酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬外周血免疫和腸道免疫的影響

賀 琴 王自蕊 游金明 羅波文 盧亞飛 李蘭海

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，江西省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省營(yíng)養(yǎng)飼料開發(fā)工程中心，南昌330045)

酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬外周血免疫和腸道免疫的影響

賀 琴 王自蕊 游金明*羅波文 盧亞飛 李蘭海

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，江西省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省營(yíng)養(yǎng)飼料開發(fā)工程中心，南昌330045)

本試驗(yàn)旨在探討飼糧中添加酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬外周血免疫和腸道免疫的影響。采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，選取21日齡遺傳胎次、體重接近的斷奶仔豬180頭，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9頭豬。4組分別飼喂飼糧中添加0(對(duì)照組)、0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期21 d。結(jié)果表明：1)與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖顯著提高了斷奶仔豬血清免疫球蛋白A(IgA)含量(P<0.05)，飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖顯著提高了斷奶仔豬血清免疫球蛋白G(IgG)含量(P<0.05)。2)與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖顯著降低了斷奶仔豬血清干擾素-γ(IFN-γ)含量(P<0.05)，飼糧中添加0.30%酵母壁多糖顯著提高了斷奶仔豬血清白細(xì)胞介素-10(IL-10)的含量(P<0.05)。飼糧中添加酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量均無顯著影響(P>0.05)。3)與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖顯著提高了斷奶仔豬回腸CD4+淋巴細(xì)胞含量(P<0.05)，飼糧中添加酵母壁多糖能一定程度提高斷奶仔豬回腸CD8+和CD20+淋巴細(xì)胞含量，但差異不顯著(P>0.05)。由此可知，酵母壁多糖能一定程度提高斷奶仔豬外周血免疫和腸道免疫，緩解斷奶應(yīng)激。

酵母壁多糖；斷奶仔豬；免疫球蛋白；淋巴細(xì)胞

斷奶是仔豬生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵階段，仔豬斷奶后面臨著飲食和生存環(huán)境的改變，再加上消化道和免疫功能等機(jī)制發(fā)育不夠完善，仔豬斷奶后會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)性能降低、腹瀉率提高、腸道絨毛萎縮、腸道菌群失衡等一系列問題[1-3]。此前，養(yǎng)殖戶選擇在飼糧中添加抗生素來解決斷奶應(yīng)激所引起的問題。但是，近年來抗生素所造成的細(xì)菌抗藥性危害不容小覷，替代抗生素產(chǎn)品的開發(fā)利用迫在眉睫[4]。益生元和益生菌在替代抗生素上獲得了大量可觀成果。選擇酵母和酵母衍生物作為飼料添加劑有利于動(dòng)物的健康生長(zhǎng)，并能提高畜禽生長(zhǎng)性能和腸道部分有益菌含量[5-7]。前期動(dòng)物試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.15%以下酵母壁多糖效果不明顯，且與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖能夠顯著提高斷奶仔豬平均日增重和平均日采食量，并有降低仔豬料重比和腹瀉率的趨勢(shì)[8]。酵母壁多糖主要含有甘露寡糖和β-葡聚糖[9]，其對(duì)畜禽具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。為了進(jìn)一步了解酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬免疫機(jī)制的影響，本試驗(yàn)通過研究酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白、細(xì)胞因子和回腸淋巴細(xì)胞含量的影響，初步探討酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬外周血免疫和腸道免疫的影響機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

酵母壁多糖為啤酒酵母細(xì)胞壁多糖，來源于拓普生物科技有限公司，其主要成分為甘露寡糖(23.45%)和β-葡聚糖(39.24%)，粗蛋白質(zhì)含量為26.30%，粗灰分含量為3.30%，水分含量為5.35%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和分組設(shè)計(jì)

采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，選取21日齡遺傳

胎次相近、體重接近的斷奶仔豬180頭，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9頭仔豬。4組分別飼喂飼糧中添加0(對(duì)照組)、0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期為21 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧

仔豬飼喂玉米-豆粕型試驗(yàn)飼糧，不含抗生素。飼糧配方參照NRC(2012)和我國《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 65—2004)配制，試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目Items酵母壁多糖水平Y(jié)eastcellwallpolysaccharidelevel/%00.150.300.45蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys0.780.780.780.78蘇氨酸Thr0.860.860.860.86

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 The premix provided the following per kilogram of diets：VA 6 350 IU，VD32 150 IU，VE 25 IU，VK 3 mg，VB11.8 mg，VB120.024 mg，核黃素 riboflavin 6 mg，葉酸 folic acid 0.9 mg，生物素 biotin 4.5 mg，煙酸 niacin 24 mg，泛酸 pantothenic acid 20 mg，Zn 80 mg，F(xiàn)e 150 mg，Cu 10 mg，I 0.6 mg，Se 0.5 mg，Co 0.8 mg。

2)營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。Nutrient levels were calculated values.

