DLX2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

張 榮,喬 文

(1西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,西安 710061;2延安大學(xué)咸陽(yáng)醫(yī)院消化內(nèi)科;*通訊作者,E-mail:qiaowen1202@126.com)

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DLX2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

張 榮1,2,喬 文1*

(1西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,西安 710061;2延安大學(xué)咸陽(yáng)醫(yī)院消化內(nèi)科;*通訊作者,E-mail:qiaowen1202@126.com)

目的 探討DLX2在結(jié)腸癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)差異及在結(jié)腸癌中的意義。 方法 收集96例結(jié)腸癌患者的癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)DLX2的表達(dá),分析其表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果 結(jié)腸癌組織中DLX2 呈陽(yáng)性表達(dá),與癌旁正常組織相比,其表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)。DLX2的表達(dá)在結(jié)腸癌的不同TNM分期、不同分化程度和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 DLX2的高表達(dá)可能促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展,深入研究其功能有可能為結(jié)腸癌的診斷治療及預(yù)后提供新的靶標(biāo)。

DLX2基因; 結(jié)腸癌; TNM分期

結(jié)腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,其發(fā)病率逐年上升,然而其發(fā)病機(jī)制并不明確[1]。研究顯示,基因異常是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵所在,一直以來(lái)都是腫瘤分子機(jī)制研究的熱點(diǎn)。因此,尋找結(jié)腸癌相關(guān)基因?qū)ζ湓\治具有重要意義。distal-less 同源盒基因2(distal-less homeobox 2,DLX2)是同源盒基因亞家族DLX基因家族成員之一,近年研究表明,其異常表達(dá)與多種血液系統(tǒng)腫瘤及實(shí)體腫瘤的進(jìn)程密切相關(guān)[2-5]。然而,DLX2與結(jié)腸癌的關(guān)系并不清楚。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法,檢測(cè)DLX2基因在結(jié)腸癌及相鄰的正常癌旁組織中的表達(dá)特征,分析其表達(dá)與結(jié)腸癌患者臨床病理因素的關(guān)系,為結(jié)腸癌的分子診斷及靶向治療提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織標(biāo)本 研究所需標(biāo)本來(lái)自2013-01～2015-12延安大學(xué)咸陽(yáng)醫(yī)院確診為原發(fā)性結(jié)腸癌96例患者行手術(shù)切除的結(jié)腸癌及相應(yīng)癌旁正常組織。所有標(biāo)本均經(jīng)病理確診,并采用4%中性甲醛固定和石蠟包埋。所有患者術(shù)前均未接受過(guò)化療、放療或生物制劑等治療?；颊吖?6例,年齡32-83歲,平均年齡(48.5±11.2)歲,其中男性65例,女性31例;高分化癌30例,中分化35例,低分化31例;臨床分期中,Ⅰ期6例,Ⅱ期45例,Ⅲ期24例,Ⅳ期21例;55例病人有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.1.2 主要試劑 鼠抗人的DLX2單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司,SP免疫組化試劑盒購(gòu)自美國(guó)Zymed Lab公司,HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體購(gòu)自美國(guó)Gibco公司,APES防脫片膠購(gòu)自北京中杉公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 采用SP法,按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行。將包埋好的標(biāo)本進(jìn)行5 μm的連續(xù)切片;脫蠟水化;然后加入3%的H2O2,室溫下放置10 min;再將切片放置于檸檬酸緩沖液(10 mmol/L,pH 6.0)中,微波加熱以修復(fù)抗原(95 ℃,10 min);冷卻至室溫后加入山羊血清封閉30 min;加入鼠抗人DLX2多克隆抗體(1 ∶150),保濕盒中過(guò)夜(4 ℃);復(fù)溫(37 ℃,1 h),PBS振洗 3次(5 min/次);加入生物素標(biāo)記的二抗 (1 ∶2 000),放置于保濕盒中,置于37 ℃,30 min,PBS振洗 3次(5 min/次);加入反應(yīng)液,放置于保濕盒中,置于37 ℃,1 h,PBS振洗 3次(5 min/次);加入DAB試劑后根據(jù)觀察控制顯色時(shí)間,用蒸餾水沖洗(15 min);蘇木精復(fù)染(1 min),蒸餾水沖洗后脫水透明,用中性樹(shù)膠封片后備用。

