• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    福建漳浦凡納濱對(duì)蝦海水養(yǎng)殖中后期水體細(xì)菌群落多樣性分析

    2017-08-10 12:17:13胡東王麗萍趙苒邵宗澤
    海洋學(xué)報(bào) 2017年8期
    關(guān)鍵詞:凡納濱類群對(duì)蝦

    胡東,王麗萍,趙苒,邵宗澤*

    (1.廈門大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院,福建 廈門 361102;2.國家海洋局第三海洋研究所 國家海洋局海洋生物遺傳資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 廈門 361005)

    ?

    福建漳浦凡納濱對(duì)蝦海水養(yǎng)殖中后期水體細(xì)菌群落多樣性分析

    胡東1,2,王麗萍2,趙苒1,邵宗澤2*

    (1.廈門大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院,福建 廈門 361102;2.國家海洋局第三海洋研究所 國家海洋局海洋生物遺傳資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 廈門 361005)

    凡納濱對(duì)蝦;微生物群落多樣性;16S rRNA基因高通量測序;水質(zhì)因子

    1 引言

    凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)因其具有生長快、抗病能力強(qiáng)、養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益顯著,成為當(dāng)今世界上水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大優(yōu)良對(duì)蝦品種之一[1],其2011年產(chǎn)量占全球?qū)ξr產(chǎn)量的76%[2]。凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖要經(jīng)歷幼蟲到成體5個(gè)生長階段[3],大約3~4個(gè)月的生長周期才可以上市。養(yǎng)殖動(dòng)物腸道及養(yǎng)殖水體中微生物的種類和數(shù)量[4—5],水質(zhì)因子[6](溶氧、溫度、pH、化學(xué)需氧量、氮等),飼料投喂,藻類生長狀況等是對(duì)蝦能否健康成長的關(guān)鍵因素,了解養(yǎng)殖水體中微生物群落結(jié)構(gòu)、多樣性變化及微生物菌群與水體環(huán)境因子的相互作用對(duì)改善養(yǎng)殖水體、預(yù)防對(duì)蝦疾病發(fā)生至關(guān)重要。

    第二代測序技術(shù)為我們研究環(huán)境中微生物多樣性提供了高效的方法,結(jié)合微生物獨(dú)有的16S rRNA保守基因,這種方法被廣泛應(yīng)用到環(huán)境微生物多樣性分析[5, 7—9]。16S rRNA高通量測序技術(shù)已用于淡水環(huán)境凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖微生物多樣性分析,Zhang等發(fā)現(xiàn)在凡納濱對(duì)蝦淡水養(yǎng)殖池中,變形菌門、藍(lán)細(xì)菌、放線菌門和擬桿菌門是水體微生物的主要類群;變形菌門、藍(lán)細(xì)菌、厚壁菌門、酸酐菌門、綠灣菌門、擬桿菌門是沉積物環(huán)境的主要類群[7]。但鮮有對(duì)蝦海水養(yǎng)殖環(huán)境微生物菌群的相關(guān)研究報(bào)道,因此,我們的研究可以彌補(bǔ)這方面的空白,豐富人們對(duì)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境微生物菌群多樣性的認(rèn)識(shí)。

    本研究利用Illumina高通量測序技術(shù)分析了凡納濱對(duì)蝦高位池養(yǎng)殖水體細(xì)菌多樣性的動(dòng)態(tài)變化過程,并分析了菌群與水質(zhì)參數(shù)間的相互關(guān)系。研究結(jié)果將有助于了解對(duì)蝦不同養(yǎng)殖時(shí)期水體菌群變化規(guī)律,認(rèn)識(shí)影響對(duì)蝦養(yǎng)殖水體菌群變化的環(huán)境因子,以期通過調(diào)控水質(zhì)因子,達(dá)到改善養(yǎng)殖環(huán)境微生物的群落結(jié)構(gòu)的目的,從而促進(jìn)對(duì)蝦健康養(yǎng)殖。

    2 材料和方法

    2.1 樣品采集

    采樣點(diǎn)為福建漳浦縣凡納濱對(duì)蝦海水養(yǎng)殖場高位池[5號(hào)池,0.9畝(1畝=666.67 m2),40萬蝦苗] (24°01′43″ N,117°50′39″E)。采樣時(shí)間為2015年12月24日至2016年3月24日,即對(duì)蝦蝦苗度過“早期死亡綜合癥”到對(duì)蝦收成,實(shí)驗(yàn)周期為3個(gè)月。在離岸2 m和蝦池中心設(shè)置2個(gè)采樣點(diǎn)(S1和S2,第131天只有S1點(diǎn)),使用經(jīng)過高溫濕熱滅菌處理的有機(jī)玻璃采水器,采集上、中、下3層水樣共3 L于無菌采樣瓶中,共采集了7個(gè)時(shí)間點(diǎn)(養(yǎng)殖第40、59、67、77、95、115、131天 )的13個(gè)水體樣品。采集的水樣命名為P5D&S#,P5表示5號(hào)池,D&表示采樣時(shí)間編號(hào),S#表示采樣點(diǎn)編號(hào)(下同)。水樣立即置于放有冰袋的樣品箱內(nèi)保存,并運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室用0.22 μm濾膜過濾,濾膜于-80℃冰箱中保存。

    2.2 水質(zhì)參數(shù)檢測

    表1 主要水質(zhì)指標(biāo)及檢測方法

    2.3 基因組DNA提取

    利用MOBIO水樣基因組提取試劑盒(14900-100-NF,PowerWater? DNA Isolation Kit)進(jìn)行基因組DNA提取。提取的基因組DNA質(zhì)量和濃度分別用1%瓊脂糖凝膠電泳和nanodrop2000超微量分光光度計(jì)檢測,提取的DNA在-80℃冰箱中保存。

    2.4 16S rRNA基因高通量測序

    提取的基因組DNA送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司,采用引物338F(5′-3′,ACTCCTACGGGAGGCAGCAG)和806R(5′-3′,GGACTACHVGGGTWTCTAAT)[10]對(duì)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,引物兩端帶有特異的barcode序列,以識(shí)別不同樣本的16S rRNA基因擴(kuò)增產(chǎn)物;隨后采用Miseq PE300測序平臺(tái)對(duì)PCR產(chǎn)物測序。