1.4 飼養(yǎng)管理

仔豬于裝有高床、漏縫地板、乳頭式飲水器的保育舍中飼養(yǎng)。試驗(yàn)開始前對(duì)豬舍進(jìn)行充分沖洗和消毒。試驗(yàn)過程中，每日飼喂仔豬4～5次。仔豬自由采食和飲水，其他飼養(yǎng)管理措施、免疫程序按豬場(chǎng)常規(guī)管理程序進(jìn)行。

1.5 樣品采集及處理

在試驗(yàn)第21天，從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1頭接近平均體重的仔豬進(jìn)行空腹前腔靜脈采血。血液裝于非抗凝采血管中，室溫下靜置一段時(shí)間后，于4 ℃、3 000 r/min離心5 min，移取分裝上層血清。血清置于-20 ℃保存待測(cè)。

肌肉注射4%戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉。待麻醉完全后，采用頸靜脈放血的辦法處死，打開腹腔，迅速取回腸腸段，浸入4 ℃預(yù)冷后的生理鹽水中涮洗掉內(nèi)容物后，放入4%多聚甲醛中固定24 h以上。

1.6 測(cè)定指標(biāo)

1.6.1 血清中免疫球蛋白和細(xì)胞因子含量測(cè)定

采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法，測(cè)定血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、干擾素-γ(IFN-γ)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量。

1.6.2 回腸中CD4+、CD8+、CD20+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組化切片

1.6.2.1 常規(guī)石蠟切片操作

將4%多聚甲醛固定24 h以上的回腸組織修為適當(dāng)大小，常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋后切片(4 μm)、展片、用多聚賴氨酸防脫玻片貼片后，于烘片機(jī)上烘干后置于55 ℃烘箱中20 min，防止后期脫片。

1.6.2.2 石蠟免疫組化步驟

1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后，加3%過氧化氫(H2O2)去離子水覆蓋整個(gè)切片組織，于濕盒中孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。

2)磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。

3)乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復(fù)，95 ℃水浴12 min。

4)待液體降至室溫，PBS(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。

5)甩去PBS，滴加封閉用正常山羊血清工作液覆蓋整個(gè)切片組織，于濕盒中孵育10～12 min，傾去，勿洗。

6)滴加一抗，4 ℃過夜。一抗購于Abcam公司，分別為：Anti-CD4 antibody[EPR6855] ab133616、Anti-CD8 antibody ab4055和Anti-CD20 antibody[EP459Y] ab78237。

7)PBS(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。

8)甩去PBS，滴加生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG覆蓋整個(gè)切片組織，于濕盒中孵育10～12 min，

9)PBS(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。

10)甩去PBS，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液覆蓋整個(gè)切片組織，于濕盒中孵育10～12 min。

11)PBS(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。

12)甩去PBS液，滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)工作液2～5 min，過氧化物酶將使底物發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)部位顯棕色。蒸餾水沖洗3次，每次5 min。

13)蘇木素復(fù)染2～3 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min。

14)切片經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明后，中性樹膠封片。

每次試驗(yàn)均設(shè)陰性對(duì)照，以0.01 mol/L PBS(pH 7.4)代替一抗作陰性對(duì)照，其余步驟同上。

1.6.2.3 腸道組織免疫相關(guān)細(xì)胞的觀察

應(yīng)用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件測(cè)定單位視野內(nèi)陽性細(xì)胞總積分光密度(integrated option density，IOD)和總目標(biāo)分布區(qū)域面積(Area)，每張切片測(cè)30個(gè)以上視野，計(jì)算平均光密度(IOD/Area)，以反映淋巴細(xì)胞含量。

