羥基紅花黃色素A在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的影響及其機(jī)制*

文 軍 熊慧生 巫桁錁 蔣 參 王 維

（重慶市腫瘤研究所，重慶市腫瘤醫(yī)院，重慶市癌癥中心，重慶 400030）

羥基紅花黃色素A在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的影響及其機(jī)制*

文 軍 熊慧生 巫桁錁 蔣 參 王 維△

（重慶市腫瘤研究所，重慶市腫瘤醫(yī)院，重慶市癌癥中心，重慶 400030）

目的 觀察羥基紅花黃色素A（HSYA）對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和凋亡的影響及其分子機(jī)制。方法 采用HSYA低、中、高劑量作用于HT-29細(xì)胞，在24 h、48 h、72 h用MTT法檢測細(xì)胞抑制率，Transwell實驗分析HT-29細(xì)胞遷移和侵襲情況，流式細(xì)胞術(shù)分析HSYA對HT-29細(xì)胞凋亡及周期分布的影響；免疫印跡法 （western blot）檢測E-cad、Vi、FN、TGF-β、Smad2和α-SMA蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 HSYA作用于HT-29細(xì)胞后，HT-29細(xì)胞體外增殖均受到抑制（均P<0.05），其抑制細(xì)胞增殖的效果與HSYA的濃度和作用時間有關(guān)。HSYA明顯抑制HT-29細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移（均P<0.05），同時HT-29細(xì)胞凋亡率也均增高（均P<0.05），表現(xiàn)為G0/G1期細(xì)胞比例增加（均P<0.05），S期細(xì)胞比例降低（均P<0.05）。HSYA能夠通過增加E-cad蛋白表達(dá)（均P<0.05）和減少Vi和FN蛋白表達(dá)（均P<0.05）抑制HT-29細(xì)胞上皮間質(zhì)化（EMT）過程的影響。隨著HSYA的濃度升高，TGF-β、Smad2和α-SMA蛋白表達(dá)均下降（均P<0.05）。結(jié)論 HSYA能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、EMT和促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與抑制TGF-β信號通路激活有關(guān)，HSYA可能成為結(jié)直腸癌的治療靶點。

羥基紅花黃色素A HT-29細(xì)胞 增殖 細(xì)胞周期 凋亡 TGF-β

結(jié)直腸癌（CRC）是全球常見的惡性腫瘤之一，是癌癥死亡的主要病因之一［1］。盡管診療技術(shù)不斷提高，但CRC轉(zhuǎn)移性強(qiáng)、復(fù)發(fā)率高等特點，導(dǎo)致其生存率仍較低，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。臨床上主要采用抗血管生成和抗表皮生長因子受體聯(lián)合靶向治療的方案，但效果欠佳。因此，癌癥細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)受到了廣泛的關(guān)注［2］。中草藥紅花作為傳統(tǒng)草藥，被用于治療心腦血管疾病、骨質(zhì)疏松癥和婦科疾病等［3-4］。目前已分離并鑒定出100余種成分，羥基紅花黃色素A（HSYA）是其主要活性成分，具有活血化瘀的功效，在抗氧化、抗炎癥反應(yīng)和抗腫瘤活性等方面效果較好［5-6］。研究發(fā)現(xiàn)，在肝細(xì)胞癌和胃腺癌中，HSY可以抑制腫瘤血管的生成而抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［7］。但是HSYA在結(jié)直腸癌中的研究尚不明確。本實驗通過采用HSYA低、中、高劑量作用于HT-29細(xì)胞，旨在探討HSYA對CRC細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和凋亡的影響及其分子機(jī)制，為臨床采用HSYA治療CRC提供一定的理論依據(jù)。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 HSYA由北京市心肺血管疾病研究所提供，純度為98.9%；DMEM：F12細(xì)胞培養(yǎng)基和E-cad、Vi、FN、TGFβ、Smad2、α-SMA單抗購自 Sigma公司；Transwell小室購自Chemicon公司；基質(zhì)膠購自BD公司；碘化丙啶、鏈霉素、青霉素、BCA蛋白蛋白定量試劑盒、蛋白提取試劑盒、Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡試劑盒和MTT試劑盒購自江蘇碧云天生物技術(shù)研究所。CO2培養(yǎng)箱（SANYO），超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備公司），酶標(biāo)測定儀（BIO-RAD），倒置相差顯微鏡（NIKON），恒溫烤箱（格蘭仕），臺式低速離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），分析天平（BOSCH），低溫高速離心機(jī)（HITACHI），24孔及96孔培養(yǎng)板（Cellstar），低溫冰箱（SANYO），流式細(xì)胞儀（COWTER），細(xì)胞培養(yǎng)瓶（GLOSTAR），轉(zhuǎn)移槽（Bio-Rad），搖床（武漢醫(yī)療儀器廠），蛋白電泳槽（Bio-Rad），凝膠成像儀（Bio-Rad）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 HT-29細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所，在含有10%FBS的DMEM：F12細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱為37℃、5%CO2、飽和濕度，根據(jù)細(xì)胞生長情況1～2 d進(jìn)行換液或傳代。將HT-29細(xì)胞分為實驗組和對照組，實驗組分為HSYA低（0.2 μg/mL）、中（2 μg/mL）和高劑量組（20 μg/mL），空白對照組采用等量生理鹽水。每組總有5個副孔。

