血必凈注射液對膿毒癥大鼠心功能及內(nèi)皮功能的影響

何健卓，尹 鑫，馬世玉，郭力恒，張敏州

?

·基礎醫(yī)學論著/研究·

血必凈注射液對膿毒癥大鼠心功能及內(nèi)皮功能的影響

何健卓，尹 鑫，馬世玉，郭力恒，張敏州

目的 探討血必凈注射液(XBJ)對膿毒癥大鼠心肌及血清核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)表達；血清內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)等內(nèi)皮功能指標的影響及對心功能障礙的保護作用。方法 將42只SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為假手術組(Sham，n=6)、模型組(CLP，n=18)、中藥組(XBJ，n=18)，通過盲腸結扎穿孔(CLP)法制作膿毒癥大鼠模型。中藥組腹腔注射血必凈注射液(濃度為1 mg/mL，10 mg/kg)；假手術組、模型組則灌胃生理鹽水，每12 h予1次。應用小動物超聲、ELISA、免疫組化及病理學等方法觀察XBJ對膿毒癥大鼠模型的心率、左室射血分數(shù)(LVEF)、左室收縮末內(nèi)徑(LVISD)、左室舒張末內(nèi)徑(LVIDD)、室間隔厚度(IVS)，內(nèi)皮功能(ET-1、vWF、eNOS)及外周血、心臟的NF-κB等指標變化。結果 造模24 h后心臟彩超提示與Sham組比較， CLP組HR上升(P<0.05)；LVEF及IVS活動度(P<0.05)下降；LVISD及LVIDD上升(P<0.05)。與Sham組比較，XBJ組HR上升(P<0.05)，LVEF下降(P<0.05)。CLP組48 h后HR較24 h下降(P<0.05)。XBJ組24 h及48 h與CLP組同時點比較心率下降(P<0.05)，LVISD減少(P<0.05)，LVEF及IVS升高(P<0.05)。造模后24 h，CLP組ET-1及vWF較Sham組升高(P<0.05)，eNOS較Sham組降低(P<0.05)。XBJ組ET-1(P<0.05)及vWF較Sham組升高(P<0.05)，eNOS較Sham組降低(P<0.05)。XBJ組24 h ET-1、vWF水平低于CLP組(P<0.05)、eNOS高于CLP組(P<0.05)，48 h ET-1水平低于CLP組(P<0.05)。造模后24 h，血清NF-κB水平CLP組、XBJ組較Sham組升高(P<0.05)，XBJ組低于CLP組(P<0.05)。Sham組偶見NF-κB表達陽性細胞，細胞質(zhì)淺黃色且陽性率較低，顯著低于CLP組。CLP組可見大量陽性細胞，多數(shù)為棕黃色，陽性率高。XBJ組陽性細胞減少，多數(shù)為淺黃色或黃色，且陽性率較模型組明顯降低(P<0.05)。結論 血必凈可改善CLP大鼠心功能及內(nèi)皮功能，降低內(nèi)皮細胞標志物濃度，其機制可能是干預NF-κB信號通路，降低NF-κB表達，增加eNOS表達，減少內(nèi)皮損傷，內(nèi)皮功能障礙可能是膿毒癥心功能障礙的其中一個重要機制。

膿毒癥；血必凈注射液；大鼠；心??；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；內(nèi)皮功能

膿毒癥(sepsis)是宿主對侵襲性感染反應的一個復雜綜合征，成為人類健康的重要威脅。膿毒癥、膿毒癥休克及多器官功能障礙綜合征(MODS)的死亡率從25%～70%，是非冠心病重癥監(jiān)護病房(ICU)的主要死亡原因[1]。膿毒癥的發(fā)病機制復雜，傳統(tǒng)研究主要集中在白細胞介導的炎癥反應。新近研究表明，內(nèi)皮細胞在膿毒癥發(fā)展至嚴重膿毒癥及膿毒癥休克進程中至關重要[2]。內(nèi)皮細胞在膿毒癥病人血管滲漏及休克過程中起重要作用。微血管改變是導致膿毒癥誘導心功能障礙(SIMD)的主因，而進展的血流動力學紊亂和心血管不穩(wěn)定是導致死亡的重要原因[3]。

