P16和Ki—67在宮頸鱗癌癌前病變中的表達(dá)及其診斷價(jià)值分析構(gòu)架

王曉平

[摘要] 目的 探討Ki-67與P16這兩項(xiàng)免疫組化細(xì)胞增殖標(biāo)志指數(shù)在宮頸鱗癌癌前病變中的具體表達(dá)，分析其架構(gòu)，并驗(yàn)證其所具有的診斷價(jià)值。 方法 擇取2011年11月～2016年11月期間于筆者所在醫(yī)院行宮頸癌篩查的90例受檢對(duì)象，其中包括30例健康受檢者，30例宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變患者以及30例宮頸鱗癌患者，分別命名為A組、B組與C組。為三組受檢者給予免疫組化檢測(cè)，分析各組的Ki-67與P16表達(dá)。 結(jié)果 就Ki-67與P16的陽(yáng)性表達(dá)率而言，C組>B組>A組，CIN（Cervical Intraepithelial Neoplasia，宮頸上皮內(nèi)瘤變）Ⅲ>CIN Ⅱ >CIN Ⅰ，病變?cè)絿?yán)重，陽(yáng)性表達(dá)率越高，且C組、B組分別與A組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 Ki-67與P16陽(yáng)性表達(dá)率與患者宮頸組織病變程度輕重有較為密切的聯(lián)系，臨床可以根據(jù)Ki-67與P16的表達(dá)結(jié)果來(lái)鑒別患者宮頸組織的病變程度，給予患者準(zhǔn)確的診斷。

[關(guān)鍵詞] P16；Ki-67；宮頸鱗癌癌前病變；表達(dá)；診斷價(jià)值

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）14-203-03

Expression of P16 And Ki-67 in precancerous lesions and its diagnostic value in cervical squamous cell carcinoma

WANG Xiaoping

Department of Gynaecology，Dongguan Huangjiang Hospital，Dongguan 523400，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Ki-67 and P16 immunohistochemical markers in precancerous lesions of cervical squamous cell carcinoma，and to analyze their structure and verify their diagnostic value. Methods 90 patients with cervical cancer screening in the hospital from November 2011 to November 2016 were enrolled，including 30 healthy subjects 30 patients with cervical squamous intraepithelial neoplasia，and 30 patients with cervical squamous cell carcinoma，they were named group A，group B and group C，respectively.The expression of Ki-67 and P16 in each group was analyzed by immunohistochemistry. Results The order of positive rate of Ki-67 and P16 was group C>B>A group，CIN Ⅲ>CIN Ⅱ>CIN Ⅰ，and the more serious the lesion，the higher the positive expression rate.Compared group B and group C with group A，the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Ki-67 and P16 positive expression rate has a more closely link with the severity of cervical lesions in patients.The expression of Ki-67 and P16 can be used to identify the degree of cervical tissue and provide accurate diagnosis.

[Key words] P16；Ki-67；Precancerous lesions of cervical squamous cell carcinoma；Expression；Diagnostic value

宮頸癌從發(fā)生到發(fā)展都呈現(xiàn)出漸進(jìn)性的演變過(guò)程，所耗費(fèi)的時(shí)間少則數(shù)年，多則數(shù)十年，常規(guī)檢測(cè)難以得到準(zhǔn)確診斷結(jié)果，臨床需要選用Ki-67與P16等作為免疫組化指標(biāo)，借此對(duì)患者宮頸組織的病變程度給予明確鑒別，以實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌的有效預(yù)防[1-2]。本文選擇2011年11月～2016年11月期間于本院接受宮頸癌篩查的90例受檢者，試分析Ki-67與P16的表達(dá)以及其所具有的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取2011年11月～2016年11月期間于筆者所在醫(yī)院行宮頸癌篩查的90例受檢對(duì)象，其中包括30例健康受檢者，30例宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變患者以及30例宮頸鱗癌患者，分別命名為A組、B組與C組。對(duì)比三組受檢者的基本資料：（1）A組：年齡22～58歲，平均（40.1±8.4）歲；B組：年齡23～57歲，平均（40.3±8.4）歲；CIN Ⅲ患者11例、CIN Ⅱ患者10例、CIN Ⅰ患者9例；C組年齡22～57歲，平均（40.2±8.4）歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者16例，淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移患者14例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)13例，Ⅱ級(jí)9例，Ⅲ級(jí)8例。三組受檢者的一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究已獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