1.3 MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制率 取對數(shù)生長期的HT-29細(xì)胞，以1×105個密度接種到96孔板中，加入培養(yǎng)基后各組細(xì)胞繼續(xù)分別培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后入MTT 20 μL，然后再培養(yǎng)4 h后停止培養(yǎng)，棄去上清，在每孔中加入150 μL DMSO后進(jìn)行震蕩，使得結(jié)晶被溶解。在570 nm波長下用酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀測量吸光度（OD）值。其中細(xì)胞增殖抑制率＝（對照組OD值-實驗組OD值）/對照組OD值×100%［8］。

1.4 Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移和侵襲 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，以1×105個/孔接種于24孔板Transwell中，每組設(shè)置5個復(fù)孔，并在上室加入200 μL DMEM：F12培養(yǎng)基，下室加入600 μL DMEM：F12培養(yǎng)基，在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后取出上室，并吸取下室中培養(yǎng)液，加入結(jié)晶紫染色液100 μL/孔，染色10 min，PBS洗滌2遍，400倍顯微鏡下選取5個視野觀察細(xì)胞并計算平均值。在侵襲分析中，小室以基質(zhì)膜包被，后續(xù)步驟同遷移分析。

1.5 流式法檢測細(xì)胞周期及凋亡 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后并進(jìn)行收集，0.01 mol/L PBS 0.5 mL重懸細(xì)胞，加70%乙醇1 mL，-20℃固定24 h，加入PI（終濃度為50 μg/mL）和RNA酶 （終濃度為0.25 mg/mL），室溫下避光孵育30 min后，采用流式細(xì)胞儀檢測，ModFit LT軟件分析并計算各時相細(xì)胞的百分比。500 μL的PBS重懸細(xì)胞，然后加入Annexin V-FITC/PI避光孵育15 min，再加入PI 5 min，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。