    2.5 微生物多樣性分析

    對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行拼接、過濾,得到優(yōu)化序列。然后基于有效數(shù)據(jù)將相似性達(dá)97%的序列進(jìn)行OTU(Operational Taxonomic Units)聚類。采用RDP classifier貝葉斯算法[11]對(duì)97%相似水平的OTU代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析,并在各水平統(tǒng)計(jì)每個(gè)樣品的群落組成?;贠TU聚類分析結(jié)果,對(duì)OTU進(jìn)行多種多樣性指數(shù)分析,如Alpha多樣性指數(shù)[12];基于分類學(xué)信息,進(jìn)行群落結(jié)構(gòu)的統(tǒng)計(jì)分析[13];基于系統(tǒng)發(fā)育,進(jìn)行unifrac等分析[14];并結(jié)合水質(zhì)因子進(jìn)行RDA關(guān)聯(lián)分析。在上述分析的基礎(chǔ)上,進(jìn)行一系列群落結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)發(fā)育等深入的統(tǒng)計(jì)學(xué)和可視化分析。

    3 結(jié)果

    3.1 養(yǎng)殖池水體的水質(zhì)參數(shù)

    為了探討水質(zhì)與水體環(huán)境微生物菌群多樣性的關(guān)系,對(duì)采集水樣進(jìn)行水質(zhì)分析(表2)。在養(yǎng)殖中后期,溶氧基本維持在飽和狀態(tài)(6.0~8.0 mg/L);溫度變化范圍為 20~24.6℃,pH維持在弱堿性(7.2~7.5),變化較小;COD波動(dòng)較大,變化范圍為6.9~12.0 mg/L;硝酸鹽氮值變化范圍為0.96~1.49 mg/L,亞硝酸鹽氮值變化范圍為0.02~0.35 mg/L,氨態(tài)氮值變化較大,波動(dòng)范圍為0.11~4.96 mg/L,其中硝態(tài)氮的濃度變化與以往研究明顯不同。本研究發(fā)現(xiàn),硝酸鹽濃度在養(yǎng)殖過程中總體上呈下降趨勢,而以往的報(bào)道是養(yǎng)殖后期濃度升高[15—16]。

    表2 養(yǎng)殖池水質(zhì)參數(shù)的7次調(diào)查結(jié)果

    3.2 Illumina 序列多樣性評(píng)價(jià)

    采用Illumina miseq測序平臺(tái)對(duì)采集的7個(gè)時(shí)間點(diǎn)13個(gè)水樣進(jìn)行16S rRNA基因高通量測定,13個(gè)樣品中共得到823 363條序列,序列長度在281~520 bp之間,每個(gè)樣品的序列數(shù)目在55 449~73 485條之間,抽平后得到619 775條高質(zhì)量序列,每個(gè)樣品的序列數(shù)目為47 675條。稀釋曲線分析(圖1a)顯示,隨著測序數(shù)量的增加,稀釋曲線逐漸趨于平緩,表明該測序量已經(jīng)基本能夠反映該實(shí)驗(yàn)中細(xì)菌群落多樣性。按照97%相似度對(duì)OTU進(jìn)行劃分,其覆蓋度均大于 0.99,每個(gè)樣品得到的OTU數(shù)目在294~412之間。通過Shannon-Wiener多樣性指數(shù)對(duì)養(yǎng)殖水體細(xì)菌群落多樣性進(jìn)行評(píng)估,如圖1b所示,第40天樣品微生物多樣性最高,而第67天樣品微生物多樣性最低,其余時(shí)間點(diǎn)采集的樣品微生物多樣性大致相似。

    3.3 主成分和聚類分析

    主成分分析(Pcoa)結(jié)果顯示(圖2a),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集的兩個(gè)重復(fù)樣本都能很好地聚在一起,說明相同時(shí)間采集的重復(fù)樣本細(xì)菌群落多樣性相似性較高。Unifrac聚類分析和科水平的細(xì)菌群落Heatmap分析(圖2b,2c)也是如此。此外,其他水平的細(xì)菌群落Heatmap分析結(jié)果與科水平的細(xì)菌群落Heatmap分析結(jié)果基本一致,相同時(shí)間點(diǎn)采集的兩個(gè)重復(fù)樣本都能很好的聚在一起,不同時(shí)間差異較大。但是,不同時(shí)間段之間仍有一定的相似性,第40、77、95與131天之間的細(xì)菌組成相似,而第67天與115天細(xì)菌組成較為相似。

    圖1 各樣品的細(xì)菌16S rRNA基因的α多樣性分析Fig.1 Diversity analysis of 16S rRNA genes in different samplesa.不同樣品的稀釋曲線;b.不同樣品的香農(nóng)威納指數(shù)圖a.Rarefaction curve of different samples; b.Shannon-Wiener rarefaction curve plot of different samples

    圖2 不同樣品細(xì)菌群落相似性分析Fig.2 Similarity analysis of microbial populations in different samplesa. 細(xì)菌群落的Pcoa分析; b. 科水平的細(xì)菌群落heatmap; c. 基于Unifrac的聚類分析a. Pcoa analysis; b. heatmap of bacterial populations at the family level; c. cluster analysis based Unifrac

    圖3 門水平細(xì)菌群落組成Fig.3 Bacterial community composition at the phylm level

    圖4 綱水平上細(xì)菌群落變化Fig.4 Changes of bacterial community in all samples at the class level

    圖5 水質(zhì)參數(shù)與細(xì)菌群落之間的關(guān)系Fig.5 The correlation between water quality parameters and bacterial community compositiona.細(xì)菌群落組成與水質(zhì)的RDA分析; b.科水平上細(xì)菌群落與水質(zhì)相關(guān)性熱圖a. Redundancy analysis (RDA) of the bacterial community composition with water quality parameters (red arrows); b. heatmap showing the correlation between bacterial community and the water quality parameters at the family level