核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)誘導表達的靶基因中多種物質(zhì)是炎性反應、內(nèi)皮激活的關鍵介質(zhì)，在膿毒癥/膿毒性休克的發(fā)生、發(fā)展中作用重要[4]。血必凈注射液(XBJ)已被廣泛用于治療膿毒癥及保護器官、穩(wěn)定血管內(nèi)皮細胞，改善凝血功能障礙并調(diào)節(jié)炎癥反應和氧化應激。目前對血必凈注射液干預NF-κB通路從而影響膿毒癥和感染性休克的研究甚少。本研究采用盲腸結扎穿孔(cecal ligation and puncture，CLP)復制膿毒癥大鼠模型，觀察血必凈注射液對膿毒癥大鼠NF-κB信號通路的活化調(diào)控，探討其對膿毒癥誘導心功能及內(nèi)皮功能的保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性SD大鼠42只，體重為210 g±10 g，南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：44002100001869；動物實驗環(huán)境設施合格證號：SYXK(粵)2008-0094。

1.2 試劑與藥品 BIOPAC SYSTEMS(MP150型)16道生理系統(tǒng)記錄儀(美國)，超高分辨率小動物彩色多普勒(Visualsonics，Canada)，Anke TDL-5-A低溫離心機(上海)，UV-754分光光度計(上海)，LIBROR AEU-210型電子分析天平(上海)，DT-1TB電子體溫計(上海醫(yī)用儀表廠)，玻璃勻漿器、眼科手術剪、手術刀、鑷子、離心管、EP管、試管等。

血必凈注射液(國藥準字 Z20040033；天津紅日藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))。組分：紅花、赤芍、川芎、丹參、當歸等中藥材提取物，主要成分為紅花黃色素A等。性狀：棕黃色至棕紅色澄明液體；規(guī)格：每支10 mL；包裝：玻璃安瓿包裝，每盒5支。實驗用血清內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、NF-κB試劑盒：上海拜沃生物科技公司提供；NF-κB p65免疫組化抗原：BIOSS公司生產(chǎn)；以上試劑置于4 ℃冰箱保存。碘、75%酒精棉球、4%無菌水合氯醛、生理鹽水由廣東省中醫(yī)院提供。

1.3 動物分組與模型 將42只SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為假手術組(Sham，n=6)、模型組(CLP，n=18)、中藥組(XBJ，n=18)，CLP組、XBJ組均在24 h、48 h兩個時間點取樣。參照Rittirsch等[5]描述方法，復制CLP膿毒癥模型，其優(yōu)點是該模型較其他方法更符合臨床膿毒癥病人發(fā)病過程。大鼠稱重后標記，假手術組打開腹腔，拉出盲腸后輕輕翻動盲腸，再還納腹腔后縫合腹腔。術后以生理鹽水灌胃，以后每12 h同上以生理鹽水灌胃一次。模型組及中藥組皆使用盲腸結扎穿刺法造模，模型組造模后10 min腹腔注射生理鹽水10 mL/kg；中藥組造模后10 min腹腔注射血必凈注射液(濃度1 mg/mL，10 mg/kg)，每12 h給藥。CLP方法如下：以水合氯醛(0.3 mL/100 g)麻醉后，于腹前正中作長約2 cm切口，游離腸系膜和盲腸，以30號絲線環(huán)形結扎盲腸根部，結扎完畢應仔細檢查，保持腸道通路正常。在與腸系膜相對的盲腸腸壁漿膜面用18號針頭穿刺2處。針孔之間相距約1 cm。輕輕擠壓腸管使糞便自穿刺點溢出，還納腸管，逐層縫合關腹。假手術組6只大鼠統(tǒng)一于24 h活殺取標本，CLP組及XBJ組分別于24 h、48 h觀察死亡率及活殺取標本。實驗過程中動物處置方法符合動物倫理學標準。