1.2.2 染色評(píng)分 由兩位高年資病理醫(yī)師進(jìn)行染色評(píng)分,評(píng)分醫(yī)師對(duì)患者的臨床以及病理資料均不知情。評(píng)分時(shí)隨機(jī)抽選5個(gè)視野,根據(jù)每個(gè)視野中染色陽(yáng)性細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)的百分比以及染色的深淺進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比如果≤1%細(xì)胞染色為0分;1%-25 %細(xì)胞染色為1分; 26%-50 %細(xì)胞染色為2分; 51%-75 %細(xì)胞染色為3分;76%-100 %細(xì)胞染色為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:細(xì)胞無(wú)著色為0分;弱染色(淡黃色)為1分;中等強(qiáng)度染色(棕黃色)為2分;強(qiáng)染色(棕褐色)為3分。將兩個(gè)分?jǐn)?shù)相加作為最終評(píng)分,最終評(píng)分如果大于3分則判定為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件(SPSS,Chicago,Illinois)進(jìn)行分析。樣本間計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行。若P<0.05則被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DLX2在結(jié)腸癌組織中顯著高表達(dá)

對(duì)結(jié)腸癌和癌旁正常結(jié)腸組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析,結(jié)果顯示,DLX2主要表達(dá)在細(xì)胞核中,而結(jié)腸癌組織中DLX2的表達(dá)水平顯著增高(見(jiàn)圖1)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,結(jié)腸癌組織中DLX2陽(yáng)性表達(dá)的增高與癌旁正常結(jié)腸組織相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01,見(jiàn)表1)。

圖1 結(jié)腸癌及癌旁正常組織中DLX2的表達(dá) (×200)Figure 1 Expression of DLX2 in colon cancer and matched adjacent non-tumor tissues (×200)

表1 DLX2在結(jié)腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)

Table 1 DLX2 expression in colon cancer and matched adjacent non-tumor tissues

分組nDLX2表達(dá)陽(yáng)性陰性χ2P結(jié)腸癌組織96712556.5540.000癌旁正常組織961977

2.2 DLX2表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性分析

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,DLX2的高表達(dá)與結(jié)腸癌的分化程度關(guān)系密切,分化程度越低,DLX2表達(dá)的陽(yáng)性率越高(P<0.05)。DLX2在TNMⅢ期和Ⅳ期的結(jié)腸癌的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期的結(jié)腸癌(P<0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中DLX2的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于不伴轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織標(biāo)本(P<0.05);而DLX2的表達(dá)在不同年齡及不同性別的結(jié)腸癌組織中沒(méi)有明顯差異(P>0.05,見(jiàn)表2)。

3 討論

結(jié)腸癌是我國(guó)乃至世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率均很高的惡性腫瘤[6],在我國(guó)位于消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)病率的第三位。而且隨著人民的飲食習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變,我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率均逐年上升,且患病人群有年輕化的趨勢(shì)。CEA、CA199等傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物敏感性較差,在早期結(jié)腸癌患者中陽(yáng)性率低,不利于早期篩查。目前,結(jié)腸癌的診斷主要依賴(lài)腸鏡及腹部CT 等方法,大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于腫瘤晚期,失去了最佳的治療時(shí)機(jī),因此尋找特異的關(guān)鍵分子及治療靶點(diǎn)對(duì)結(jié)腸癌的早期診斷、預(yù)后判斷、新藥開(kāi)發(fā)和臨床治療具有重要意義。

表2 DLX2的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的相關(guān)性分析

Table 2 Relationship of the immunohistochemical expression of DLX2 with clinicopathological parameters in colon cancer