    3.4 細(xì)菌多樣性組成

    在本研究采集的7個(gè)時(shí)間點(diǎn)13個(gè)樣品中,共檢測到19個(gè)門、35個(gè)綱、80個(gè)目、135個(gè)科、254個(gè)屬的細(xì)菌。另外,未能鑒定的序列數(shù)總共為5 337條,這表明樣本中存在著大量未知的類群。根據(jù)樣品中各微生物所測定的reads數(shù),把每個(gè)樣品中reads數(shù)大于總reads數(shù)10%的門定義為優(yōu)勢門。在不同養(yǎng)殖時(shí)期水樣檢測中,藍(lán)細(xì)菌(Cyanobacteria)、變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、綠灣菌門(Chloroflexi)、疣微菌門(Verrucomicrobia)、放線菌門(Actinobacteria)、衣原體(Chlamydiae)等7個(gè)門是主要的優(yōu)勢類群(圖3)。

    根據(jù)細(xì)菌群落組成圖可知,養(yǎng)殖水體中的絕大多數(shù)序列可以歸類于變形菌門和擬桿菌門(圖3),并且這2個(gè)門在采樣期間一直是主要類群。其中,變形菌門在7個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)所占的比例分別為36.2%、13.7%、22.7%、44.6%、38.0%、29.6%、48.8%,主要包括α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)和γ-變形菌綱(Gmmaproteobacteria)(圖4),α-變形菌綱在第59、115天樣品豐度較低(分別為8.5%和9.3%),而在其他采樣時(shí)間點(diǎn)豐度普遍較高(豐度變化為15.1%~38.1%),γ-變形菌綱則在第59、67天豐度較低(比例分別為3.2%和6.1%),其他采樣時(shí)間點(diǎn)豐度普遍偏高(豐度變化為9.3%~20.1%);擬桿菌門在7個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)所占的比例分別為56.3%、58.8%、10.7%、40.0%、35.4%、19.2%、37.9%,主要包括黃桿菌綱(Flavobacteriia)和Sphingobacteriia (圖4),黃桿菌綱在第67、115天樣品豐度較低(分別為6.3%和4.7%),而在其他采樣時(shí)間點(diǎn)豐度普遍偏高(豐度變化為23.1%~52.6%),Sphingobacteriia在養(yǎng)殖后期豐度較高(各時(shí)間點(diǎn)所占比例為7.0%、5.4%、3.2%、2.6%、6.7%、12.2%、12.4%)。藍(lán)細(xì)菌為養(yǎng)殖過程中處于次優(yōu)勢的一個(gè)類群,在7個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)波動(dòng)較大,所占的比例分別為0.7%、3.4%、63.9%、3.6%、16.8%、39.7%、2.5%(圖3)。

    整個(gè)采樣期間,黃桿菌科(Flavobacteriaceae)、紅桿菌科(Rhodobacteraceae)、Cryomorphaceae、Cyanobacteria_norank、腐螺旋菌科(Saprospiraceae)、紅菌科(Rhodobiaceae)等優(yōu)勢類群(圖2b),廣泛存在于各個(gè)養(yǎng)殖時(shí)期,并且基本都是優(yōu)勢菌群。擬桿菌門的黃桿菌科在整個(gè)采樣階段占優(yōu)勢地位,最高比例可達(dá)48.0%,但第67、115天所占比例僅為2.5%、1.5%。α-變形菌綱的紅桿菌科在整個(gè)采樣期間也都被檢測到,從第40天占整個(gè)種群的13.4%降低到第59、67天的3.1%和5.1%,在第77天又成為優(yōu)勢種群(19.2%),隨后在第95、115、131天分別降低到9.4%、4.8%和10.7%;相似的現(xiàn)象在擬桿菌門的 Cryomorphaceae上被體現(xiàn),其在整個(gè)種群中所占比例由第40天的13.8%減少到第59、67天的3.3%和3.2%,在第77天成為優(yōu)勢種群(13.6%),隨后在第95、115、131天分別降低到5.8%、2.7%和5.3%。屬于擬桿菌門的腐螺旋菌科在整個(gè)采樣期間也是優(yōu)勢類群,其在整個(gè)菌群中所占比例由第40天到第95天的低比例(所占比例分別為5.0%、2.6%、2.7%、1.7%、6.4%)升高到第115、131天的10.4%和12.0%;相似的現(xiàn)象也在α-變形菌綱的紅菌科上得到體現(xiàn),其在整個(gè)種群中所占比例由采樣前期低比例(第40天、59天所占比例分別為0%和2.5%)升高到第131天的23.1%。Cyanobacteria_norank表現(xiàn)出與門水平藍(lán)細(xì)菌相同的變化,所占比例變化為0.7%~63.8%。

    3.5 細(xì)菌群落與水質(zhì)參數(shù)關(guān)系

    4 討論

    本研究通過Illumina高通量測序技術(shù)初步揭示了凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖中后期養(yǎng)殖水體中細(xì)菌群落多樣性變化及其與水質(zhì)之間的相互關(guān)系。Pcoa分析和聚類分析表明,養(yǎng)殖中期第40天和第59天細(xì)菌群落組成相似,第77、95天與養(yǎng)殖后期第131天細(xì)菌群落組成更相似,而第67天和第115天樣品與其他時(shí)間點(diǎn)的樣品差異較大。此外,同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集的兩個(gè)樣品重復(fù)性較好,說明數(shù)據(jù)較為可靠。從7個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集的13個(gè)水體樣品中共獲得619 775條高質(zhì)量序列,檢測到的細(xì)菌群落歸屬于19個(gè)門、35個(gè)綱、80個(gè)目、135個(gè)科、254個(gè)屬,說明該養(yǎng)殖水體中細(xì)菌群落具有很高的多樣性。注釋結(jié)果表明,這些序列主要屬于變形菌門、擬桿菌門和藍(lán)細(xì)菌等3個(gè)門類。此外,未能鑒定的序列數(shù)總共為5 337條,占總序列數(shù)比例為0.86%,說明凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境中還存在著大量未描述過的類群。