1.4 觀察項目和檢驗指標 在常溫下用DT-1TB電子體溫計行大鼠肛管內(nèi)測定肛溫及記錄，通過BIOPAC SYSTEM16道生理系統(tǒng)記錄儀記錄大鼠的心電圖、呼吸波并計算次數(shù)。肉眼觀察大鼠糞便次數(shù)及性狀，大鼠死亡率等情況。動物麻醉開腹活殺后立即取心、肺及肝臟組織標本行蘇木精伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察臟器組織學改變。Vevo 2100超高分辨率小動物彩色多普勒監(jiān)測各時點大鼠左室射血分數(shù)(LVEF)、縮短分數(shù)(FS)、左室舒張末期內(nèi)徑(LVIDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVISD)、室間隔厚度(IVS)等動態(tài)變化規(guī)律。經(jīng)腹主動脈采血2 mL，分別用臺式離心機3 000 r/min離心15 min后，取上清液-80 ℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清ET-1、vWF、eNOS、NF-κB濃度；免疫組化組織染色法檢測大鼠心臟組織中的NF-κB p65表達活性，著色強度按未著色、淡黃、粽黃及黃褐色分為(-)、(+)、(++)、(+++)。陽性比率：隨機觀察5個中倍視野(10×20)，計算呈黃色的陽性細胞占細胞數(shù)的比例。具體步驟按試劑盒說明進行。

2 結 果

2.1 3組大鼠心功能比較 造模24 h后，與Sham組比較，CLP組大鼠明顯上升，LVEF及IVS活動度下降，LVISD及LVIDD上升，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；XBJ組與Sham組比較心率上升，LVEF下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CLP組給予生理鹽水腹腔注射，48 h后HR較24 h下降，差異有統(tǒng)計學意義，提示炎癥反應減輕及液體復蘇可有效降低心率。XBJ組腹腔注射XBJ后，24 h及48 h與CLP組比較心率下降、LVISD減少、LVEF及IVS活動度升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示XBJ可有效改善CLP組大鼠心臟心肌活動從而改善心功能。詳見表1、圖1。

Shan組 CLP組 XBJ組

組別時間nHR(次/min)LVEF(%)LVIDD(mm)LVISD(mm)IVS(mm)CLP組24h6486.3±16.43)53.3±2.23)7.2±0.13)5.1±0.13)0.65±0.043)48h6460.5±14.31)55.6±4.67.1±0.14.9±0.40.68±0.08XBJ組24h6409.7±13.32)3)60.8±3.02)3)7.0±0.34.3±0.52)0.90±0.132)48h8419.6±9.42) 64.2±2.92)7.0±0.24.1±0.22)0.93±0.092)Sham組24h6330.7±15.4 72.6±2.86.9±0.23.8±0.21.02±0.07 與同組治療前比較,1)P<0.05;與CLP組同時點比較,2)P<0.05;與Sham組同時點比較,3)P<0.05。

2.2 3組大鼠不同時點內(nèi)皮功能標志物比較 造模后24 h，CLP組及XBJ組ET-1及vWF較Sham組升高，eNOS較Sham組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示CLP大鼠存在內(nèi)皮功能損傷；48 h與24 h比較ET-1、vWF已有較明顯的降低趨勢，eNOS有升高趨勢，提示內(nèi)皮功能改變發(fā)生在膿毒癥早期，中后期逐步抑制。XBJ組24 hET-1、vWF水平低于CLP組，eNOS高于CLP組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；48 h ET-1低于CLP組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示XBJ對CLP大鼠內(nèi)皮功能有一定改善作用。詳見表2。