1.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)用Excel 2003簡(jiǎn)單處理后，采用SPSS 17.0軟件中one-way ANOVA模型進(jìn)行方差分析，各組數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。以P<0.05為差異顯著，P<0.05≤P<0.10為有差異趨勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白和細(xì)胞因子含量的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖組斷奶仔豬血清IgA含量分別提高了15.04%、20.35%和13.27%(P<0.05)，飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖組顯著提高了斷奶仔豬血清IgG含量(P<0.05)。飼糧中添加酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清IgM含量無顯著影響(P>0.05)。

與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖組斷奶仔豬血清IFN-γ含量分別降低了34.94%、29.13%和29.22%(P<0.05)，飼糧中添加0.30%酵母壁多糖組顯著提高了斷奶仔豬血清IL-10含量(P<0.05)。飼糧中添加酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清IL-2、IL-6和TNF-α含量無顯著影響(P>0.05)，但有提高斷奶仔豬血清IL-2含量的趨勢(shì)(P=0.071)。

2.2 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬回腸CD4+、CD8+和CD20+淋巴細(xì)胞含量的影響

圖1為斷奶仔豬回腸固有層中CD4+淋巴細(xì)胞免疫組化切片圖，其中呈棕色/紅棕色的細(xì)胞為CD4+淋巴細(xì)胞。圖2為斷奶仔豬回腸絨毛固有層中CD4+淋巴細(xì)胞免疫組化切片圖，從圖中可以發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧中酵母壁多糖添加水平的升高，斷奶仔豬回腸絨毛固有層中輔助性T淋巴細(xì)胞明顯越來越多。為了進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)結(jié)果，利用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件上測(cè)得單位面積陽性細(xì)胞的平均光密度值。由圖3可以得知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖能顯著提高斷奶仔豬回腸CD4+淋巴細(xì)胞含量(P<0.05)，且平均光密度值在正常范圍中。

表2 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白和細(xì)胞因子含量的影響Table 2 Effects of yeast cell wall polysaccharide on contents of immunoglobulin and cytokine in serum of weaned piglets

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05).

棕色/紅棕色為陽性細(xì)胞顏色(棕色/紅棕色：DAB顯色)，蘇木精-伊紅(HE)復(fù)染。切片放大倍數(shù)均為400。A為對(duì)照組，B為0.15%酵母壁多糖組，C為0.30%酵母壁多糖組，D為0.45%酵母壁多糖組。圖2、圖4、圖5、圖7同。

The membrane brown/reddish brown colors denote positive staining(brown/reddish brown: DAB chromogen, specimens were counterstained with hematoxylin-eosin staining (HE). Slice magnification was 400×.A: control group, B: 0.15% yeast cell wall polysaccharide group, C: 0.30% yeast cell wall polysaccharide group, D: 0.45% yeast cell wall polysaccharide group. The same as Table 2, Table 4, Table 5 and Table 7.

圖1 回腸CD4+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組化切片圖

Fig.1 Figure of ileum CD4+lymphocytes paraffin immunohistochemical

圖2 回腸CD4+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組化切片圖(絨毛)Fig.2 Figure of ileum CD4+ lymphocytes paraffin immunohistochemical (villus)

數(shù)據(jù)柱標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。圖6、圖8同。

Value columns with different small letters mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letters superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as Table 6 and Table 8.

圖3 回腸CD4+淋巴細(xì)胞平均光密度

Fig.3 The mean optical density of ileum CD4+lymphocytes

圖4為斷奶仔豬回腸固有層中集合淋巴小結(jié)中間CD8+淋巴細(xì)胞(細(xì)胞毒性T細(xì)胞)免疫組化切片圖，從圖中可以看出，隨著飼糧酵母壁多糖添加水平的升高，細(xì)胞毒性T細(xì)胞含量在各組之間差異不大，且比CD4+淋巴細(xì)胞少。圖5為斷奶仔豬回腸絨毛中派伊爾淋巴小結(jié)CD8+淋巴細(xì)胞。利用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件上測(cè)的單位面積陽性細(xì)胞的平均光密度值，由圖6可以得知，各組之間CD8+淋巴細(xì)胞含量無顯著差異(P>0.05)。

圖4 回腸CD8+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組化切片圖Fig.4 Figure of ileum CD8+ lymphocytes paraffin immunohistochemical

圖5 回腸CD8+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組化 切片圖(派伊爾淋巴小結(jié))Fig.5 Figure of ileum CD8+ lymphocytes paraffin immunohistochemical (Peyer’s patches)

