縱條紋炭角菌石油醚萃取物的揮發(fā)性成分分析

羅靜 楊偉 伍嬌琪 任青媛 黃毅

摘要[目的] 分析炭角菌科藥食真菌縱條紋炭角菌（Xylaria striata Pat.1887）子實(shí)體石油醚萃取物的化學(xué)成分。[方法] 采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)縱條紋炭角菌乙醇提取石油醚萃取物進(jìn)行測(cè)定，使用NIST譜圖庫(kù)自動(dòng)檢索結(jié)合人工比對(duì)確定其化學(xué)成分，并利用峰面積歸一法計(jì)算各成分相對(duì)百分含量。

[結(jié)果] 共分離出37個(gè)色譜峰，經(jīng)文獻(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照分析，鑒定出30個(gè)化合物，鑒定成分占流出峰總面積的98.43%。縱條紋炭角菌石油醚萃取物主要包括脂肪酸及其酯類（77.58%），以及甾體類化合物（19.44%）。含量最高的是反式-亞油酸甲酯（38.23%），其次為棕櫚酸甲酯（19.12%）、麥角甾醇（17.06%）、9順，12反-亞油酸甲酯（5.15%）、油酸甲酯（4.43%）以及硬脂酸甲酯（3.3%）等。[結(jié)論]研究結(jié)果為該食藥用真菌在農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥等領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞縱條紋炭角菌；石油醚萃取物；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；化學(xué)成分分析

中圖分類號(hào)S567.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A文章編號(hào)0517-6611（2017）17-0001-03

Abstract[Objective] To analyze the chemical constituents of petroleum fraction from the fruiting body of Xylaria striata.[Method] The petroleum extracts from X.striata were extracted by ethanol and then the petroleum fraction was analyzed by GCMS.After using NIST spectrum database and artificial comparison，the chemical composition was confirmed.And relative percentage of each component was calculated by peak area normalization method.[Result] 37 peaks were separated，and 30 compounds were identified based on NIST spectral library and corresponding literature information，which took 98.43% of total peaks.Most of them were fat acids and their esters （77.58%），steroids （19.44%）.The content of methyl linoleate was the highest（38.23%），followed by methyl palmitate（19.12%），9cis，12trans，methyl linoleate （5.15%），methyl oleate （4.43%）and methyl stearate（3.3%）.[Conclusion] The research can provide some theoretical basis for the exploration and utilization of X.striata.

Key wordsXylaria striata；Petroleum fraction；GCMS；Chemical constituents

基金項(xiàng)目

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（21272189）；西南科技大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新基金項(xiàng)目（CX16-064）。

作者簡(jiǎn)介羅靜（1996—），女，四川南充人，本科生，專業(yè)：制藥工程。*通訊作者，講師，博士，從事真菌天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)研究。

收稿日期2017-04-14

縱條紋炭角菌（Xylaria striata Pat.1887），隸屬子囊菌門盤菌亞門糞殼菌綱炭角菌亞綱炭角菌目炭角菌科炭角菌屬（Xylaria Hill ex Schrank）。該菌是一種植物內(nèi)生菌，夏季埋生或表生于闊葉樹(shù)的腐朽樹(shù)皮和活樹(shù)根上，民間將其作為藥用菌使用，幼嫩子實(shí)體還可直接食用，味道鮮美[1]。現(xiàn)有文獻(xiàn)已報(bào)道同屬其他炭角菌的多種生物學(xué)功效[2-5]和分離獲得的一系列活性化合物[6-9]，表明炭角菌屬具有較高的科研開(kāi)發(fā)價(jià)值。筆者所在課題組于2013年開(kāi)始對(duì)該菌進(jìn)行系統(tǒng)研究，目前已完成并優(yōu)化了該菌的實(shí)驗(yàn)室人工培養(yǎng)方法[10-12]和活性初篩工作?；钚院Y選結(jié)果表明，縱條紋炭角菌乙醇提取物具有較強(qiáng)的抗菌[13]和抗腫瘤活性[14]。同時(shí)，化合物的成分分離鑒定工作也同步進(jìn)行，并取得了一定的進(jìn)展[15-16]，但目前關(guān)于縱條紋炭角菌化學(xué)成分的系統(tǒng)研究則鮮見(jiàn)報(bào)道。筆者對(duì)縱條紋炭角菌乙醇提取石油醚萃取物采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行了分離與鑒定，旨在為縱條紋炭角菌化學(xué)成分的研究提供理論數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料、試劑和儀器

1.1.1供試材料。 縱條紋炭角菌子實(shí)體，由西南科技大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，培養(yǎng)方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[10]。真菌材料在用純水清除外部雜質(zhì)后，室外風(fēng)干后再于50 ℃下烘干至恒重。干燥的子實(shí)體粉碎過(guò) 50 目篩，避光干燥保存，備用。

1.1.2試劑。無(wú)水乙醇、石油醚（沸點(diǎn)60～90 ℃）、硫酸、甲苯、正己烷、無(wú)水硫酸鈉和甲醇均為國(guó)產(chǎn)分析純，購(gòu)自成都科龍化工試劑廠；超純水（電阻率18.2 MΩ）為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.1.3設(shè)備。7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，為美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，為上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；SHB-B95循環(huán)水式多用真空泵，為鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品；ALC-210.4電子天平，為德國(guó)賽多利斯科技儀器有限公司產(chǎn)品；電子恒溫水浴鍋，為天津市泰斯特儀器有限公司產(chǎn)品；SB-5200DTK數(shù)控超聲波清洗機(jī)和DLK 5007快速低溫冷卻循環(huán)泵，為寧波新芝生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