組別時間nET1(pg/mL)vWF(pg/mL)eNOS(U/L)CLP組24h691.1±8.03)2548.2±170.63)18.1±1.73)48h680.9±10.32239.7±330.7 20.4±1.21)XBJ組24h6 71.7±6.52)3)1981.2±198.02)3) 21.8±3.12)3)48h867.4±7.82)1969.1±267.9 22.2±2.3Sham組24h656.0±3.1 1607.2±70.7 29.1±1.7 與同組治療前比較,1)P<0.05;與CLP組同時點比較,2)P<0.05;與Sham組同時點比較,3)P<0.05。

2.3 3組大鼠不同時點血清NF-κB水平比較 造模后24 h，CLP組及XBJ組大鼠血清NF-κB水平較Sham組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示CLP大鼠循環(huán)中NF-κB被激活，表達升高；48 h出現(xiàn)下降，提示其激活多在膿毒癥早期出現(xiàn)，中晚期水平會有下降趨勢；XBJ組24 h血清NF-κB水平低于CLP組，提示血必凈能在一定程度上降低NF-κB水平。詳見表3。

表3 3組大鼠血清NF-κB水平比較(±s) pg/mL

2.4 心肌組織病理改變 光鏡：Sham組心肌未見明顯組織病理學改變，心肌橫紋清晰，未見水腫變性、萎縮；CLP組可見肌束漿較多炎細胞浸潤，炎細胞呈單核及中性粒細胞改變，小血管瘀血、部分心肌空泡變性；XBJ組可見肌束漿少量炎細胞浸潤，為單核及中性粒細胞。詳見圖2。

圖2 光鏡下心肌病理組織表現(xiàn)

2.5 3組大鼠心臟組織NF-κB p65陽性細胞數(shù)比較 Sham組偶見NF-κB表達陽性細胞，細胞質(zhì)淺黃色且陽性率較低，顯著低于CLP組。CLP組可見大量陽性細胞，多數(shù)為棕黃色，陽性率高。XBJ組陽性細胞減少，多數(shù)為淺黃色或黃色，且陽性率較模型組明顯降低，詳見圖3。CLP組與Sham組、XBJ組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表4、表5。

表4 3組大鼠心臟組織NF-κB p65陽性細胞數(shù)比較 個

表5 3組大鼠心臟組織NF-κB p65陽性細胞數(shù)組間比較

圖3 大鼠心肌組織NF-κBp65免疫組化表達

3 討 論

人們對膿毒癥誘導心功能障礙認識起源于重要的臨床觀察。Park等[6]首先根據(jù)肺動脈導管的血流動力學數(shù)據(jù)，描述感染性休克病人可逆性心肌頓抑，在實驗中發(fā)現(xiàn)右心室擴張和右心室射血分數(shù)明顯減低，但在膿毒癥發(fā)病后7 d～14 d恢復正常。因此，心肌抑制同時影響左右心室。有學者建議SIMD可定義為膿毒癥引起的心臟左右兩側(cè)內(nèi)源性心肌收縮及舒張功能障礙[7]。本實驗得出類似結果，實驗大鼠中CLP組與Sham組相比HR增加，LVEF下降，LVIDD與LVISD增加，IVS活動幅度下降,提示大鼠經(jīng)過CLP后，心臟超聲表現(xiàn)出心臟擴大、室間隔活動減弱，舒張末期及收縮末期左心室內(nèi)徑(尤其是收縮末)增加，心臟射血分數(shù)下降，提示心臟收縮功能受到明顯抑制；而XBJ組與CLP組比較，心率和心功能改善。有研究表明，預后較好病人，左心室擴張伴隨著雙側(cè)心室射血分數(shù)下降、每搏量(SV)及心輸出量(CO)改善，這可能是膿毒癥時心臟的一個代償機制。目前對SIMD缺少臨床有效的藥物，已明確合并SIMD明顯加重膿毒癥病人病情，增加其死亡率，血必凈注射液在臨床上顯示出一定改善心功能及血流動力學的作用，并對內(nèi)皮功能有一定改善[8]。

