肢體缺血再灌注后肺損傷小鼠肺組織AT1R和Mas受體蛋白表達變化*

劉 帆， 王梟鷹， SHAHIN Ahmed， MUHAMMED Rafi-N， 李樹民， 楊秀紅

(華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系， 河北省慢性疾病重點實驗室， 唐山市慢性病臨床基礎(chǔ)研究重點實驗室， 河北 唐山 063000)

肢體缺血再灌注后肺損傷小鼠肺組織AT1R和Mas受體蛋白表達變化*

劉 帆， 王梟鷹， SHAHIN Ahmed， MUHAMMED Rafi-N， 李樹民， 楊秀紅△

(華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系， 河北省慢性疾病重點實驗室， 唐山市慢性病臨床基礎(chǔ)研究重點實驗室， 河北 唐山 063000)

目的： 通過觀察小鼠肢體缺血再灌注(LIR)后不同時點肺組織血管緊張素Ⅱ 1型受體(AT1R)和Mas受體蛋白表達與肺損傷的變化，探討局部組織AT1R和Mas受體蛋白表達失衡在LIR急性肺損傷(ALI)中的作用。方法：42只8周齡雄性ICR小鼠隨機分為7組，每組6只，其中1組作為對照組，其余6組為再灌注0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h和12 h模型組。模型組小鼠用橡皮圈結(jié)扎雙后肢根部，缺血2 h后剪斷橡皮圈，分別于再灌注后不同時點眼球取血處死小鼠。取肺組織計算臟器系數(shù)和濕/干重比；肺泡灌洗液細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度檢測；肺組織病理切片常規(guī)HE染色觀察肺組織形態(tài)變化并進行病理損傷評分；Western blot檢測肺組織AT1R和Mas受體蛋白的表達。結(jié)果：模型組小鼠肺臟器系數(shù)、濕/干重比、肺泡灌洗液細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度在LIR后顯著升高。病理學(xué)結(jié)果顯示，LIR后不同時點小鼠肺組織出現(xiàn)肺泡壁毛細(xì)血管擴張和充血、間質(zhì)和肺泡水腫、血管壁和支氣管壁炎癥細(xì)胞浸潤、肺泡間隔增厚、炎癥細(xì)胞浸潤及肺氣腫等不同程度的損傷變化，且隨著再灌注時間的延長，肺損傷評分逐漸升高。Western blot結(jié)果顯示，AT1R蛋白在再灌注0.5 h時開始升高，1 h達到最高，之后隨再灌注時間的延長，AT1R表達逐漸降低；Mas受體蛋白隨再灌注時間延長逐漸升高。結(jié)論：LIR引起急性肺損傷，并隨再灌注時間的延長損傷逐漸加重；AT1R和Mas受體蛋白表達的變化可能與小鼠LIR后急性肺損傷有關(guān)。

缺血再灌注； 肺損傷； 腎素-血管緊張素系統(tǒng)； 血管緊張素Ⅱ 1型受體； Mas受體

肢體缺血再灌注(limb ischemia-reperfusion，LIR)可引發(fā)急性肺損傷(acute lung injury，ALI)。大量研究證實，肺組織局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)穩(wěn)態(tài)失衡與急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。RAS是體內(nèi)重要的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)，包括血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)-血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)-血管緊張素Ⅱ 1型受體(angiotensinⅡ type 1 receptor，AT1R)與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(angiotensin-converting enzyme 2，ACE2)-血管緊張素(1-7)[angiotensin (1-7)，Ang (1-7)]-Mas受體2條軸，以循環(huán)RAS和局部RAS兩種方式發(fā)揮作用。ACE的效應(yīng)分子AngⅡ通過與AT1R結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)血壓和水鈉平衡，促炎癥、促增殖和收縮血管等作用。ACE2的效應(yīng)分子Ang (1-7)通過與Mas受體結(jié)合，發(fā)揮拮抗ACE-AngⅡ-AT1R 軸的作用。文獻研究已證實，在急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)病人和動物模型，ACE活性升高，ACE2活性下降，ACE2-Ang (1-7)-Mas軸在AngⅡ/AT1R介導(dǎo)的肺損傷中發(fā)揮了重要的作用[1-2]。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)，LIR小鼠肺組織ACE表達升高，ACE2表達降低；肺組織Ang II和Ang (1-7)表達均升高，再灌注早期Ang (1-7)高于Ang II，晚期Ang (1-7)低于Ang II；而再灌注后循環(huán)Ang (1-7)逐漸下降，Ang II逐漸升高；這些變化在ACE2 基因敲除的LIR小鼠加重，在ACE2轉(zhuǎn)基因LIR小鼠減輕[3]。結(jié)合文獻結(jié)果，我們推測，ACE-AngⅡ-AT1 軸和ACE2-Ang(1-7)-Mas軸的作用失衡，可能在再灌注導(dǎo)致的急性肺損傷中發(fā)揮重要作用。