1.2供試樣品的制備

450 g縱條紋炭角菌子實(shí)體干燥粉末，用10倍體積（m/V）無(wú)水乙醇冷浸5次，每次24 h。過(guò)濾并合并濾液，于45 ℃真空減壓濃縮至無(wú)乙醇味，獲得浸膏23.28 g。浸膏加入超純水混懸后，用石油醚（沸點(diǎn)60～90 ℃）萃取3次，分液合并石油醚萃取部分并旋干，得石油醚萃取物2.7 g，4 ℃下保存?zhèn)錂z。

1.3GC-MS分析

1.3.1甲酯化。取 100 mg石油醚萃取物樣品置于 10 mL 具塞試管中，加入 5 mL 甲酯化溶液（95%硫酸∶甲苯∶甲醇=1∶1∶2，V/V/V），用旋渦混合儀振蕩后，于 50 ℃ 放置12 h，12 h內(nèi)每1 h在渦旋上振蕩 20 s。甲酯化完成后，為了獲得相分離，需添加 3 mL 正己烷于甲酯液中，再用旋渦混合儀振蕩，靜置 10 min 后取上清液，加人少許無(wú)水硫酸鈉除水后，將液體經(jīng) 0.22 μm濾膜過(guò)濾，將濾液移人進(jìn)樣瓶，進(jìn)行GC-MS分析。

1.3.2GC條件。色譜柱為 Agilent 19091S-433柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；升溫程序：50 ℃保持2 min，以10 ℃/min升至180 ℃，保持5 min，以5 ℃/min升至280 ℃，保持5 min，再以3 ℃/min 升至300 ℃，保持10 min。載氣為高純氦氣（99.999%），柱內(nèi)載氣流量為1.0 mL/min。進(jìn)樣量1 μL，分流比為10∶1，體積流量為1 mL/min，容積延遲3 min。

1.3.3MS條件。EI電離源，接口溫度為200 ℃，電子能量70 eV，離子源溫度220 ℃，掃描質(zhì)量范圍m/z 30～600，質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫(kù)為NIST05。

2結(jié)果與分析

從縱條紋炭角菌的石油醚萃取物中檢測(cè)出的GC-MS色譜峰如圖1所示。各色譜峰相應(yīng)的質(zhì)譜圖經(jīng)NIST譜圖庫(kù)自動(dòng)檢索，并查閱相關(guān)文獻(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照分析結(jié)果如表1所示。

試驗(yàn)結(jié)果表明，在縱條紋炭角菌石油醚萃取物中共分離出37個(gè)峰，并鑒定了其中的30個(gè)化合物，鑒定成分占流出峰總面積的98.43%，其中含量在1.00%以上的有12個(gè)，主要為脂肪酸及其酯類、甾類化合物。其中含量最高的是反式-亞油酸甲酯（38.23%），而后依次為棕櫚酸甲酯（19.12%）、麥角甾醇（17.06%）、9順，12反-亞油酸甲酯（5.15%）、油酸甲酯（443%）、硬脂酸甲酯（3.30%）、9，11-去氫麥角甾醇苯甲酸酯（2.16%）、棕櫚酸乙酯（1.96%）、麥角甾酮（1.31%）、羊毛甾醇（1.07%）、十五烷酸甲酯（1.05%）和γ-亞麻酸甲酯等。

3討論與結(jié)論

袁小紅等[13-14]曾報(bào)道縱條紋炭角菌的乙醇提取物對(duì)植物病原真菌及植物病原細(xì)菌均具有較好的抑制活性，并對(duì)肝癌細(xì)胞也有較強(qiáng)的抑制活性。筆者在GC-MS分析中發(fā)現(xiàn)該菌石油醚萃取部位含有較高的亞油酸甲酯和棕櫚酸甲酯，這2種化合物均有較強(qiáng)的抗菌活性，且對(duì)植物害螨還有較強(qiáng)的觸殺、產(chǎn)卵抑制和趨避作用[17-18]。這表明縱條紋炭角菌乙醇提取物的抗菌活性物質(zhì)可能來(lái)自亞油酸甲酯和棕櫚酸甲酯。另外，文獻(xiàn)報(bào)道麥角甾醇、麥角甾酮也具有較強(qiáng)的抗菌抗腫瘤活性[19-25]，這2種化合物可能也是該菌乙醇提取物的抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。此外，麥角甾醇還是食品、飼料及醫(yī)療等工業(yè)中常用的一種化學(xué)品原料，為重要的脂溶性維生素D2源，可作為添加劑添加在飼料中，還可用于生產(chǎn)“可的松”“激素黃體酮”等甾醇類藥物[20]。

GC-MS中發(fā)現(xiàn)的其他化合物也具有多種生物學(xué)活性，如羊毛甾醇具治療白內(nèi)障的價(jià)值[26]；含量最高的亞油酸甲酯具衍生化價(jià)值[27]，其衍生物亞油酸、共軛亞油酸具抗癌[28]、預(yù)防心血管疾病[29]等活性。

綜上所述，縱條紋炭角菌具有開(kāi)發(fā)成生物環(huán)保農(nóng)藥和醫(yī)藥用途的潛力，為進(jìn)一步深入的活性成分開(kāi)發(fā)研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)為該食藥用真菌在農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥等方面的開(kāi)發(fā)利用提供了一定的理論依據(jù)。

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