20世紀90年代以前，細胞機制如冠狀動脈的血流量減少、循環(huán)因子及微循環(huán)的變化，認為是SIMD的主導機制。之后有證據(jù)明確評估細胞機制在膿毒癥心臟中主要作用。細胞機制包括鈣離子和心肌肌絲、β-腎上腺素能受體、一氧化氮和過氧化亞硝基通路、細胞凋亡、基質(zhì)金屬蛋白酶與線粒體功能障礙[9]。較多證據(jù)表明，內(nèi)皮功能障礙在SIMD中起重要作用[10]。微循環(huán)在膿毒癥時發(fā)生重大變化，認為是流量分布改變導致局部缺血，如冠狀動脈血流量分布不均可能是由微血管內(nèi)皮腫脹和非閉塞血管內(nèi)纖維蛋白沉積造成的。膿毒癥引起很多內(nèi)皮功能異常，并導致器官功能障礙。膿毒癥誘導的內(nèi)皮細胞活化作用是在炎性細胞因子作用時，血管內(nèi)皮細胞黏附分子表達增加，并導致有害的中性粒細胞向心肌細胞浸潤的惡性循環(huán)。膿毒癥誘導血管內(nèi)皮細胞的物理破壞，使炎性細胞和液體滲入組織間隙，同時誘導促凝狀態(tài)，導致組織微血栓形成及缺血。內(nèi)皮細胞損傷的標志物，如細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、E-選擇素、vWF和前肽及血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)，在膿毒癥時水平升高[11]。

膿毒癥誘導的內(nèi)皮功能障礙反映血管張力，eNOS表達及活性的下降，導致血管舒張障礙。因此血管內(nèi)皮功能障礙的標志物與膿毒癥死亡率和心臟收縮和舒張功能障礙存在相關。以往研究表明血必凈能明顯緩解血管內(nèi)皮功能障礙，有研究指出，血必凈注射液能明顯改善膿毒癥病人病情，降低嚴重膿毒癥病人28 d病死率，血必凈組血清ICAM-1和細胞黏附分子-1(VCAM-1)水平顯著降低，而血清一氧化氮(NO)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、血栓調(diào)節(jié)蛋白、組織型纖維酶原激活物(TPA)濃度、vWF和組織纖維溶酶原激活(PAI-1)均顯著高于對照組[12]。大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)后，血必凈能提高主動脈內(nèi)皮細胞的血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(EPCR)和蛋白酶激活受體(PAR1)mRNA和蛋白的表達，這可能與保護發(fā)生凋亡的內(nèi)皮細胞相關[13]。本實驗結果顯示ET-1、vWF水平明顯降低，而內(nèi)皮型一氧化氮合酶在XBJ組高于CLP組。說明血必凈能可能通過減輕血管內(nèi)皮功能障礙緩解CLP大鼠模型的SIMD。

