高效液相色譜法測定云南小粒咖啡豆中咖啡因的含量

陳嫻+刁玉華+肖麗恒

摘 要：建立測定云南小粒咖啡豆中咖啡因含量的HPLC方法，采用高效液相色譜儀帶紫外檢測器，使用C18柱（粒徑：5 μm，3.9 mm×150 mm）；流動相：甲醇+水（24+76）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測器：檢測器波長272 nm；柱溫：25 ℃；進樣量10 μL作為分析條件。咖啡因在0～200 ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999；回收率均在90%～110%之間；檢出限為0.125 mg/kg。結(jié)論 該法具有準確、靈敏、重復(fù)性好等優(yōu)點，適合飲料中的咖啡因含量的檢測。

關(guān)鍵詞：液相色譜法 測定 云南小?？Х榷?咖啡因

中圖分類號：O652.1 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2017）07（a）-0126-02

咖啡因：（Caffeine）是咖啡果中含有的一種生物堿，適度使用有祛除疲勞、興奮神經(jīng)的作用，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇。但是，大劑量或長期使用也會對人體造成損害，特別是它也有成癮性，一旦停用會出現(xiàn)精神萎頓、渾身困乏疲軟等各種戒斷癥狀，雖然其成癮性較弱，戒斷癥狀也不十分嚴重，但由于藥物的耐受性而導(dǎo)致用藥量不斷增加時，咖啡因就不僅作用于大腦皮層，還能直接興奮延髓，引起陣發(fā)性驚厥和骨骼震顫，損害肝、胃、腎等重要內(nèi)臟器官，誘發(fā)呼吸道炎癥、婦女乳腺瘤等疾病，甚至導(dǎo)致吸食者下一代智能低下，肢體畸形。因此也被列入受國家管制的精神藥品范圍。濫用咖啡因通常也有吸食和注射兩種形式，其興奮刺激作用及毒副反應(yīng)、癥狀、藥物依賴性與苯丙胺相近?？Х纫蛑饕糜趯怪袠幸种茽顟B(tài)，如嚴重傳染病、鎮(zhèn)靜催眠藥過量引起的昏睡及呼吸循環(huán)抑制等，可肌肉注射苯甲酸鈉咖啡因。此外，咖啡因還常配伍麥角胺治療偏頭痛：配伍解熱鎮(zhèn)痛藥治療一般性頭痛[1]。此時，它由于收縮腦血管，減少腦血管搏動的幅度而加強以上藥物止頭痛的作用。目前對于咖啡因測定的方法主要有：滴定法[2]、紫外可見分光光度計法[3]、高效液相色譜法[4]、氣相色譜法[5]、薄層色譜法[6]、毛細管電泳法[7]等方法。文章采用高效液相色譜的方法測定咖啡因，建立了采用高效液相色譜的方法測定云南小?？Х榷怪锌Х纫虻姆椒ǎ囼灡砻髟摲椒ㄇ疤幚砗唵危蛛x效能好，回收率高，可以快速、簡便、準確地檢測云南小?？Х榷怪械目Х纫颍玫綔蚀_的檢測結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

云南小粒咖啡豆（市售）；超純水；氧化鎂（MgO）；甲醇（CH3OH）：色譜純；咖啡因標(biāo)準品（C8H10N4O2）：純度≥99%；編號：58-08-2；批號：200911；生產(chǎn)廠家：美國。

高效液相色譜儀（帶紫外檢測器，Agilent 1260美國安捷倫科技有限公司）；水浴鍋（HH-6常州國華有限公司）；電子天平（CP213美國，奧豪斯），感量為0.1 mg；超純水器（明澈UV24美國密理博公司）。

1.2 試驗方法

稱取1 g（精確至0.001 g）經(jīng)粉碎低于30目的均勻樣品于250 mL錐形瓶中，加入約200 mL水，沸水浴30 min，不時振搖，取出流水冷卻1 min，加入5 g氧化鎂，振搖，再放入沸水浴20 min，取出錐形瓶，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水定容至刻度（使樣品溶液中咖啡因含量在標(biāo)準曲線范圍內(nèi)），搖勻，靜置，取上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，備用。

1.2.1 標(biāo)準曲線的繪制

咖啡因標(biāo)準儲備液（2.0 mg/mL）：準確稱取咖啡因標(biāo)準品0.002008 g（精確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容。放置于4 ℃冰箱，有效期為6個月。

咖啡因標(biāo)準中間液（200 μg/mL）：準確吸取5.0 mL咖啡因標(biāo)準儲備液于50 mL容量瓶中，用水定容。放置于4 ℃冰箱，有效期為一個月?？Х纫蛐是€工作液：吸取咖啡因標(biāo)準中間液，配制成濃度分別為10.0、20.0、40.0、80.0、100、120.0、160.0、200 μg/mL的工作液，臨用時配制。將標(biāo)準系列工作液經(jīng)液相色譜儀測定，以標(biāo)準工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線。

1.2.2 儀器工作條件

色譜柱：C18柱（粒徑：5 μm，3.9 mm×150 mm）；流動相：甲醇+水（24+76）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測器：檢測器波長272 nm；柱溫：25 ℃；進樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 校準曲線

取咖啡因標(biāo)準溶液，用高效液相色譜儀自動進樣，標(biāo)準曲線方程為y=27.32252x+12.55479，r=0.99985（見表1），表明線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗

取咖啡因含量高、中、低3個濃度分別進行6次測定，計算6次結(jié)果的相對標(biāo)準偏差，變異系數(shù)均小于15%（見表2），表明使用該方法測定咖啡因數(shù)據(jù)可靠。

2.3 檢出限

方法的測定限為信噪比（S/N）3∶1時的濃度，計算得到方法檢出限為：0.000 5 μg/mL，即：0.125 mg/kg。

定量限為信噪比（S/N）10∶1時的濃度為：0.42 mg/kg。標(biāo)樣色譜圖如圖1，樣品色譜圖。

2.4 回收率和誤差

精確稱取1.0 g云南小?？Х榷箻悠?，加入標(biāo)樣，濃度為20.28 μg/mL，進行3次測定，經(jīng)測定后平均值117.634 4 mg/kg，誤差為3.6，回收率為97%（見表3）。偏差范圍小，說明該方法的準確度較好。

3 結(jié)語

試驗結(jié)果表明，采用建立的高效液相色譜檢測方法測定云南小?？Х榷怪械目Х纫?，具有準確、快速、簡便的優(yōu)點，且測量的范圍滿足標(biāo)準限量的檢測要求。

參考文獻

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