    在本研究中,變形菌門、擬桿菌門廣泛存在于凡納濱對(duì)蝦各個(gè)養(yǎng)殖時(shí)期的水體中,并且為優(yōu)勢類群。相似的結(jié)果在前人的研究中也發(fā)現(xiàn),在凡納濱對(duì)蝦淡水養(yǎng)殖系統(tǒng)中,養(yǎng)殖水體溫度高時(shí),放線菌門、unclassified bacteria、變形菌門和擬桿菌門是主要的類群;養(yǎng)殖水體溫度低時(shí),主要的優(yōu)勢類群是放線菌門、變形菌門和擬桿菌門[18]。同樣,Zhang等發(fā)現(xiàn)在凡納濱對(duì)蝦淡水養(yǎng)殖池中,變形菌門、藍(lán)細(xì)菌、放線菌門和擬桿菌門是水體微生物的主要類群[7]。Huang等研究發(fā)現(xiàn),不同生長時(shí)期凡納濱對(duì)蝦腸道的優(yōu)勢類群是變形菌門、擬桿菌門和放線菌門[5]。由此可見,變形菌門和擬桿菌門是凡納濱對(duì)蝦腸道和水體環(huán)境常見的優(yōu)勢類群。此外,在本研究中藍(lán)細(xì)菌在第67、115天樣品中占絕對(duì)優(yōu)勢,文獻(xiàn)報(bào)道光照強(qiáng)并且營養(yǎng)鹽豐富,有利于藍(lán)細(xì)菌繁殖[19],但是實(shí)驗(yàn)記錄同時(shí)期為陰雨天氣,說明其他環(huán)境參數(shù)影響著藍(lán)細(xì)菌豐度變化。

    盡管不同養(yǎng)殖時(shí)期水體微生物在門水平上組成較相似,但在綱水平和科水平上,細(xì)菌類群構(gòu)成變化較大。在綱水平上,黃桿菌綱、α-變形菌綱和γ-變形菌綱為第40天樣品的優(yōu)勢類群,第59天樣品的主要類群為黃桿菌綱和放線菌綱(Actinobacteria),而第67天樣品的優(yōu)勢類群波動(dòng)較大,轉(zhuǎn)變?yōu)镃yanobacteria_norank和α-變形菌綱。第77、95、131天樣品菌群以黃桿菌綱、α-變形菌綱、和γ-變形菌綱為主,而第115天樣品的優(yōu)勢類群為藍(lán)細(xì)菌、γ-變形菌綱和Sphingobacteriia。可以看出α-變形菌綱、γ-變形菌綱和黃桿菌綱是綱水平上的主要優(yōu)勢類群。變形細(xì)菌是所有細(xì)菌中最大和最具多樣性的一個(gè)族群,具有較強(qiáng)的適應(yīng)性,它們?cè)谒w中分布廣泛[20],其中α-和γ-變形菌綱在海水浮游細(xì)菌中尤為重要。已有的關(guān)于黃桿菌的研究表明,黃桿菌可以改善底質(zhì)環(huán)境狀況,在維持菌落方面起重要作用,其多為有益菌[20],這可能是該蝦池健康養(yǎng)殖的主要原因。在科水平上,黃桿菌科、紅桿菌科、Cryomorphaceae、Cyanobacteria_norank、腐螺旋菌科、紅菌科等類群,廣泛存在于養(yǎng)殖水體中,并且為各個(gè)養(yǎng)殖時(shí)期的優(yōu)勢或者次優(yōu)勢菌??扑缴?,黃桿菌科、紅桿菌科和Cryomorphaceae為第40天樣品的優(yōu)勢菌類群,黃桿菌科和微桿菌科(Microbacteriaceae)為第59天樣品的優(yōu)勢類群,藍(lán)細(xì)菌為第67天樣品的優(yōu)勢菌,黃桿菌科、紅桿菌科和Cryomorphaceae 為第77天樣品的優(yōu)勢類群,黃桿菌科、藍(lán)細(xì)菌和科韋爾氏科(Colwelliaceae)為第95天樣品的優(yōu)勢類群,藍(lán)細(xì)菌、腐螺旋菌科和交替單胞菌科(Alteromonadaceae)為第115天樣品的優(yōu)勢菌類群,交替單胞菌科、紅桿菌科、腐螺旋菌科和紅菌科為第131天樣品的優(yōu)勢類群。黃桿菌科在整個(gè)采樣期間是占優(yōu)勢的微生物類群,研究報(bào)道表明黃桿菌(Flavobacteriumpsychrophilum)在鱒魚(Trout)養(yǎng)殖中是一類嚴(yán)重的病原菌,可以導(dǎo)致虹鱒魚魚苗綜合癥(RTFS)和冷水病(CWT)[21];Tamlana作為一種潛在的益生菌可以產(chǎn)生瓊脂酶[22];Tenacibaculummaritimum可以導(dǎo)致魚類產(chǎn)生gliding bacterial disease和 tenacibaculosis/flexibacteriosis等疾病[23]。同樣紅細(xì)菌科在整個(gè)采樣期間是占優(yōu)勢的微生物類群,研究表明玫瑰桿菌(Roseobacter)能在大菱鲆(Scophthatmusmaximus) 仔魚的飼養(yǎng)環(huán)境中建立一個(gè)有益的微生物群落,可以抑制致病菌的生存[24],降低大菱鲆幼魚的死亡率[25]。值得注意的是,上述這些主要的優(yōu)勢類群在養(yǎng)殖的第59、67、115天表現(xiàn)出相對(duì)較低的豐度,如綱水平上α-變形菌綱在第59、115天豐度較低,γ-變形菌綱在59、67天豐度較低,黃桿菌綱在67、115天豐度較低;科水平上黃桿菌科在第67、115天豐度較低,紅桿菌科、Cryomorphaceae在第57、67、115天豐度較低。

    在整個(gè)采樣期間還檢測到黃桿菌屬(Flavobacterium),希瓦氏菌屬(Shewanella),弧菌屬(Vibrio),假單胞菌屬(Pseudomonas)和Escherichia-Shigella等水生動(dòng)物潛在的條件致病菌[7, 24, 26—27],除黃桿菌屬和弧菌屬外,其他菌屬在所有樣品中都維持低豐度(小于0.1%)。其中弧菌為對(duì)蝦常見的致病菌,已知副溶血弧菌(Vibrioparahemolyticus)、哈維氏弧菌(V.harveyi)、坎貝氏弧菌(V.campbellii)都是凡納濱對(duì)蝦主要的致病菌[28],本研究中發(fā)現(xiàn)的弧菌主要為坎貝氏弧菌。潛在致病菌低reads數(shù)表明在進(jìn)水溫度適宜的情況下,增加換水頻數(shù)不失為一種預(yù)防對(duì)蝦病害發(fā)生的有效方法。此外,本研究在對(duì)各個(gè)時(shí)期養(yǎng)殖水體微生物的多樣性分析中,同樣檢測到一定豐度的潛在益生菌,主要包括芽孢桿菌屬(Bacillus)[29]、蛭弧菌屬(Bdellovibrio)[24]、擬桿菌屬(Bacteroides)[7]、乳球菌屬(Lactococcus)[24],盡管它們的豐度低,但這些益生菌會(huì)降低潛在致病菌等危害因素導(dǎo)致對(duì)蝦發(fā)病幾率增加的可能性。