NF-κB是細胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子，在多種基因轉(zhuǎn)錄過程中參與調(diào)控。它一般以二聚體形式存在于細胞質(zhì)內(nèi)，其中最重要的是P50/P65二聚體。當細胞受到細胞因子、LPS、NO等多種因素刺激后，由信號誘導激活核因子抑制蛋白(IκB)激酶，引起IκBα迅速磷酸化，使NF-κB通過核孔復合體上的受體快速進入細胞核內(nèi)，結合于靶基因的啟動子上，誘導靶基因mRNA的合成。NF-κB誘導表達的靶基因中多種物質(zhì)是炎性反應、內(nèi)皮激活的關鍵介質(zhì)，在嚴重膿毒癥/膿毒性休克的發(fā)生、發(fā)展中作用重要。LPS和細胞因子(如TNF-α)下調(diào)eNOS的表達，認為是血管內(nèi)皮依賴性舒張功能受損的一個重要分子機制。動物實驗研究表明，抑制NF-κB活化可抑制多種炎性基因的表達，逆轉(zhuǎn)全身性低血壓，糾正心肌功能障礙并防止內(nèi)皮依賴性血管舒張功能受損[14]。有研究表明，選擇性阻斷內(nèi)皮細胞內(nèi)NF-κB通路導致膿毒癥休克和感染性血管功能障礙的分子級聯(lián)反應[14]。NF-κB活化在膿毒癥休克及感染性血管功能障礙中的致病作用重要?；贜F-κB通路在膿毒癥中作用機制研究較多，許多涉及失調(diào)炎癥反應復雜網(wǎng)絡的基因，包括促炎和抗炎方面，在轉(zhuǎn)錄水平均被NF-κB調(diào)節(jié)。本研究顯示CLP大鼠血清NF-κB水平上升，同時心臟NF-κB表達增加，證明NF-κB在膿毒癥時出現(xiàn)激活，且其升高趨勢與內(nèi)皮標志物升高趨勢相一致，提示NF-κB可能參與膿毒癥內(nèi)皮功能損傷過程，且實驗發(fā)現(xiàn)CLP大鼠NF-κB升高時伴隨心功能障礙，提示NF-κB信號通路在膿毒癥心功能障礙中可能起重要作用，并可能通過內(nèi)皮損傷起作用。

雖已證明心肌纖維損傷、自主神經(jīng)功能紊亂及細胞凋亡在SIMD中發(fā)揮作用，但潛在機制尚不清楚。這些因素皆與NF-κB關聯(lián)，在膿毒癥相關信號通路中起主要作用。動物實驗表明，膿毒癥時LPS誘導的TNF-α在心肌細胞中表達，NF-κB被激活，通過去甲腎上腺素激活α1受體抑制LPS誘導的心肌細胞TNF-α表達并改善心功能，此過程通過促進心肌細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)磷酸化和抑制NF-κB的激活[15]。其他研究表明，唐松草坡芬堿通過增加“良性”正磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳動物西羅莫司蛋白(PI3K/Akt/mTOR)及降低“惡性”p38和NF-κB通路避免SIMD，這與降低TNF-α水平和caspase-3依賴的細胞凋亡相關[16]。本實驗免疫組化分析顯示CLP大鼠心肌NF-κB表達增高，并伴隨心臟功能減退及內(nèi)皮功能受損。LPS小鼠實驗表明三七皂苷受體1保護膿毒癥休克時的心臟功能。這可能通過激活雌激素受體α(ERα)和PI3K/Akt信號，產(chǎn)生NF-κB阻滯劑并減輕心肌促炎及凋亡應激狀態(tài)。

血必凈注射液是一種植物源性中藥，應用于治療炎癥相關疾病，如敗血癥和重癥肺炎[17]。一些研究顯示血必清注射液具有穩(wěn)定血管內(nèi)皮細胞，改善嚴重的炎癥反應和凝血功能障礙[18]。LPS可刺激大鼠腎臟微血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生大量活性氧，通過激活NF-κB導致細胞形態(tài)損傷并和影響其功能。血必凈注射液能減少ROS的表達和NF-κB的激活，從而保護內(nèi)皮細胞。動物實驗發(fā)現(xiàn)[19]，在血必凈對百草枯致急性肺損傷保護作用，抑制p38 MAPK和NF-κB p65的表達至關重要。本研究證明血必凈注射液降低CLP大鼠心肌組織和血漿的NF-κB表達，能有效減輕心肌損傷及心臟功能受損。同時，在XBJ組大鼠內(nèi)皮細胞標志物表達低于CLP組，表明CLP大鼠存在明顯的內(nèi)皮細胞損傷。由于NF-κB在許多免疫相關細胞過程重要作用，血必凈注射液的心臟保護作用可能是調(diào)整NF-κB的表達。

綜上所述，血必凈注射液可改善CLP大鼠心臟功能及內(nèi)皮功能，心臟功能和血管內(nèi)皮功能之間存在相關性，內(nèi)皮功能障礙可能是SIMD的重要機制。血必凈注射液可減少內(nèi)皮細胞標記物的濃度，其機制可能通過NF-κB通路干預，降低NF-κB的表達，從而增加eNOS的表達，減輕血管內(nèi)皮損傷。

[1] Martin GS，Mannino DM， Eaton S，et al.The epidemiology of sepsis in the United States from 1979 through 2000[J].The New England Journal of Medicine，2003，348(16)：1546-1554.