臨床病理參數(shù)nDLX2陽(yáng)性陰性χ2P性別0.2850.594 男654718 女31247年齡0.1730.678 <50歲34268 ≥50歲624517分化程度 高30282 中352694.169*0.041* 低31171411.676*0.001*TNM分期4.8360.028 Ⅰ-Ⅱ513318 Ⅲ-Ⅳ45387淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6.2360.012 無(wú)412516 有55469

*表示與高分化比較

同源盒基因(homeobox gene,Hox)是在果蠅體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的基因,其不僅參與胚胎時(shí)期消化道的發(fā)育,而且與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[7-10]。distal-less 同源盒(distal-less homeobox,DLX)基因家族是同源盒基因家族的亞家族,DLX2是DLX家族中的一員,其在腫瘤中的研究仍處于起始階段,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其異常表達(dá)與急性髓性白血病、淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、胃癌的進(jìn)程密切相關(guān),能促進(jìn)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移[2-5,11-13]。但關(guān)于DLX2與結(jié)腸癌的關(guān)系并不明確,僅有的一項(xiàng)關(guān)于DLX2在結(jié)腸癌中表達(dá)的研究顯示,DLX-2在結(jié)腸癌組織中呈現(xiàn)一種多樣化的表達(dá)特征,即相比正常組織DLX2出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)、相似或下調(diào)等不同情況[14],那么DLX2在結(jié)腸癌中是什么樣的表達(dá)模式就值得關(guān)注,而明確DLX2在結(jié)腸癌中的表達(dá)特征是深入研究其在結(jié)腸癌中的作用及機(jī)制的基礎(chǔ)。

本研究采用免疫組織化學(xué)染色觀察結(jié)腸癌組織及癌旁組織DLX2的表達(dá)。結(jié)果顯示無(wú)論在癌組織或者癌旁組織,DLX2主要表達(dá)在細(xì)胞核中。96例結(jié)腸癌組織中,有71 例呈 DLX2陽(yáng)性高表達(dá),而相應(yīng)癌旁正常組織呈顯著低表達(dá)甚至表達(dá)缺失,其統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著差異。分析結(jié)腸癌患者臨床病理參數(shù)和DLX2的表達(dá)關(guān)系,結(jié)果表明,DLX2的高表達(dá)在不同性別和不同年齡的患者中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但與結(jié)腸癌的惡性程度有密切關(guān)系,即TNM分期越高的結(jié)腸癌組織中DLX2陽(yáng)性表達(dá)率越高,并且DLX2的陽(yáng)性高表達(dá)還與淋巴轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。DLX2可能成為一種結(jié)腸癌患者新的監(jiān)測(cè)指標(biāo),以輔助臨床的診斷治療以及隨訪(fǎng)。

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Expression and clinical significance of distal-less homeobox 2 in colon cancer

ZHANG Rong1,2,QIAO Wen1*

(1DepartmentofGastroenterology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an710061,China;2DepartmentofGastroenterology,XianyangHospitalofYan’anUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:qiaowen1202@126.com)

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of Distal-less homeobox 2 (DLX2) protein in colon cancer.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of DLX2 protein in 96 colon cancer tissues and adjacent non-tumor tissues.Statistical analysis was used to evaluate the relationship between the clinicopathological parameters and the expression of DLX2.ResultsThe DLX2 expression was significantly higher in colon cancer tissues than that of the corresponding non-tumor tissues(P<0.01).The up-regulation of DLX2 was significantly related with TNM stage,differentiation grade and lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionThe results suggest that higher expression of DLX2 may promote the carcinogenesis and progression of colon cancer.Further study on the function of DLX2 may provide a new strategy for the diagnosis,treatment and prognosis of colon cancer.

distal-less homeobox 2(DLX2)； colon cancer； TNM stage

張榮,女,1980-09生,學(xué)士,主治醫(yī)師,E-mail:zhangrzt@126.com

2017-01-10

R735.35

A

1007-6611(2017)04-0362-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.04.013