    5 結(jié)論

    致謝:感謝國家海洋局第三海洋研究所?;瘜?shí)驗(yàn)室林彩老師對(duì)水質(zhì)參數(shù)COD測定提供的幫助;感謝國家海洋局第三海洋研究所海洋生物遺傳資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室楊洋、楊碩、黃兆斌、劉陽對(duì)水樣采集提供的幫助。感謝廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院郭東北老師提供的水樣采集儀器。

    [1] Tu C, Huang H T, Chuang S H, et al. Taura syndrome in pacific white shrimp penaeus vannamei cultured in Taiwan[J]. Diseases of Aquatic Organisms, 1999, 38(2): 159-161.

    [2] Yu Yang, Wei Jiankai, Zhang Xiaojun, et al. SNP discovery in the transcriptome of white Pacific shrimpLitopenaeusvannameiby next generation sequencing[J]. PLoS One, 2014, 9(1): e87218.

    [3] Zheng Yanfen, Yu Min, Liu Yan, et al. Comparison of cultivable bacterial communities associated with Pacific white shrimp (Litopenaeusvannamei) larvae at different health statuses and growth stages[J]. Aquaculture, 2016, 451: 163-169.

    [4] Boutin S, Bernatchez L, Audet C, et al. Network analysis highlights complex interactions between pathogen, host and commensal microbiota[J]. PLoS One, 2013, 8(12): e84772.

    [5] Huang Zhaobin, Li Xiaoyi, Wang Liping, et al. Changes in the intestinal bacterial community during the growth of white shrimp,Litopenaeusvannamei[J]. Aquaculture Research, 2014, 47(6): 1737-1746.

    [6] Berdjeb L, Ghiglione J F, Jacquet S. Bottom-up versus top-down control of hypo-and epilimnion free-living bacterial community structures in two neighboring freshwater lakes[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2011, 77(11): 3591-3599.

    [7] Zhang Hao, Sun Zhenli, Liu Bo, et al. Dynamic changes of microbial communities inLitopenaeusvannameicultures and the effects of environmental factors[J]. Aquaculture, 2016, 455: 97-108.

    [8] Rosselli R, Romoli O, Vitulo N, et al. Direct 16S rRNA-seq from bacterial communities: a PCR-independent approach to simultaneously assess microbial diversity and functional activity potential of each taxon[J]. Scientific Reports, 2016, 6: 32165.

    [9] Yan Qingyun, Bi Yonghong, Deng Ye, et al. Impacts of the three gorges dam on microbial structure and potential function[J]. Scientific Reports, 2015, 5: 8605.

    [10] Xu Nan, Tan Guangcai, Wang Hongyuan, et al. Effect of biochar additions to soil on nitrogen leaching, microbial biomass and bacterial community structure[J]. European Journal of Soil Biology, 2016, 74: 1-8.

    [11] Wang Qiong, Garrity G M, Tiedje J M, et al. Na?ve Bayesian classifier for rapid assignment of rRNA sequences into the new bacterial taxonomy[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2007, 73(16): 5261-5267.

    [12] Schloss P D, Gevers D, Westcott S L. Reducing the effects of PCR amplification and sequencing artifacts on 16S rRNA-based studies[J]. PLoS One, 2011, 6(12): e27310.

    [13] Oberauner L, Zachow C, Lackner S, et al. The ignored diversity: complex bacterial communities in intensive care units revealed by 16S pyrosequencing[J]. Scientific Reports, 2013, 3: 1413.

    [14] Rivas N M, Burton O T, Wise P, et al. A microbiota signature associated with experimental food allergy promotes allergic sensitization and anaphylaxis[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2013, 131(1): 201-212.

    [15] 李卓佳, 李奕雯, 曹煜成, 等. 凡納濱對(duì)蝦海水高位池養(yǎng)殖水體理化因子變化與營養(yǎng)狀況分析[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 29(10): 2025-2032.

    Li Zhuojia, Li Yiwen, Cao Yucheng, et al. Analysis of physical-chemical factors variation and nutritional status of litopenaeus vannamei high level seawater ponds[J]. Journal of Agro-Environment Science, 2010, 29(10): 2025-2032.

    [16] 張瑜斌, 章潔香, 詹曉燕, 等. 高位蝦池養(yǎng)殖過程主要理化因子的變化及水質(zhì)評(píng)價(jià)[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2009, 28(11): 628-634.

    Zhang Yubin, Zhang Jiexiang, Zhan Xiaoyan, et al. Changes in main physicochemical factors in water and assessment of water quality during culture in higher-level shrimp ponds[J]. Fisheries Science, 2009, 28(11): 628-634.

    [17] Sheik C S, Mitchell T W, Rizvi F Z, et al. Exposure of soil microbial communities to chromium and arsenic alters their diversity and structure[J]. PLoS One, 2012, 7(6): e40059.

    [18] Tang Yuyi, Tao Peiying, Tan Jianguo, et al. Identification of bacterial community composition in freshwater aquaculture system farming ofLitopenaeusvannameireveals distinct temperature-driven patterns[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2014, 15(8): 13663-13680.

    [19] 李爽, 姜華, 張德民, 等. 光合細(xì)菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用[J]. 中國水產(chǎn), 2007(1): 81-82.

    Li Shuang, Jiang Hua, Zhang Demin, et al. Photosynthetic bacteria and its application in aquaculture[J]. China Fisheries, 2007(1): 81-82.

    [20] 王姣姣, 李丹, 宋堅(jiān), 等. 不同時(shí)期刺參養(yǎng)殖池塘海水菌群結(jié)構(gòu)分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào), 2015, 17(2): 134-140.