[2] Lee WL，Slutsky AS.Sepsis and endothelial permeability[J].The New England Journal of Medicine，2010，363(7)：689-691.

[3] Rabuel C，Mebazaa A.Septic shock： a heart story since the 1960s[J].Intensive Care Medicine，2006，32(6)：799-807.

[4] Ding J，Song D，Ye X，et al.A pivotal role of endothelial-specific NF-kappa B signaling in the pathogenesis of septic shock and septic vascular dysfunction[J].Journal of Immunology，2009，183(6)：4031-4038.

[5] Rittirsch D，Huber-Lang MS，F(xiàn)lierl MA，et al.Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture[J].Nat Protoc，2009，4(1)：31-36.

[6] Parker MM， Shelhamer JH， Bacharach SL，et al.Profound but reversible myocardial depression in patients with septic shock[J].Annals of Internal Medicine，1984，100(4)：483-490.

[7] Antonucci E，F(xiàn)iaccadori E，Donadello K，et al.Myocardial depression in sepsis： from pathogenesis to clinical manifestations and treatment[J].J Crit Care，2014，29：500-511.

[8] 何健卓，譚展鵬，張敏州，等.血必凈注射液對嚴重膿毒癥患者血流動力學及內(nèi)皮功能影響的前瞻性研究[J].中華危重病急救醫(yī)學，2015，27(2)：127-132.

[9] Romero-Bermejo FJ， Ruiz-Bailen M， Gil-Cebrian J，et al.Sepsis-induced cardiomyopathy[J].Current Cardiology Reviews，2011，7(3)：163-183.

[10] Chagnon F， Bentourkia M， Lecomte R，et al.Endotoxin-induced heart dysfunction in rats： assessment of myocardial perfusion and permeability and the role of fluid resuscitation[J].Critical Care Medicine，2006，34(1)：127-133.

[11] Schuetz P，Jones AE，Aird WC，et al.Endothelial cell activation in emergency department patients with sepsis-related and non-sepsis-related hypotension[J].Shock，2011，36(2)：104-108.

[12] 李春盛，金銘，武軍元，等.血必凈對嚴重膿毒癥患者血管內(nèi)皮細胞相關促炎因子和凝血因子的影響[J].中華醫(yī)學雜志，2009，89(39)：2744-2747.

[13] 李銀平，喬佑杰，武子霞，等.血必凈注射液對膿毒癥大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白及內(nèi)皮蛋白C受體基因表達的影響[J].中華危重病急救醫(yī)學，2007，19(6)：365-368.

[14] Liu SF，Malik AB.NF-kappa B activation as a pathological mechanism of septic shock and inflammation[J].American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology，2006，290(4)：L622-L645.

[15] Yu X，Jia B，Wang F，et al.Alpha(1) adrenoceptor activation by norepinephrine inhibits LPS-induced cardiomyocyte TNF-alpha production via modulating ERK1/2 and NF-kappa B pathway[J].Journal of Cellular and Molecular Medicine，2014，18(2)：263-273.

[16] Lee AS， Chen WP， Kuo YL，et al.Thaliporphine preserves cardiac function of endotoxemic rabbits by both directly and indirectly attenuating NF-kappa B signaling pathway[J].PloS One，2012，7(6)： e39174.

[17] He XD，Wang Y，Wu Q，et al.Xuebijing protects rats from sepsis challenged with acinetobacter baumannii by promoting annexin A1 expression and inhibiting proinflammatory cytokines secretion[J].Evidence-based Complementary and Alternative Medicine：eCAM，2013，2013：804-940.