使用SP法為所有受檢對(duì)象進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行嚴(yán)格操作，將取自受檢者體內(nèi)的宮頸上皮標(biāo)本先浸入10%甲醛溶液中，隨后依次給予如下操作：脫水→透明→浸臘→石蠟包埋→切片（厚度為4?m）→HE染色，在光鏡下觀察標(biāo)本的細(xì)胞形態(tài)，給予病理診斷并按照診斷結(jié)果分組。為標(biāo)本染色，選擇陽(yáng)性片，對(duì)其進(jìn)行Ki-67與P16的陽(yáng)性對(duì)照；使用磷酸鹽緩沖液作為一抗的代替，繼續(xù)作陰性對(duì)照。注：試驗(yàn)所用材料-Ki-67、P16鼠抗人單克隆抗體與SP超敏試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物公司，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為YZB/閩榕0071-2013。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比三組受檢者的Ki-67、P16陽(yáng)性表達(dá)率，尤其是B組中CIN Ⅰ～Ⅲ患者Ki-67、P16陽(yáng)性表達(dá)率。Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn)為：細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)均呈棕黃色，或是在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)棕黃色的顆粒，使用光鏡進(jìn)行高倍視野觀察，可發(fā)現(xiàn)4區(qū)計(jì)數(shù)約在200個(gè)左右。若是細(xì)胞未著色，則為陰性（-）；若是陽(yáng)性細(xì)胞染色率不足10%，則為弱表達(dá)（+）；若是陽(yáng)性細(xì)胞染色率在10%～30%之間，則為中陽(yáng)性（++）；若是陽(yáng)性細(xì)胞染色率高于30%，則為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）[3-4]。

P16的陽(yáng)性表達(dá)率判定標(biāo)準(zhǔn)為：在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)有黃棕色或棕褐色的顆粒。若為單個(gè)細(xì)胞染色且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)不足5%，則為陰性（-）；若為分散狀細(xì)胞團(tuán)染色且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在5%～24%之間，則為弱陽(yáng)性（+）；若為片狀細(xì)胞染色且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%～50%之間，則為中陽(yáng)性（++）；若為彌散狀細(xì)胞染色且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于50%，則為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）[5-6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

參與實(shí)驗(yàn)的患者其臨床檢測(cè)所得數(shù)據(jù)均行統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS進(jìn)行檢驗(yàn)。陽(yáng)性表達(dá)率等計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P16的陽(yáng)性表達(dá)率

P16陰性表達(dá)率從高到低分別為：A組>B組CIN Ⅰ患者>B組CIN Ⅱ患者>B組CIN Ⅲ患者>C組；陽(yáng)性表達(dá)率則與之相反，A組與其他幾組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率

Ki-67陰性表達(dá)率從高到低分別為：A組>B組CIN Ⅰ患者>B組CIN Ⅱ患者>B組CIN Ⅲ患者>C組；陽(yáng)性表達(dá)率則與之相反，A組與其他幾組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

宮頸癌是一種常見(jiàn)女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，鱗狀細(xì)胞癌是其組織學(xué)類型中最為常見(jiàn)的一種，患者通常起病于宮頸鱗狀上皮內(nèi)部出現(xiàn)瘤變，隨后持續(xù)不斷地發(fā)展，最終形成浸潤(rùn)性癌[7-8]。宮頸癌按照不同病理表現(xiàn)可以分為鱗癌、腺癌、鱗腺癌。其中腺癌可分為黏液腺癌與惡性腺瘤；鱗癌按照組織分化程度可以分為高分化鱗癌、中分化鱗癌以及低分化鱗癌；鱗腺癌則包括上述兩種表現(xiàn)。宮頸鱗癌癌前病變是指鱗癌發(fā)生前在宮頸處發(fā)生的病變，由此而引發(fā)的宮頸癌前病變即為CIN Ⅲ。由于宮頸癌與其他一般性惡性腫瘤一樣，在發(fā)展上較為較為緩慢，初期表現(xiàn)并不明顯，大多數(shù)患者無(wú)法在癌前病變階段得到準(zhǔn)確的診斷結(jié)果，因此許多患者錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)，無(wú)法治愈疾病，只能在中晚期接受化療或放療，以延長(zhǎng)生存期限。對(duì)此，臨床嘗試從基因蛋白等其他角度進(jìn)行探尋新的道路，以提高宮頸癌的早期篩選率。