    Wang Jiaojiao, Li Dan, Song Jian, et al. Structural analysis of seawater bacterial community from culture pond of apostichopus japonicus at different periods[J]. Journal of Agricultural Science and Technology, 2015, 17(2): 134-140.

    [21] Stenholm A R, Dalsgaard I, Middelboe M. Isolation and characterization of bacteriophages infecting the fish pathogenflavobacteriumpsychrophilum[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2008, 74(13): 4070-4078.

    [22] 姜海峰, 劉小林, 常亞青, 等. 皺紋盤鮑(Haliotisdiscushannai)腸道潛在益生菌的篩選及對(duì)幼鮑生長的影響[J]. 海洋與湖沼, 2013, 44(2): 482-487.

    Jiang Haifeng, Liu Xiaolin, Chang Yaqing, et al. Selection of potential probiotics from abalone intestional and their effects on growth of juvenile small abaloneHaliotisdiscushannal[J]. Oceanologia et Limnologia Sinica, 2013, 44(2): 482-487.

    [23] Romero M, Avendano-Herrera R, Magarios B, et al. Acylhomoserine lactone production and degradation by the fish pathogen Tenacibaculum maritimum, a member of the Cytophaga-Flavobacterium-Bacteroides (CFB) group[J]. FEMS Microbiology Letters, 2010, 304(2): 131-139.

    [24] Ninawe A S, Selvin J. Probiotics in shrimp aquaculture: avenues and challenges[J]. Critical Reviews in Microbiology, 2009, 35(1): 43-66.

    [25] Bruhn J B, Nielsen K F, Hjelm M, et al. Ecology, inhibitory activity, and morphogenesis of a marine antagonistic bacterium belonging to theRoseobacterclade[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2005, 71(11): 7263-7270.

    [26] Duchaud E, Boussaha M, Loux V, et al. Complete genome sequence of the fish pathogenFlavobacteriumpsychrophilum[J]. Nature Biotechnology, 2007, 25(7): 763-769.

    [27] Khashe S, Janda J M. Biochemical and pathogenic properties ofShewanellaalgaandShewanellaputrefaciens[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1998, 36(3): 783-787.

    [28] Wang Liping, Chen Yanwu, Huang Hui, et al. Isolation and identification ofVibriocampbelliias a bacterial pathogen for luminous vibriosis ofLitopenaeusvannamei[J]. Aquaculture Research, 2015, 46(2): 395-404.

    [29] Nimrat S, Suksawat S, Boonthai T, et al. PotentialBacillusprobiotics enhance bacterial numbers, water quality and growth during early development of white shrimp (Litopenaeusvannamei)[J]. Veterinary Microbiology, 2012, 159(3/4): 443-450.

    [30] Tas S, Yilmaz I N, Okus E. Phytoplankton as an indicator of improving water quality in the golden horn estuary[J]. Estuaries and Coasts, 2009, 32(6): 1205-1224.

    [31] Tian Chuan, Tan Jing, Wu Xin, et al. Spatiotemporal transition of bacterioplankton diversity in a large shallow hypertrophic freshwater lake, as determined by denaturing gradient gel electrophoresis[J]. Journal of Plankton Research, 2009, 31(8): 885-897.

    The diversity changes of bacterial community in mariculture water ofLitopenasusvannameiat Zhangpu, Fujian Province

    Hu Dong1,2, Wang Liping2, Zhao Ran1, Shao Zongze2

    (1.SchoolofPublicHealth,XiamenUniversity,Xiamen361005,China; 2.KeyLaboratoryofMarineBiogeneticResources,ThirdInstituteofOceanograph,StateOceanicAdministration,Xiamen361005,China)

    Litopenasusvannamei; microbial community; 16S rRNA gene high throughput sequencing; water quality parameters

    10.3969/j.issn.0253-4193.2017.08.009

    2017-01-18;

    2017-02-22。

    廈門南方海洋研究中心項(xiàng)目(14CZP034HJ08);深遠(yuǎn)海(極地)微生物及其基因資源開發(fā)與產(chǎn)品應(yīng)用示范 (201005032-1);國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81673129)。

    胡東(1990—),男,山東省新泰市人,主要研究方向?yàn)楹Q蟓h(huán)境微生物。E-mail:taianhudong@163.com

    *通信作者:邵宗澤,男,研究員。E-mail:shaozz@163.com

    S917.1

    A

    0253-4193(2017)08-0089-10

    胡東,王麗萍,趙苒,等. 福建漳浦凡納濱對(duì)蝦海水養(yǎng)殖中后期水體細(xì)菌群落多樣性分析[J].海洋學(xué)報(bào),2017,39(8):89—98,

    Hu Dong, Wang Liping, Zhao Ran,et al. The diversity changes of bacterial community in mariculture water ofLitopenasusvannameiat Zhangpu, Fujian Province[J]. Haiyang Xuebao,2017,39(8):89—98, doi:10.3969/j.issn.0253-4193.2017.08.009