1.6 Westrn blot法檢測E-cad、Vi、FN、TGFβ、Smad2、α-SMA蛋白表達(dá) 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后并進(jìn)行收集，采用PBS進(jìn)行漂洗2次，然后經(jīng)裂解和離心，收集上清液，即為細(xì)胞總蛋白，再調(diào)節(jié)每份樣品的蛋白濃度，在上樣緩沖液中加入等量的蛋白，進(jìn)行煮沸，在SDS聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳，然后電轉(zhuǎn)至PVDF膜，封閉液室溫封閉3 h，分別E-cad、Vi、FN、TGFβ、Smad2、α-SMA和GAPDH一抗4℃過夜，HRP標(biāo)記二抗，室溫孵育2 h，ECL發(fā)光劑發(fā)光。圖片經(jīng)吸光度圖像掃描儀掃描，采用Image J軟件對條帶進(jìn)行灰度值的分析。結(jié)果以GAPDH作內(nèi)參，采用相對于正常組蛋白表達(dá)量的倍數(shù)表示。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HSYA對HT-29細(xì)胞增殖抑制的影響 見表1。結(jié)果示，采用低、中、高3個濃度的HSYA分別作用于體外培養(yǎng)的HT-29細(xì)胞24、48、72 h，觀察其細(xì)胞增殖抑制率情況。隨著培養(yǎng)時間增加，HT-29細(xì)胞增殖抑制率也增加，HSYA低、中、高劑量組作用HT-29細(xì)胞時間為48 h與24 h比較，其抑制率均明顯增加（均P＜0.05），作用HT-29細(xì)胞時間為48 h與72 h比較，其抑制率均差別不大（均P>0.05）。隨著HSYA濃度增加，HT-29細(xì)胞增殖抑制率也增加，HSYA中、高劑量組對HT-29細(xì)胞增殖抑制率均高于HSYA低劑量組（均P＜0.05），同時HSYA高劑量組對HT-29細(xì)胞增殖抑制率高于HSYA中劑量組（P＜0.05）。

表1 MTT法檢測HSYA對HT-29細(xì)胞增殖抑制的影響（%，±s）

表1 MTT法檢測HSYA對HT-29細(xì)胞增殖抑制的影響（%，±s）

與本組24 h比較，*P＜0.05；與HSYA低劑量組比較，△P＜0.05；與HSYA中劑量組比較，▲P＜0.05。

組別24 h 48 h 72 h空白對照組-HSYA低劑量組 9.52±0.92 HSYA中劑量組 18.09±1.83△--5.04±0.35 8.43±0.73*10.74±0.89△16.17±1.14*△HSYA高劑量組 30.62±2.79△▲22.52±1.94△▲28.83±2.37*△▲

2.2 HSYA對HT-29細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響 見表2。結(jié)果示，在不同濃度HSYA作用于HT-29細(xì)胞48 h后，HSYA低、中、高劑量組中侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)均低于空白對照組（均P＜0.05），HSYA中、高劑量組中侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)均低于HSYA低劑量組（均P＜0.05），同時HSYA高劑量組中侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)均低于HSYA中劑量組（均P＜0.05）。

表2 HSYA對HT-29細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響（±s）

表2 HSYA對HT-29細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響（±s）

與空白對照組比較，*P＜0.05；與HSYA低劑量組比較，△P＜0.05；與HSYA中劑量組比較，▲P＜0.05。下同。

組別 侵襲細(xì)胞數(shù) 遷移細(xì)胞數(shù)空白對照組HSYA低劑量組HSYA中劑量組197±17 236±21 153±14*182±16*121±11*△146±12*△HSYA高劑量組85±7*△▲113±10*△▲

2.3 HSYA對HT-29細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響見表 3。結(jié)果示，空白對照細(xì)胞凋亡率很低（2.16± 0.23）%，采用HSYA干預(yù)48 h后，細(xì)胞凋亡率則明顯升高，與空白對照組比較，HSYA低、中、高劑量組中細(xì)胞凋亡率高于空白對照組 （均P＜0.05），HSYA中、高劑量組中細(xì)胞凋亡率均高于HSYA低劑量組 （均P＜0.05），同時HSYA高劑量組中細(xì)胞凋亡率高于HSYA中劑量組（P＜0.05）。細(xì)胞周期分析結(jié)果示，HSYA能夠增加G0/G1期細(xì)胞比例，減少S期細(xì)胞比例，與空白對照組比較，HSYA低、中、高劑量組中G0/G1期細(xì)胞比例增加 （均P＜0.05），S期細(xì)胞比例降低 （均P＜0.05）；HSYA中、高劑量組中G0/G1期細(xì)胞比例均高于HSYA低劑量組（均P＜0.05），S期細(xì)胞比例均低于HSYA低劑量組（均P＜0.05）；同時HSYA高劑量組中G0/G1期細(xì)胞比例高于HSYA中劑量組 （P＜0.05），S期細(xì)胞比例低于HSYA中劑量組（P＜0.05）。