從惡性腫瘤的發(fā)生來(lái)看，細(xì)胞增殖失控是最為主要的原因，而P16作為細(xì)胞增殖指數(shù)之一，同時(shí)也是調(diào)控細(xì)胞增生狀況的主要基因，調(diào)控細(xì)胞是其固有的功能；Ki-67則可以反映出細(xì)胞群的增殖活性，決定了正常細(xì)胞周期中抗原決定簇是被迅速降解還是徹底失去，同樣是重要的癌癥標(biāo)志物[9-10]。關(guān)于P16、Ki-67與宮頸癌變、癌前病變的關(guān)系，叢玲華、左云海等人均在各自的研究中有所提及，即：宮頸上皮腫瘤在發(fā)生與發(fā)展上源于P16、Ki-67等基因蛋白發(fā)生了變化，其表皮生長(zhǎng)因子受體在蛋白酪氨酸激酶的影響下傳導(dǎo)原癌基因的信號(hào)、調(diào)控細(xì)胞周期，這種基因蛋白的表達(dá)一般會(huì)隨著宮頸病變的不斷加重而持續(xù)增加，其陽(yáng)性率會(huì)隨著CIN等級(jí)的增加而增加[11-15]。而本研究結(jié)果中健康受檢者、CIN Ⅰ～Ⅲ患者以及宮頸癌患者的陽(yáng)性表達(dá)率分布特點(diǎn)恰好與上述研究結(jié)論相符，即宮頸癌前病變?cè)絿?yán)重的患者，其P16、Ki-67基因蛋白改變?cè)矫黠@，陽(yáng)性率也就越高。因此臨床可以將P16與Ki-67作為診斷宮頸組織是否發(fā)生癌變的主要指標(biāo)，在宮頸鱗癌癌前病變的診斷中，更是可以借由這兩項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性率的高低來(lái)鑒別患者的病變處于CIN Ⅰ～Ⅲ的具體哪一階段，也由此可見(jiàn)這兩項(xiàng)指標(biāo)在宮頸癌癌前病變中所具有的顯著臨床診斷價(jià)值。

鱗癌乃宮頸癌常見(jiàn)組織類型，CIN Ⅲ乃是鱗癌發(fā)生前最為嚴(yán)重的癌前病變階段，也是治愈患者最后的治療時(shí)機(jī)，臨床可以借由檢驗(yàn)患者在P16、Ki-67上的不同陽(yáng)性表達(dá)率來(lái)鑒別與診斷患者的病變程度，以實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌的有效篩查。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張燕，王一，王建華，等.p16、Ki-67在440例宮頸病變中的表達(dá)及其病理診斷價(jià)值[J].診斷病理學(xué)雜志，2013，20（3）：171-175.

[2] D.Mocu?a，T. Pop，F(xiàn).Szasz，et al.Precancerous cervical lesions and immunomarkers for their prognosis[J].Studia Universitatis Vasile Goldis Arad，Seria Stiintele Vietii，2010， 20（2）：87-93.

[3] 朱梅娟.Ki67、P16和HPV在宮頸病變組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼保健，2013，28（19）：3095-3097.

[4] Takeshima M，Saitoh M，Kusano K，et al.High frequency of hypermethylation of p14，p15 and p16 in oral pre-cancerous lesions associated with betel-quid chewing in Sri Lanka[J].Journal of Oral Pathology & Medicine，2008，37（8）：475-479.

[5] 趙娟，馬唯，吳林林，等.AEG-1、P16、KI-67蛋白在宮頸癌前病變中的表達(dá)與臨床意義[J].中國(guó)性科學(xué)，2016，25（10）：35-39.

[6] Badiga S，Chambers MM，Huh W，et al.Expression of p16INK4A in cervical precancerous lesions is unlikely to be preventable by human papillomavirus vaccines[J].Cancer，2016，122（23）：3615-3623.

[7] Pavlovic B，Djukic V，Milovanovic J，et al.Morphometric analysis of Ki-67 and p16 expression in laryngeal precursor lesions[J].Archives of Oto-Rhino-Laryngology，2013，270（（4）：1405.

[8] 王嬌，舒麗莎，陳書(shū)玲，等.P16、Ki67聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸脫落細(xì)胞中的診斷意義[J].中國(guó)婦幼保健，2016，31（10）：2176-2179.

[9] 汪玉，馮曉冬，南進(jìn)軍，等.P16、Ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及意義[J].湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，35（2）：131-133，156，100.

[10] Dong CX，Deng DJ，Pan KF，et al.Promoter methylation of p16，associated with Helicobacter pylori， infection in precancerous gastric lesions：A population-based study[J]. International Journal of Cancer Journal International Du Cancer，2009，124（2）：434.

[11] 左云海，袁迎春.p16和Ki-67在宮頸鱗癌癌前病變中的表達(dá)及其診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22（27）：2974-2975，2983.

[12] 叢玲華，戴珍珍，方來(lái)福，等.EGFR、P16、Ki67和P53在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（2）：87-90.

[13] 董麗杰，王莉.P16、Ki-67在宮頸癌前病變分層管理中的作用[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2016，25（10）：1782-1783.

[14] 黃錦成，朱付華，陳飛虎，等.廣西北流地區(qū)733例宮頸上皮內(nèi)瘤變臨床病理分析[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，31（2）：270-271.

[15] 劉玉艷，沈久洋，朱安超，等.pl6/Ki-67細(xì)胞學(xué)雙染在子宮頸癌篩查中應(yīng)用價(jià)值[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2017，33（1）：38-41.

（收稿日期：2017-03-06）