[18] 李鑫，馬曉春.血必凈注射液對腎臟微血管內(nèi)皮細胞發(fā)揮保護作用的機制探討[J].中國中西醫(yī)結合急救雜志，2012，19(2)：94-97.

[19] Liu MW，Su MX，Zhang W，et al.Protective effect of Xuebijing injection on paraquat-induced pulmonary injury via down-regulating the expression of p38 MAPK in rats[J].BMC，2014，14(1)：498.

(本文編輯薛妮)

The Effects of Xuebijing Injection on Cardiac Function and Endothelial Function in Rats with Sepsis

He Jianzhuo，Yin Xin，Ma Shiyu，Guo Liheng，Zhang Minzhou

Comesponding Author：Zhang MinzhouGuangdong Provincial Hospital of Chinese Medicine，Guangzhou 510120，Guangdong，China

Objective To observe the protective effects of Xuebijing injection (XBJ) on the myocardium and serum nuclear factor-κB (NF-κB) expressions， endothelin-1 (ET-1)， von Willebrand factor (vWF) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in rats with sepsis，and to investigate the protection of cardiac dysfunction. Methods Forty-two male Sprage-Dawely (SD) rats were divided randomLy into sham group (n=6)，CLP group (n=18) and XBJ group (n=18). The animal models of sepsis were induced by cecal ligation and puncture (CLP) and XBJ was given by intraperitoneal injection. Heart rate， cardiac function such as left ventricular ejection fraction (LVEF)， left ventricular end-diastolic diameter (LVESD)， left ventricular end diastolic diameter (LVEDD)， intact ventricular septum (IVS) activity were observed. The histopathological changes were observed by Hematoxylin-Eosin (HE) staining. The levels of serum ET-1， vWF， eNOS and NF-κB were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of NF-κB in cardiac tissue was detected by immunohistochemical staining. Results After 24 hours of modeling， compared with sham group， the heart rate，LVESD and LVEDD increased while IVS activities degree decreased in CLP group (P<0.05).The heart rate increased while LVEF decreased in XBJ group (P<0.05). Compared with 24 hours，the heart rate decreased in 48 hours in CLP group (P<0.05). Compared with CLP group， the heart rate，LVESD decreased while LVEF and IVS activity increased in XBJ group in 24 hours and 48 hours (P<0.05). After 24 hours of modeling， compared with sham group，the levels of serum ET-1 and vWF increased while eNOS level decreased in CLP group(P<0.05).The levels of serum ET-1 and vWF in XBJ group were lower than that in CLP group(P<0.05) while eNOS level in XBJ group was higher than that in CLP group(P<0.05) .After 48 hours of modeling， ET-1 level in XBJ group was lower than that in CLP group(P<0.05) . After 24 hours of modeling， compared with sham group， serum NF-κB level increased in CLP and XBJ group (P<0.05) ，which was lower in XBJ group than that in CLP group(P<0.05) . The rate of NF-κB positive cells in CLP group was higher than that in sham group(P<0.05)，whilewas lower in XBJ group than that in CLP group (P<0.05) . Conclusion XBJ could improve cardiac and endothelial function in CLP rats，which might be through the intervention of NF-κB pathway，decreasing the expression of NF-κB，thereby increasing the expression of eNOS，reducing the endothelial damage.

sepsis；Xuebijing injection；rats；myocardium；nuclear factor-κB；endothelium function

2014年廣東省中醫(yī)藥管理局建設中醫(yī)藥強省科研課題(No.20141125)

廣東省中醫(yī)院(廣州 510120)

張敏州，E-mail：minzhouzhang@aliyun.com

信息：何健卓，尹鑫，馬世玉，等.血必凈注射液對膿毒癥大鼠心功能及內(nèi)皮功能的影響[J].中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2017，15(14)：1710-1715.

R631 R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.14.009

1672-1349(2017)14-1710-06

2017-03-28)