圖6 回腸CD8+淋巴細(xì)胞平均光密度Fig. 6 The mean optical density of ileum CD8+ lymphocytes

圖7為斷奶仔豬回腸派伊爾淋巴小結(jié)中CD20+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組化切片圖，同樣，切片中呈棕色/紅棕色的細(xì)胞為CD20+淋巴細(xì)胞。從圖中可以發(fā)現(xiàn)，CD20+淋巴細(xì)胞有且僅存在于小腸派伊爾淋巴小結(jié)中，淋巴小結(jié)中也含有少量T淋巴細(xì)胞。利用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件上測(cè)得單位面積陽性細(xì)胞的平均光密度值，由圖8可以得知，各組之間CD20+淋巴細(xì)胞含量無顯著差異(P>0.05)。

圖7 回腸CD20+淋巴細(xì)胞石蠟免疫組 化切片圖(派伊爾淋巴小結(jié))Fig.7 Figure of ileum CD20+ lymphocytes paraffin immunohistochemical (Peyer’s patches)

圖8 回腸CD20+淋巴細(xì)胞平均光密度Fig.8 The mean optical density of ileum CD20+ lymphocytes

3 討 論

3.1 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白含量的影響

免疫球蛋白包括抗體和膜免疫球蛋白。膜免疫球蛋白是一種抗原受體，具有特異性識(shí)別抗原的作用?？贵w主要存在于體液中，尤其是血清。血清免疫球蛋白含量一定程度上反映了機(jī)體體液免疫狀況。血清中主要含有的免疫球蛋白包括IgA、IgM和IgG。IgM是初次免疫應(yīng)答的主要抗體，IgG是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，具有抗細(xì)菌、抗病毒等重要作用。由于母豬胎盤的特殊結(jié)構(gòu)，大分子物質(zhì)無法通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，新生仔豬免疫球蛋白幾乎全來自于初乳，但小腸黏膜的腸封閉現(xiàn)象(仔豬出生24～36 h后)會(huì)阻斷免疫球蛋白通過胞飲作用進(jìn)入血液循環(huán)[10]。而且大量研究發(fā)現(xiàn)，仔豬早期斷奶應(yīng)激會(huì)使血清中免疫球蛋白含量下降，機(jī)體合成抗體的能力受到抑制[11]。仔豬飼糧中添加酵母培養(yǎng)物被發(fā)現(xiàn)能顯著提高血清IgG和IgM含量[12]。岳文斌等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬飼糧中添加甘露寡糖也能顯著提高仔豬血清IgG含量。這與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似，在斷奶仔豬飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖能顯著提高斷奶仔豬血清IgG含量，但對(duì)血清IgM含量無顯著影響。IgA主要是由位于腸道黏膜下層漿細(xì)胞合成分泌，后進(jìn)入血液循環(huán)[14]。酵母壁多糖中甘露寡糖在提高血清IgA含量上有著重要的作用[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加酵母壁多糖能顯著提高斷奶仔豬血清IgA含量。

3.2 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清細(xì)胞因子含量的影響

細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞和一些非免疫細(xì)胞合成和分泌的一類調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的多肽或蛋白質(zhì)分子，它在動(dòng)物體內(nèi)含量較低，但具有高效作用。細(xì)胞因子在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等生理過程和急慢性炎癥等病理過程中發(fā)揮重要作用[16]。輔助性T(Th)細(xì)胞分為Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞， IL-2、IFN-γ和TNF-α是由Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，IL-6、IL-10是由Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。IL-2主要作用是促進(jìn)B細(xì)胞和自然殺傷(NK)細(xì)胞的分化和增殖，從而促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生。IL-10能夠一定程度抑制IL-1、IL-6和TNF-α的產(chǎn)生，并具有提高B細(xì)胞增殖和抗體產(chǎn)生的作用。IL-6是調(diào)節(jié)急性反應(yīng)的關(guān)鍵因子，還能促進(jìn)B細(xì)胞和T細(xì)胞的分化，通過抑制IL-1和TNF-α的作用來抑制炎癥反應(yīng)[17]。