本研究采用前期成熟方法復(fù)制再灌注急性肺損傷動物模型，觀察LIR小鼠再灌注后不同時點，肺組織AT1R和Mas受體蛋白的表達與肺損傷的變化，進一步探討ACE-AngⅡ-AT1 軸和ACE2-Ang (1-7)-Mas軸在LIR所致ALI中的作用。

材 料 和 方 法

1 實驗動物和主要試劑

隨機選取雄性8周齡野生型ICR小鼠42只，體重 25～35 g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供，在華北理工大學(xué)實驗動物中心SPF級動物房進行飼養(yǎng)，自由進食水。

AT1R抗體購自Santa Cruz；Mas受體抗體購自Alomone Labs；β-actin抗體購自杭州華安生物技術(shù)有限公司；RIPA組織蛋白裂解液、BCA蛋白濃度檢測試劑、彩色預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)分子量、Western blot用II 抗、ECL發(fā)光劑、醋酸纖維素膜、Western blot抗體稀釋液均購自碧云天生物技術(shù)研究所。

2 方法

2.1 動物分組 雄性8周齡野生型ICR小鼠42只隨機分為7組，每組6只。其中1組作為對照組，其余6組為模型組，分別為再灌后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h和12 h組，對照組不結(jié)扎雙側(cè)后肢，其余操作同模型組。

2.2 復(fù)制小鼠肢體缺血再灌注模型的建立 采用我室常規(guī)方法復(fù)制小鼠肢體缺血再灌注模型[3]。腹腔注射水合氯醛(3 mg/kg)麻醉小鼠，在雙后肢根部行橡皮圈結(jié)扎術(shù)，缺血2 h后剪斷橡皮圈，按摩雙后肢恢復(fù)血液灌注。分別于再灌注后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h和12 h摘除眼球，取血處死小鼠，留取肺組織，-80 ℃保存。

2.3 病理組織學(xué)方法檢測肺損傷 將一側(cè)肺浸泡于4%甲醛中固定，常規(guī)方法制作病理組織切片，光鏡下觀察肺組織病理變化。病變分為4種類型：肺泡壁毛細(xì)血管擴張充血;肺泡出血;肺泡壁和血管壁嗜中性粒細(xì)胞浸潤; 肺泡壁增厚。按照病變的嚴(yán)重程度分為5個等級：0-無損傷；1-輕度損傷(每個視野有≤25%損傷)；2-中度損傷(每個視野有26%～50%損傷)；3-重度損傷(每個視野有51%～75%損傷)；4-極重度損傷(≥76%彌漫性肺損傷，伴有大量炎細(xì)胞浸潤)。計算視野中4種病變損傷程度的得分總和； 10個隨機視野得分的平均值為每組最終得分[3]。

2.4 肺臟器系數(shù)和干濕質(zhì)量比測定 取小鼠雙肺組織，濾紙吸干肺組織表面血液，采用分析天平稱量雙肺重量，電子天平測量小鼠體重，臟器系數(shù)=臟器重量/體重×100%；取小鼠右肺上葉，濾紙吸干肺組織表面血液，采用分析天平稱濕重后，置于電熱真空干燥箱內(nèi)，60 ℃烘烤72 h，稱干重，計算濕/干重比(wet/dry weight ratio)。

2.5 支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度檢測 小鼠仰臥位固定后，行頸部正中切口，分離氣管，插入氣管導(dǎo)管，固定，以1 mL預(yù)冷的PBS行肺泡灌洗，停留2 min后收集灌洗液，反復(fù)灌洗3次，4 ℃下1 500 r/min離心10 min，收集上清液。血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞總數(shù)；BCA法檢測蛋白濃度。

2.6 Western blot檢測肺組織AT1R和Mas受體蛋白表達 每組稱取100 mg肺組織，加入1 mL蛋白裂解液RIPA，冰上超聲勻漿，反復(fù)3次；4 ℃下12 000 r/min離心15 min，取上清分裝。采用BCA 法測定上清液中的蛋白總濃度，并用裂解液調(diào)整蛋白濃度至6 g/L，與5×上樣緩沖液按4∶1混勻，煮沸10 min；進行SDS-PAGE，硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉 1 h， I 抗4 ℃孵育過夜(AT1R抗體1∶300，Mas受體抗體1∶300，β-actin 抗體1∶1 000)；次日用TBST洗膜3次，每次10 min； II 抗37 ℃孵育1 h，TBST洗膜3次，每次10 min；ECL顯影、成像。利用Image Lab軟件對結(jié)果進行相對定量分析。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用Dunnett’s T3檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 肺臟器系數(shù)和濕/干重比

肺臟器系數(shù)和肺濕/干重比實驗結(jié)果見圖1。與對照組相比，缺血2 h，再灌注1 h、2 h、4 h、6 h和12 h模型組小鼠肺臟器系數(shù)均升高，以4 h組升高最為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與對照組相比，再灌注0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h和12 h模型組小鼠肺濕/干重比也出現(xiàn)升高，以4 h組升高最為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且與肺臟器系數(shù)變化趨勢一致。

Figure 1.The organ coefficient (A) and wet/dry weight ratio (B) of lung tissue of LIR mice at different time points. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vs0 h.