表3 HSYA對HT-29細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響（±s）

表3 HSYA對HT-29細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響（±s）

組別G0/G1期 S期G2/M期 凋亡率空白對照組HSYA低劑量組HSYA中劑量組34.05±2.84 56.08±4.26 47.83±3.26*35.13±2.72*53.28±4.63*△27.18±2.08*△7.38±1.24 2.16±0.23 6.84±0.95 8.17±0.62*7.11±1.17 15.42±1.37*△HSYA高劑量組60.31±5.25*△▲21.56±1.74*△▲6.74±0.92△▲28.48±2.29*△▲

2.4 HSYA對HT-29細(xì)胞EMT過程的影響 見表4和圖1。結(jié)果示，與空白對照組比較，HSYA低、中、高劑量組中E-cad蛋白的表達(dá)增加 （均P＜0.05），Vi和FN蛋白的表達(dá)均降低（均P＜0.05）；與HSYA低劑量組比較，HSYA中、高劑量組中E-cad蛋白的表達(dá)均增加（均P＜0.05），Vi和FN蛋白的表達(dá)均降低（均P＜0.05）；同時HSYA高劑量組E-cad蛋白高于HSYA中劑量組（P＜0.05），Vi和FN蛋白低于HSYA中劑量組（P＜0.05）。

表4 HSYA對HT-29細(xì)胞EMT過程的影響（±s）

表4 HSYA對HT-29細(xì)胞EMT過程的影響（±s）

組別E-cad Vi FN空白對照組 0.962±0.091 HSYA低劑量組 0.625±0.057*HSYA中劑量組 0.417±0.035*△0.986±0.093 0.954±0.089 1.250±0.108*0.739±0.061*1.437±0.126*△0.532±0.046*△HSYA高劑量組 0.304±0.024*△▲1.582±0.135*△▲0.408±0.038*△▲

圖1 HSYA對E-cad、Vi和FN蛋白表達(dá)的影響

2.5 HSYA對HT-29細(xì)胞中TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白表達(dá)的影響 見表5和圖2。結(jié)果示，與空白對照組比較，HSYA低、中、高劑量組中TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白的表達(dá)均降低（均P＜0.05），與HSYA低劑量組比較，HSYA中、高劑量組中TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白的表達(dá)均降低（均P＜0.05）；同時HSYA高劑量組TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白低于HSYA中劑量組（P＜0.05）。

表5 HSYA對HT-29細(xì)胞中TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白表達(dá)的影響（±s）

表5 HSYA對HT-29細(xì)胞中TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白表達(dá)的影響（±s）

組別TGF-β Smad2α-SMA空白對照組 0.654±0.068 HSYA低劑量組 0.483±0.043*HSYA中劑量組 0.369±0.032*△0.947±0.087 0.831±0.073 0.623±0.053*0.573±0.053*0.518±0.046*△0.458±0.036*△HSYA高劑量組 0.213±0.018*△▲0.472±0.041*△▲0.335±0.026*△▲