現(xiàn)今，大部分試驗(yàn)研究表明酵母細(xì)胞壁成分與機(jī)體免疫機(jī)能存在不可分割的聯(lián)系，早在1987年，Seljelid等[18]就發(fā)現(xiàn)β-葡聚糖能夠刺激小鼠的巨噬細(xì)胞活力。隨后Djeraba等[19]發(fā)現(xiàn)甘露寡糖能夠激活雞巨噬細(xì)胞活力。Shen等[20]研究發(fā)現(xiàn)，添加酵母培養(yǎng)物能夠提高腸道中Th1細(xì)胞因子IFN-γ的表達(dá)。然而，本研究發(fā)現(xiàn)，酵母壁多糖能降低斷奶仔豬血清中IFN-γ含量，這可能是由于本試驗(yàn)與Shen等[20]研究所用仔豬斷奶日齡不同，28日齡斷奶仔豬與21日齡斷奶仔豬腸道發(fā)育情況不同，對(duì)產(chǎn)品的反應(yīng)也會(huì)存在一定的區(qū)別。其次，2個(gè)試驗(yàn)中，產(chǎn)品種類和添加量也不一樣。Shen等[20]試驗(yàn)中使用的產(chǎn)品為酵母培養(yǎng)物，而本試驗(yàn)使用的為酵母壁多糖，其中甘露寡糖和葡聚糖的效價(jià)存在較大差異。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加添加0.30%酵母壁多糖還能顯著提高斷奶仔豬血清IL-10含量。這與李玉欣[21]和Kawashima等[22]研究結(jié)果相似。此外，有研究發(fā)現(xiàn)添加β(1-3)(1-6)-D-葡聚糖能顯著提高仔豬血清IL-2含量，并能下調(diào)受脂多糖(LPS)刺激后血清TNF-α含量[23]。但本研究發(fā)現(xiàn)，酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬血清IL-2、IL-6和TNF-α含量均無顯著影響，但有提高斷奶仔豬血清IL-2含量的趨勢(shì)。綜上，酵母壁多糖可能促進(jìn)了T細(xì)胞由Th1型向Th2型細(xì)胞的轉(zhuǎn)變。

3.3 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬回腸CD4+、CD8+、CD20+淋巴細(xì)胞含量的影響

機(jī)體的大部分淋巴細(xì)胞主要存在于胃腸道和腸道相關(guān)淋巴組織[24]。相比于大腸，小腸擁有更多的免疫細(xì)胞，尤其是回腸中存在派伊爾淋巴小結(jié)。CD4+淋巴細(xì)胞是一種重要的免疫細(xì)胞，主要表達(dá)于Th細(xì)胞。CD8+淋巴細(xì)胞是T淋巴細(xì)胞的另一個(gè)亞群，又稱為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，在受到抗原刺激后，分化為效應(yīng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞和記憶細(xì)胞毒性T細(xì)胞。CD8+淋巴細(xì)胞還能夠特異性殺傷帶抗原的靶細(xì)胞。記憶毒性T細(xì)胞對(duì)抗原的靶細(xì)胞有記憶功能。CD20+淋巴細(xì)胞表達(dá)于除漿細(xì)胞外的各階段B淋巴細(xì)胞。在受抗原刺激后，會(huì)分化出大量的漿細(xì)胞，后合成分泌抗體發(fā)揮體液免疫功能。

此前，有研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激情況下肉雞和火雞，相比于飼喂基礎(chǔ)飼糧的對(duì)照組，飼糧中添加酵母細(xì)胞壁產(chǎn)品能提高盲腸淋巴結(jié)T淋巴細(xì)胞含量[25-26]。仔豬受LPS刺激時(shí)，酵母培養(yǎng)物能顯著提高血液CD4+淋巴細(xì)胞含量[27]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖能顯著提高斷奶仔豬回腸CD4+淋巴細(xì)胞含量，對(duì)回腸CD8+和CD20+淋巴細(xì)胞含量有提高趨勢(shì)但差異不顯著。Sauerwein等[14]研究發(fā)現(xiàn)，酵母細(xì)胞壁成分對(duì)育肥豬回腸上皮細(xì)胞CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞均無顯著影響。這可能是由于育肥豬已經(jīng)形成了一個(gè)良好的機(jī)體防御系統(tǒng)。而仔豬在斷奶后會(huì)受到一定的應(yīng)激且其防御系統(tǒng)發(fā)育不夠完善，酵母壁多糖可以提高腸道免疫功能。