圖1 缺血再灌注不同時點小鼠肺臟器系數(shù)和濕/干重比

2 支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度

LIR后支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度見圖2。與對照組相比，再灌注0.5 h，細(xì)胞總數(shù)開始升高，2 h顯著升高(P<0.05)，4 h達到最高(P<0.01)，此后逐漸下降；肺泡灌洗液中蛋白濃度，依灌注時間的延長逐漸升高(P<0.05)，至再灌注4 h升高更為顯著(P<0.01)。

Figure 2.The cell number (A) and protein concentration (B) in BALF of LIR mice at different time points. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vs0 h.

圖2 缺血再灌注不同時點小鼠支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞計數(shù)和蛋白濃度

3 肺組織病理變化及肺損傷評分

肉眼觀模型組小鼠肺組織體積增大，呈暗紅色。光鏡下觀察：對照組肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁完整，間質(zhì)無充血、水腫和炎癥細(xì)胞浸潤；模型組出現(xiàn)以下病理變化：肺泡壁毛細(xì)血管擴張，充血；肺泡滲出、血管壁和支氣管壁炎癥細(xì)胞浸潤、間質(zhì)水腫；部分肺泡間隔斷裂，肺泡融合，形成肺氣腫；肺泡間隔增厚伴炎癥細(xì)胞浸潤。

與對照組相比，LIR 0.5 h肺泡壁毛細(xì)血管擴張充血，血管壁和支氣管壁炎癥細(xì)胞浸潤，損傷評分升高(P<0.01)；隨著再灌注時間的延長，肺組織損傷逐漸加重。鏡下可見肺泡間隔明顯增厚，大量炎癥細(xì)胞浸潤、肺組織邊緣肺氣腫等病理改變，肺組織損傷評分逐步升高，各模型組與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。而LIR 6 h和12 h組滲出改變較4 h組有所好轉(zhuǎn)，病理改變以炎癥細(xì)胞浸潤和肺泡間隔增厚為主，見圖3。

Figure 3.The lung pathological damages (HE staining, ×200) and lung injury scores of the LIR mice at different time points. a: normal lung tissue; b: telangiectasia and congestion; c: inflammatory cell infiltration around vascular and bronchi, tracheal hemorrhage; d: emphysema; e， f: thickened alveolar septa and inflammatory cell infiltration. Mean±SD.n=6.**P<0.01vs0 h.

圖3 缺血再灌注不同時點小鼠肺損傷的病理變化和肺組織損傷的評分

4 局部肺組織AT1R和Mas受體蛋白表達

與對照組相比，AT1R蛋白在缺血2 h再灌注0.5 h時開始升高(P<0.05)，1 h達到最高(P<0.01)；之后，隨灌注時間的延長，AT1R表達總體趨勢逐漸降低。與之相應(yīng)的Mas受體蛋白表達出現(xiàn)了不同的變化。與對照組相比，Mas受體蛋白隨灌注時間延長逐漸升高，4 h開始顯著升高，12 h達到峰值(P<0.01)。計算再灌注不同時點小鼠肺組織AT1R與Mas受體蛋白表達的比值，可見AT1R/Mas受體自再灌注1 h逐漸降低，4 h開始顯著降低(P<0.01)，見圖4。

討 論

LIR是一種臨床常見的病理生理過程，多見于斷肢再植、四肢大血管栓塞或損傷恢復(fù)血流及長時間應(yīng)用止血帶等情況。再灌注損傷不僅存在于缺血組織，尚可累及肺臟、肝臟、腎臟等遠(yuǎn)隔器官。肺臟是最常受累的器官之一，但確切的機制尚未完全明了。近年來的研究證實，循環(huán)和肺組織局部RAS穩(wěn)態(tài)失衡與肺部疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究顯示，高氧誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠，ACE、Ang II和AT1受體顯著上調(diào)[4]，腎素轉(zhuǎn)基因小鼠對脂多糖更加敏感，所致肺損傷也更為嚴(yán)重[5]。內(nèi)毒素休克家兔肺局部Ang II持續(xù)升高，氧合指數(shù)下降，肺功能受損[6]。盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)小鼠RAS系統(tǒng)激活，小鼠出現(xiàn)急性肺損傷，肺組織W/D明顯增加，血氧含量下降及明顯的肺損傷表現(xiàn)[7]。這些結(jié)果說明RAS的過度激活參與了肺損傷的發(fā)生。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，LIR小鼠肺組織ACE/ACE2和Ang II/Ang (1-7)表達失衡在LIR誘發(fā)的ALI中具有重要作用[3]。本研究在此基礎(chǔ)上，觀察了LIR后肺組織RAS兩條作用軸在受體水平(AT1R和Mas受體)蛋白表達的變化，進一步探討RAS在LIR急性肺損傷中的作用。