圖2 HSYA對TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白表達(dá)的影響

3 討 論

CRC是世界三大惡性腫瘤之一，其5年生存率不足40%，給患者家庭和社會以沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和壓力［9-10］。隨著中醫(yī)藥學(xué)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，在腫瘤的治療方面取得了較大的進(jìn)展。HSYA參與細(xì)胞生長和分化，與癌細(xì)胞粘附、侵襲和遷移及腫瘤血管生成密切相關(guān)［11］。研究發(fā)現(xiàn)，HSYA可以抑制腫瘤的活性［12］，然而HSYA在CRC中的作用及其機(jī)制尚不明確，對此本研究通過不同濃度HSYA處理HT-29細(xì)胞，分析HSYA對CRC細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和凋亡的影響。

本研究中采用HSYA低（0.2 μg/mL）、中（2 μg/mL）和高劑量組 （20 μg/mL）3個濃度處理HT-29細(xì)胞24 h、48 h、72 h，MTT結(jié)果顯示，隨著培養(yǎng)時間增加，HT-29細(xì)胞增殖抑制率也增加，HSYA低、中、高劑量組作用HT-29細(xì)胞時間為48 h與24 h比較，其抑制率均增加，隨著HSYA濃度增加，HT-29細(xì)胞增殖抑制率也增加，HSYA中、高劑量組對HT-29細(xì)胞增殖抑制率高于HSYA低劑量組。這說明HSYA抑制細(xì)胞增殖的效果與其濃度和作用時間有關(guān)。為進(jìn)一步分析HSYA對HT-29細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，在不同濃度HSYA作用于HT-29細(xì)胞48 h后，HSYA低、中、高劑量組中侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)均低于空白對照組，這體現(xiàn)HSYA不僅能夠抑制HT-29細(xì)胞增殖，還能夠抑制HT-29細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程。這一結(jié)果和之前研究HSYA對胃癌發(fā)生發(fā)展影響結(jié)果接近［12］。

在觀察HSYA對HT-29細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響干預(yù)中，空白對照細(xì)胞凋亡率很低（2.16±0.23）%，采用HSYA干預(yù)48 h后，細(xì)胞凋亡率則升高，與空白對照組比較，HSYA低、中、高劑量組中細(xì)胞凋亡率均高于空白對照組，G0/G1期細(xì)胞比例明顯增加，S期細(xì)胞比例明顯降低。這說明HSYA能夠通過阻滯HT-29細(xì)胞停于G0/G1期比例增高，減少S期細(xì)胞比例，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這一結(jié)果和HSYA對其它腫瘤作用結(jié)果接近［6，13］。腫瘤細(xì)胞的重要特點是細(xì)胞凋亡受阻和細(xì)胞增殖加快，多種抗腫瘤藥物就是通過促進(jìn)腫瘤凋亡和延緩細(xì)胞增殖發(fā)揮作用。這一點也正好說明HSYA可能成為CRC治療的潛在靶點。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是指在細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境發(fā)生改變時，上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞分化的過程，參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［14］。上皮細(xì)胞通過細(xì)胞間粘附而緊密連接，可以阻止細(xì)胞遷移；間質(zhì)細(xì)胞缺乏穩(wěn)定的細(xì)胞間連接，使細(xì)胞具有運(yùn)動和遷移。EMT使腫瘤細(xì)胞擺脫細(xì)胞間的連接，更易于侵襲和轉(zhuǎn)移。E-cadherin蛋白具有維持細(xì)胞間連接穩(wěn)定性的作用，是上皮細(xì)胞的特征性蛋白，下調(diào)E-cadherin蛋白，上皮細(xì)胞間的粘附功能喪失，促進(jìn)EMT的發(fā)生；Vimentin是間質(zhì)細(xì)胞的特征性表型蛋白，腫瘤發(fā)生EMT，會上調(diào)Vimentin蛋白，促進(jìn)上皮細(xì)胞與間質(zhì)粘附，加強(qiáng)細(xì)胞運(yùn)動［15］。在本研究中探討了HSYA對HT-29細(xì)胞EMT過程的影響，結(jié)果示與空白對照組比較，HSYA低、中、高劑量組中E-cad蛋白的表達(dá)增加，而Vi和FN蛋白表達(dá)降低，說明HSYA可減少CRC的EMT過程，延緩腫瘤進(jìn)展。

