟舌部及口底區(qū)域血運豐富有關(guān)，也跟COX-2催化花生四烯酸生成的前列腺素2(PGE2)誘導(dǎo)組織生成血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)有關(guān)，后者作用于內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體，促進血管生成[38-39]。也有學(xué)者觀察到，隨著腫瘤分級、分期的增高，血管生成增多，COX-2表達水平也增高，VEGF表達也明顯增強，表明COX-2表達與VEGF及新生血管部位有相關(guān)性[40]。

本研究結(jié)果顯示，COX-2表達陽性患者總體生存時間和無病生存時間均短于COX-2表達陰性患者；單因素Cox回歸分析與多因素Cox回歸分析結(jié)果均顯示，COX-2表達情況、病理分級、T分期、N分期是OSCC患者總體生存時間、無病生存時間的影響因素；這與其他學(xué)者的觀察結(jié)果一致[41-42]。KHURI等[43]用原位雜交法檢測160例Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌組織中COX-2的表達水平，發(fā)現(xiàn)COX-2表達水平愈高的患者，預(yù)后愈差。未來本課題組將繼續(xù)隨訪跟蹤研究對象，完善病例資料，通過后續(xù)實驗進一步驗證前期研究結(jié)果。

囿于實驗進度，未能建立針對COX-2靶向治療OSCC的動物模型和體外細(xì)胞模型以進一步探討其機制，這是本研究的不足之處。

綜上所述，COX-2在OSCC中高表達，其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存時間關(guān)系密切，是OSCC患者預(yù)后不良的生物學(xué)標(biāo)志物。

志謝：感謝廣西醫(yī)科大學(xué)實驗中心耳鼻咽喉實驗研究室提供實驗場所和實驗器材，廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院提供研究對象。

作者貢獻：吳訓(xùn)、蘇紀(jì)平進行文章的構(gòu)思與設(shè)計，數(shù)據(jù)整理，英文的修訂；吳訓(xùn)、于大海、蘇紀(jì)平進行研究的實施與可行性分析；吳訓(xùn)、蒙寧進行數(shù)據(jù)收集；吳訓(xùn)進行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果的分析與解釋，撰寫論文，對文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理；于大海、蘇紀(jì)平進行論文的修訂；吳訓(xùn)、蒙寧、蘇紀(jì)平負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：崔麗紅)

ExpressionofCyclooxygenase-2inOralSquamousCellCarcinomaandItsInfluenceonthePrognosis

WUXun1,YUDa-hai2,MENGNing1,SUJi-ping3*

1.DepartmentofOral&MaxillofacialSurgery,CollegeofStomatologyGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China2.DepartmentofStomatology,theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China3.DepartmentofOtolaryngologyHeadandNeckSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China

*Correspondingauthor:SUJi-ping,Professor,Chiefphysician,Doctoralsupervisor;E-mail:ymsu2@163.com

ObjectiveTo investigate the expression of cyclooxygenase-2(COX-2) in patients with oral and maxillofacial squamous cell carcinoma(OSCC) and its influence on prognosis,in order to provide a valuable molecular biological marker for the diagnosis and treatment of the disease.MethodsThe enrolled participants were 238 OSCC patients who

surgical treatment in Department of Oral & Maxillofacial Surgery of College of Stomatology Guangxi Medical University from September 2013 to December 2015 and met the inclusion criteria of this study.We collected the clinical data of them and obtained their overall survival(OS) and disease-free survival(DFS) during the follow-up between October 2013 and September 2016.Immunohistochemistry was used to identify the expression level of COX-2,real-time quantitative PCR was employed to measure the expression level of COX-2 mRNA and Western blotting was adopted to detect the expression level of COX-2 in the histological sections of specimens of solid tumor tissues,tissues located 1 cm away from the tumor edge,normal tissues located over 2 cm away from the tumor edge and lymph node tissues in Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ and Ⅴregions after neck dissection taken from the OSCC patients.ResultsThe distribution of positive granules showed a gradual decrease in tumor tissues,tumor adjacent tissues,lymph node tissues in Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ and Ⅴ regions,while they were barely found in the normal tissues.The expression levels of COX-2 and COX-2 mRNA in tumor tissues,tumor adjacent tissues,lymph node tissues in Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ regions were higher than those in normal tissues(P<0.05).The expression levels of COX-2 and COX-2 mRNA in tumor adjacent tissues,lymph node tissues of Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ regions were lower than those in tumor tissues(P<0.05).The expression levels of COX-2 and COX-2 mRNA in lymph node tissues inⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ and Ⅴ regions were higher than those in tumor adjacent tissues(P<0.05).The expression level of COX-2 mRNA in lymph node tissues in Ⅱ region was higher than that in lymph node tissues in Ⅰ region(P<0.05).Lower expression level of COX-2 mRNA was found in lymph node tissues in Ⅲ,Ⅳ and Ⅴ regions than in Ⅰ and Ⅱ regions(P<0.05).COX-2 mRNA was downexpressed in lymph node tissues in Ⅳ and Ⅴ regions compared with it in those tissues in Ⅲ region(P<0.05).The expression level of COX-2 decreased successively in lymph node tissues in Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ and Ⅴ regions(P<0.05).The positive rate of COX-2 expression in patients with pathological grade 3 OSCC was lower than that of patients with grade 1 and 2 OSCC(P<0.05).The positive rate of COX-2 expression in patients with T3-4OSCC was higher than that of patients with T1-2OSCC(P<0.05).Patients with N1and N2OSCC presented higher positive rate of COX-2 expression than those with N0OSCC(P<0.05).Lower positive rate of COX-2 expression was observed in patients with N2OSCC than in those with N1OSCC(P<0.05).The OS and DFS were shorter in COX-2 positive patients than in COX-2 negative patients(P<0.05).Univariate and multivariate Cox regression analysis showed that the expression of COX-2,pathological grading,T staging and N staging were the factors influencing the OS and DFS of OSCC patients(P<0.05).ConclusionCOX-2 is highly expressed in OSCC and is closely related to lymph node metastasis and survival time.It is a biological marker of poor prognosis in patients with OSCC.

Mouth neoplasms；Neoplasms,squamous cell；Cyclooxygenase 2；Prognosis

國家自然科學(xué)基金資助項目(81360407)——4NQO誘發(fā)小鼠口腔癌淋巴道高轉(zhuǎn)移模型播散細(xì)胞與轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究

R 739.8

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.00.029

2017-01-28；

2017-06-08)

1.530021 廣西南寧市，廣西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科

2.530021 廣西南寧市，廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔科

3.530021 廣西南寧市，廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科

*通信作者：蘇紀(jì)平，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師；E-mail：ymsu2@163.com