酵母壁多糖對(duì)機(jī)體外周血免疫和腸道免疫的作用機(jī)制可能通過以下方式。首先，改善腸道CD4+淋巴細(xì)胞含量，促進(jìn)Th細(xì)胞由Th1型向Th2型細(xì)胞的轉(zhuǎn)變，抑制IFN-γ細(xì)胞因子產(chǎn)生，促進(jìn)IL-10細(xì)胞因子的產(chǎn)生，避免機(jī)體出現(xiàn)過激的炎癥反應(yīng)。其次，血清IgG和IgA含量的提高，使得機(jī)體的體液免疫提高?？v觀前期動(dòng)物試驗(yàn)與本試驗(yàn)研究結(jié)果，從斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腸道健康[28]和機(jī)體免疫性能等方面綜合考慮，酵母壁多糖在斷奶仔豬飼糧中適宜添加水平為0.30%。

4 結(jié) 論

① 酵母壁多糖可調(diào)節(jié)仔豬血清免疫球蛋白含量。飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖能顯著提高斷奶仔豬血清IgG含量，飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖還能顯著提高斷奶仔豬血清IgA含量。

② 酵母壁多糖能改善斷奶仔豬血清細(xì)胞因子含量。飼糧中添加0.15%、0.30%和0.45%酵母壁多糖能顯著降低斷奶仔豬血清IFN-γ含量，飼糧中添加0.30%酵母壁多糖還能顯著提高斷奶仔豬血清IL-10含量。

③ 酵母壁多糖對(duì)斷奶仔豬回腸淋巴細(xì)胞有一定的調(diào)節(jié)作用。飼糧中添加0.30%和0.45%酵母壁多糖能顯著提高斷奶仔豬回腸CD4+淋巴細(xì)胞含量。

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*Corresponding author, professor, E-mail: youjinm@163.com

(責(zé)任編輯 武海龍)

Effects of Yeast Cell Wall Polysaccharide on Peripheral Blood and Gut Immunity of Weaned Piglets

HE Qin WANG Zirui YOU Jinming*LUO Bowen LU Yafei LI Lanhai

(NutritionFeedDevelopmentEngineeringCenterofJiangxiProvince,KeyLaboratoryofAnimalNutritioninJiangxiProvince,JiangxiAgriculturalUniversity,Nanchang330045,China)

This experiment was conducted to determine the effects of yeast cell wall polysaccharide on peripheral blood and gut immunity of weaned piglets. The experiment was used a single factor experimental design method, a total of 180 piglets with the similar genetic background and health condition weaned at 21 days of age were randomly allotted to 4 groups with 5 replicates per group and 9 pigs per replicate. Pigs in the 4 groups were fed the experimental diets supplemented with 0 (control group), 0.15%, 0.30% and 0.45% yeast cell wall polysaccharide, respectively. The experiment lasted for 21 days. The results showed as follows: 1) compared with the control group, diets supplemented with 0.15%, 0.30% and 0.45% yeast cell wall polysaccharide significantly increased the serum immunoglobulin A content of weaned piglets (P<0.05), diets supplemented with 0.30% and 0.45% yeast cell wall polysaccharide significantly increased the serum immunoglobulin G content of weaned piglets (P<0.05). 2) Compared with the control group, diets supplemented with 0.15%, 0.30% and 0.45% yeast cell wall polysaccharide significantly decreased the serum interferon-γ content of weaned piglets (P<0.05), diets supplemented with 0.30% yeast cell wall polysaccharide significantly increased the serum interleukin-10 content of weaned piglets (P<0.05). Diets supplemented with yeast cell wall polysaccharide had no significant effects on the contents of interleukin-2, interleukin-6 and tumor necrosis factor-α in serum of weaned piglets (P>0.05). 3) Compared with the control group, diets supplemented with 0.30% and 0.45% yeast cell wall polysaccharide significantly increased the ileum CD4+lymphocytes content of weaned piglets (P<0.05), diets supplemented with yeast cell wall polysaccharide could increased the ileum CD8+and CD20+lymphocytes contents of weaned piglets to a certain extent, but the difference was not significant (P>0.05). These findings indicate that yeast cell wall polysaccharide may enhance the peripheral blood and gut immunity in weaned piglets，relieve the weaning stress of the piglets.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(7)：2502-2511]

yeast cell wall polysaccharide; weaned piglets; immunoglobulin; lymphocytes

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.07.035

2017-01-20

江西省重大科技專項(xiàng)(20143ACF60001)；江西省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(JXARS-03-營(yíng)養(yǎng)與飼料崗)

賀 琴(1993—)，女，江西蓮花人，碩士研究生，研究方向?yàn)樨i營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。E-mail： 171836219@qq.com

*通信作者：游金明，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： youjinm@163.com

S828

A

1006-267X(2017)07-2502-10