TGF-β具有促進(jìn)血管生成的作用，參與EMT過程，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲［16］。EMT使腫瘤從原發(fā)部位轉(zhuǎn)移到血液循環(huán)，TGF-β1作為調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)形成和細(xì)胞生成的細(xì)胞因子之一，表達(dá)增強(qiáng)促進(jìn)EMT的發(fā)生。研究表明上調(diào)TGF-β促進(jìn)血管侵襲與轉(zhuǎn)移，與加快腫瘤的惡性程度，使患者的生存時間變短［17］。本研究結(jié)果示HSYA低、中、高劑量組中TGFβ、Smad2和α-SMA蛋白的表達(dá)均降低，這體現(xiàn)HSYA通過抑制TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。TGF-β主要通過下游Smads家族傳遞信號［18］。TβRII是具有絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的蛋白，在上皮細(xì)胞膜與TGF-β1緊密結(jié)合，使信號傳導(dǎo)蛋白Smad2磷酸化，Smad2與Smad4結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核，參與EMT相關(guān)基因的激活。因此，TGF-β/Smad信號通路是EMT過程中的重要信號通路，在CRC轉(zhuǎn)移過程中至關(guān)重要。

綜上所述，HSYA能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、EMT和促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與抑制TGFβ信號通路激活有關(guān)，HSYA可能成為結(jié)直腸癌的治療靶點。

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Effects of Hydroxysafflor Yellow A on the Development and Progression in Colorectal Cancer and Its Mechanism

WEN Jun.Chongqing Cancer Institute/Hospital/Cancer Center，Chongqing 400030，China.

Objective：To study the effects of hydroxysafflor yellow A（HSYA）on the proliferation，invasion，migration and apoptosis in colorectal cancer cell and its mechanism.Methods：The low，middle and high dose HSYA were applied to treat HT-29 cells.The MTT assay was used to observe the inhibiting effects of HSYA on the cell proliferation at 24 h，48 h and 72 h.Transwell experiment was used to investigate the migration and invasion in HT-29 cells.The flow cytometry（FCM）was adopted to investigate the influence of HSYA on the HT-29 cells apoptosis and cell cycle.Western blot was used to measure the expression level of E-cad，Vi，F(xiàn)N，TGF-β，Smad2 and α-SMA in cells.Results：After HT-29 cells were disposed by HSYA，significantly inhibiting effects on the proliferation of HT-29 cell were observed（all P<0.05）.The effect was correlated with the density and action time of HSYA.HSYA could significantly inhibit the migration and invasion in HT-29 cells（all P<0.05），induce the apoptosis of HT-29 cell（all P<0.05）and change cell cycle which showed mainly the percentage of HT-29 cell increased in stage G0/G1（all P<0.05）and decreased in stage S（all P<0.05）.HSYA promoted E-cad protein expression（all P<0.05）and decreased protein expression of Vi and FN（all P<0.05）to inhibit epithelial to mesenchymal transition in HT-29 cells.Moreover，with the increase of HSYA concentrations，it significantly increased the protein expression level of TGF-β，Smad2 and α-SMA（all P<0.05）.Conclusions：HSYA can inhibit the proliferation，invasion，migration and EMT of colorectal cancer cell，and promote the apoptosis of colorectal cancer cells.The mechanism may be related to the inhibition of TGF-β signaling pathway activation，and HSYA may be a therapeutic target for colorectal cancer.

Hydroxysafflor yellow A；HT-29 cell；Proliferation；Cell cycle；Apoptosis；TGF-β

R285.5

A

1004-745X（2017）08-1347-05

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.08.010

2017-06-12）

重慶市衛(wèi)生和計生委中醫(yī)藥科技項目（zy201402144）

△通信作者（電子郵箱：wj3389479@sina.com）