    猜你喜歡
    凡納濱類群對(duì)蝦
    對(duì)蝦養(yǎng)殖弱勢群體的管理
    對(duì)蝦吃料慢的原因分析和處理
    對(duì)蝦免疫增強(qiáng)劑研究進(jìn)展
    對(duì)蝦常見環(huán)境性疾病的防治
    薏苡種質(zhì)資源ISSR分子標(biāo)記篩選及親緣關(guān)系分析
    凡納濱對(duì)蝦白斑綜合征病毒防治研究進(jìn)展(一)
    黑石頂自然保護(hù)區(qū)土壤動(dòng)物功能類群對(duì)季節(jié)動(dòng)態(tài)的響應(yīng)
    凡納濱對(duì)蝦與點(diǎn)帶石斑魚的混養(yǎng)模式
    凡納濱對(duì)蝦CTSL基因與生長相關(guān)的SNP位點(diǎn)的特征
    2011年春夏季黃海和東海微型浮游動(dòng)物類群組成及其攝食的研究
    热99re8久久精品国产| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 一边摸一边抽搐一进一出视频| 午夜日韩欧美国产| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 精品卡一卡二卡四卡免费| 搡老熟女国产l中国老女人| 曰老女人黄片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩大码丰满熟妇| 精品第一国产精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲第一av免费看| 亚洲av熟女| 欧美丝袜亚洲另类 | 老司机福利观看| 国精品久久久久久国模美| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 国产亚洲精品久久久久5区| bbb黄色大片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品在线美女| 91精品三级在线观看| 日韩大码丰满熟妇| xxxhd国产人妻xxx| ponron亚洲| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜精品久久久久久毛片777| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲色图av天堂| 搡老岳熟女国产| 极品教师在线免费播放| 精品欧美一区二区三区在线| 精品福利观看| 国产不卡av网站在线观看| 69av精品久久久久久| 久久草成人影院| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲国产精品sss在线观看 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产高清videossex| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产男靠女视频免费网站| 色94色欧美一区二区| 日韩有码中文字幕| 看黄色毛片网站| 亚洲专区中文字幕在线| 极品教师在线免费播放| 亚洲精品自拍成人| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久国产精品影院| www.999成人在线观看| 黄片大片在线免费观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品二区激情视频| 久9热在线精品视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 91大片在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 天堂√8在线中文| 嫁个100分男人电影在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 美女国产高潮福利片在线看| 国产不卡av网站在线观看| 十八禁人妻一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 中文字幕制服av| 亚洲精品粉嫩美女一区| x7x7x7水蜜桃| 99久久99久久久精品蜜桃| 韩国精品一区二区三区| 国产有黄有色有爽视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产精品影院久久| 国产成人精品在线电影| 大片电影免费在线观看免费| 久久香蕉精品热| a级片在线免费高清观看视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品国产区一区二| videosex国产| 成年女人毛片免费观看观看9 | 午夜福利在线免费观看网站| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜激情av网站| 日韩欧美一区视频在线观看| 99riav亚洲国产免费| 久久久久久久久免费视频了| 国产深夜福利视频在线观看| а√天堂www在线а√下载 | 国产精品.久久久| 黄色片一级片一级黄色片| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲欧美色中文字幕在线| а√天堂www在线а√下载 | 久久精品人人爽人人爽视色| 在线av久久热| av免费在线观看网站| 欧美午夜高清在线| 后天国语完整版免费观看| 久久青草综合色| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜久久久在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品电影一区二区三区 | 午夜成年电影在线免费观看| 999精品在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 大码成人一级视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久久精品免费免费高清| 1024视频免费在线观看| 一级毛片精品| 国产一区二区三区视频了| 黄色 视频免费看| 婷婷丁香在线五月| 国产精品永久免费网站| 欧美最黄视频在线播放免费 | 首页视频小说图片口味搜索| 99精品在免费线老司机午夜| 老司机在亚洲福利影院| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 伦理电影免费视频| 无限看片的www在线观看| 精品电影一区二区在线| 国产精品国产av在线观看| 久久中文字幕一级| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| svipshipincom国产片| 99国产精品一区二区三区| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 在线观看舔阴道视频| 国产精品久久久av美女十八| 男人的好看免费观看在线视频 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 最近最新中文字幕大全免费视频| 成人影院久久| av中文乱码字幕在线| 国产成人精品无人区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美 日韩 精品 国产| 国产av精品麻豆| 高清av免费在线| 又紧又爽又黄一区二区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产三级黄色录像| 精品福利永久在线观看| 精品久久久久久电影网| 香蕉久久夜色| 精品国产亚洲在线| 国产主播在线观看一区二区| 91av网站免费观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品国产区一区二| 黄片小视频在线播放| 亚洲精华国产精华精| 亚洲综合色网址| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久久久国产电影| 人妻一区二区av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 色播在线永久视频| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 免费高清在线观看日韩| 操出白浆在线播放| 黄色a级毛片大全视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲视频免费观看视频| 久久精品成人免费网站| √禁漫天堂资源中文www| 国产亚洲欧美精品永久| 国产成人啪精品午夜网站| 韩国av一区二区三区四区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲色图av天堂| 国产欧美日韩一区二区三| 国产黄色免费在线视频| svipshipincom国产片| 国产乱人伦免费视频| 免费在线观看影片大全网站| 色老头精品视频在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 一个人免费在线观看的高清视频| 69精品国产乱码久久久| 人人澡人人妻人| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲成人免费电影在线观看| 在线视频色国产色| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 悠悠久久av| 在线天堂中文资源库| 波多野结衣一区麻豆| 国产99久久九九免费精品| 不卡一级毛片| 亚洲av成人av| 久久香蕉激情| 真人做人爱边吃奶动态| 纯流量卡能插随身wifi吗| 岛国毛片在线播放| 欧美日韩一级在线毛片| 黄色a级毛片大全视频| 丝袜在线中文字幕| 天堂√8在线中文| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 免费看a级黄色片| 91av网站免费观看| 国产精品免费大片| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲第一av免费看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲男人天堂网一区| 久久午夜亚洲精品久久| 99精品在免费线老司机午夜| 久久久精品区二区三区| 99热只有精品国产| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美日韩av久久| 亚洲熟妇熟女久久| 午夜老司机福利片| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产av一区二区精品久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美午夜高清在线| 日本一区二区免费在线视频| 91麻豆av在线| 亚洲成人手机| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 又黄又粗又硬又大视频| avwww免费| 电影成人av| 黑人猛操日本美女一级片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产国语露脸激情在线看| 看片在线看免费视频| 国产深夜福利视频在线观看| 久久中文字幕一级| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲三区欧美一区| 99国产精品一区二区三区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一级作爱视频免费观看| 亚洲午夜理论影院| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一夜夜www| 亚洲综合色网址| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 91成人精品电影| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 人成视频在线观看免费观看| 婷婷丁香在线五月| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av美国av| 一区在线观看完整版| 国产成人精品久久二区二区免费| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 91字幕亚洲| 丝袜美腿诱惑在线| 大码成人一级视频| 99国产精品99久久久久| 国产一区在线观看成人免费| 桃红色精品国产亚洲av| 国产成人av激情在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲国产看品久久| 成年人免费黄色播放视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 一二三四在线观看免费中文在| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中国美女看黄片| 国产精品 欧美亚洲| 欧美日韩精品网址| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美色视频一区免费| 高清在线国产一区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 午夜免费观看网址| 久99久视频精品免费| 午夜91福利影院| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲五月天丁香| xxxhd国产人妻xxx| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 一级毛片高清免费大全| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久99一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 老鸭窝网址在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜免费成人在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美精品av麻豆av| 国产精品免费视频内射| 99国产精品99久久久久| 国产精品综合久久久久久久免费 | 欧美日韩一级在线毛片| 日日爽夜夜爽网站| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 视频区欧美日本亚洲| 男人操女人黄网站| 国产成人av激情在线播放| 欧美性长视频在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久99久视频精品免费| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 这个男人来自地球电影免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产男女内射视频| 亚洲熟女毛片儿| 久久久久久久午夜电影 | 老司机午夜福利在线观看视频| 麻豆成人av在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 岛国在线观看网站| 久久久久精品人妻al黑| 99久久精品国产亚洲精品| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产欧美亚洲国产| 黄片播放在线免费| www.999成人在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频 | 精品久久久久久久毛片微露脸| 真人做人爱边吃奶动态| 免费高清在线观看日韩| 国产成+人综合+亚洲专区| 99国产综合亚洲精品| 99久久99久久久精品蜜桃| 90打野战视频偷拍视频| 91在线观看av| 俄罗斯特黄特色一大片| 看免费av毛片| 久久亚洲精品不卡| 亚洲人成电影免费在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产av一区二区精品久久| 亚洲人成电影观看| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲成人免费电影在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 激情视频va一区二区三区| 91成年电影在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 999久久久国产精品视频| 亚洲av熟女| 淫妇啪啪啪对白视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美精品亚洲一区二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| www.熟女人妻精品国产| 亚洲少妇的诱惑av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产免费男女视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品免费大片| 国产男靠女视频免费网站| 国产成人免费观看mmmm| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产精品永久免费网站| 深夜精品福利| 国产1区2区3区精品| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品久久久久成人av| 国产有黄有色有爽视频| 黄色毛片三级朝国网站| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美性长视频在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| www.精华液| 免费看a级黄色片| 久久久国产成人免费| 国产视频一区二区在线看| 国产亚洲精品久久久久5区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 两个人免费观看高清视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 少妇 在线观看| 久久99一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 99在线人妻在线中文字幕 | 欧美成人午夜精品| 久久久久久久精品吃奶| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 免费观看精品视频网站| 宅男免费午夜| 亚洲国产中文字幕在线视频| 搡老岳熟女国产| av片东京热男人的天堂| 国产一区二区三区视频了| 中国美女看黄片| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 男女免费视频国产| 热re99久久国产66热| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产精品偷伦视频观看了| 不卡av一区二区三区| 欧美日韩乱码在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲第一av免费看| 久久草成人影院| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久亚洲真实| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品视频人人做人人爽| 一进一出抽搐动态| 久久久久久久国产电影| 成年人黄色毛片网站| 中文亚洲av片在线观看爽 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| 叶爱在线成人免费视频播放| 9色porny在线观看| 宅男免费午夜| 国产精品久久电影中文字幕 | 男女免费视频国产| 色综合婷婷激情| 精品久久久久久,| 一进一出抽搐动态| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲午夜理论影院| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 精品亚洲成国产av| 久久这里只有精品19| 国产成人欧美| 成人手机av| 久热爱精品视频在线9| 男女免费视频国产| 成人永久免费在线观看视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲精品av麻豆狂野| 人妻一区二区av| 久久影院123| 另类亚洲欧美激情| 中文字幕最新亚洲高清| 久久久久久久午夜电影 | 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 午夜福利在线观看吧| 9191精品国产免费久久| 日韩欧美三级三区| 欧美国产精品一级二级三级| 国产深夜福利视频在线观看| 视频区图区小说| 中文字幕制服av| 狠狠狠狠99中文字幕| 热re99久久国产66热| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产激情久久老熟女| 一区福利在线观看| 国产精品免费大片| av视频免费观看在线观看| 欧美中文综合在线视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产精品综合久久久久久久免费 | 看免费av毛片| 久久亚洲精品不卡| 成人国语在线视频| 自线自在国产av| 欧美日韩福利视频一区二区| 美女视频免费永久观看网站| 两性夫妻黄色片| 一区二区三区激情视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 日韩人妻精品一区2区三区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 叶爱在线成人免费视频播放| 91在线观看av| 国产男女超爽视频在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 一级黄色大片毛片| 大型av网站在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲一区中文字幕在线| 在线看a的网站| 成年人午夜在线观看视频| 国产免费现黄频在线看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品高清国产在线一区| 国产午夜精品久久久久久| 精品国产乱子伦一区二区三区| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 99re6热这里在线精品视频| 9色porny在线观看| 国产三级黄色录像| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久中文看片网| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产色视频综合| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲黑人精品在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产99久久九九免费精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲情色 制服丝袜| 在线视频色国产色| 69精品国产乱码久久久| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久国产成人精品二区 | 老熟女久久久| av片东京热男人的天堂| 十八禁高潮呻吟视频| av福利片在线| 韩国精品一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产男靠女视频免费网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产日韩欧美亚洲二区| 在线av久久热| 亚洲第一av免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 日韩欧美一区视频在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜免费观看网址| 淫妇啪啪啪对白视频| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品99久久99久久久不卡| a在线观看视频网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 热99re8久久精品国产| 精品亚洲成国产av| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久精品国产清高在天天线| 99精品在免费线老司机午夜| 黑丝袜美女国产一区| 老司机深夜福利视频在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久久久免费高清国产稀缺| bbb黄色大片| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲免费av在线视频| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲精品美女久久av网站| 啦啦啦在线免费观看视频4| 日韩欧美免费精品| 午夜两性在线视频| 日本vs欧美在线观看视频| av视频免费观看在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 90打野战视频偷拍视频| 成年版毛片免费区| 久9热在线精品视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产精品久久电影中文字幕 | 久9热在线精品视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 色尼玛亚洲综合影院| 丰满的人妻完整版| 国产精品偷伦视频观看了| 韩国精品一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 国产在线一区二区三区精| 精品福利永久在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久久国产成人精品二区 | 天天影视国产精品| 国产成人av激情在线播放| 久久中文字幕一级| 女同久久另类99精品国产91| 69精品国产乱码久久久| 丁香欧美五月|