Figure 4.The protein expression of AT1R and Mas receptor in the lung tissues of LIR mice at different time points. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vs0 h.

圖4 缺血再灌注不同時點小鼠肺組織AT1R和Mas受體蛋白的表達

Ang II是一種重要的血管損傷因子，可通過AT1R介導(dǎo)引起內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變性和凋亡，在多種器官損傷中發(fā)揮作用。Ang II與AT1R結(jié)合，可通過上調(diào)NADPH氧化酶活性，促進白細(xì)胞-內(nèi)皮相互作用，進而引起ALI早期肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[8]，降低肺泡液體清除率[9-11]，增加肺泡毛細(xì)血管壁通透性。此外，Ang II通過AT1R，顯著誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致上皮屏障功能受損、通透性增加[11]。因此，Ang II對肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷均導(dǎo)致肺泡滲出液和蛋白質(zhì)含量的增加。研究顯示，在脂多糖誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷中，肺組織Ang II和AT1R顯著升高[12]； AT1R阻斷劑則可抑制肺上皮細(xì)胞[12-13]和血管內(nèi)皮細(xì)胞[14]凋亡，減輕肺損傷程度。我們的研究結(jié)果顯示，AT1R蛋白在LIR后0.5 h和1 h增加；且肺組織出現(xiàn)充血、水腫， W/D比值和臟器系數(shù)增大，BALF細(xì)胞總數(shù)和蛋白含量增加。結(jié)合前期研究結(jié)果：LIR后肺組織ACE和Ang II表達上調(diào)[3]，提示LIR早期ACE表達增加，提高了其效應(yīng)分子Ang II的水平，高水平的Ang II可能通過AT1R促進ALI的發(fā)生。

Mas受體是Ang (1-7)發(fā)揮作用的主要受體。體內(nèi)外實驗表明，Ang (1-7)與Mas受體結(jié)合后，可通過阻斷相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，發(fā)揮抑制肺成纖維細(xì)胞增殖、遷移，抑制炎癥反應(yīng)，防止肺泡上皮細(xì)胞凋亡等作用[15-18]。Ang (1-7)可減輕LPS刺激誘導(dǎo)的肺組織炎癥、水腫和肺纖維化，顯著降低肺損傷評分，改善肺功能，增加血氧飽和度[1, 15]。Sampaio等[19]證實Ang (1-7)通過Mas受體激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能。Ang (1-7)表達減少時，肺組織炎癥細(xì)胞因子增加，膠原過度沉積。Mas受體激動劑的應(yīng)用可減輕大鼠損傷肺組織中性粒細(xì)胞浸潤，預(yù)防肺動脈高壓和右心室肥大的發(fā)生[20]。靶向抑制Mas基因的表達，Ang (1-7)的作用明顯下降[21]。我們的結(jié)果顯示，LIR早期肺組織Mas受體蛋白表達水平較低。因此我們推測，Ang (1-7)[3]和Mas受體蛋白的低表達，也是肺損傷發(fā)生的原因之一。

Ang (1-7)激活Mas受體，使其表達增加[22]；同時，Ang (1-7)還是內(nèi)源性AT1R拮抗劑，可以與AT1R競爭性結(jié)合，下調(diào)AT1R[23]。雖然本研究中LIR早期AT1R蛋白表達水平暫時升高，但此時肺組織Ang (1-7)高于Ang II[3]，高水平的Ang (1-7) 一方面使Mas受體表達逐漸增加，另一方面使AT1受體表達逐漸降低，二者呈現(xiàn)相反的變化趨勢，與文獻研究結(jié)果一致[22-23]。此外，Mas受體也是AT1R的生理性拮抗劑，它可能通過改變AT1R的轉(zhuǎn)運特性，降低AT1R的表達[24]。結(jié)合本研究結(jié)果，我們認(rèn)為，AT1R和Mas受體蛋白差異性表達參與了LIR急性肺損傷。

如前所述，Ang (1-7)和Mas受體對肺損傷發(fā)揮保護作用，而研究結(jié)果卻顯示肺損傷程度逐漸加重，推測有2種原因可以解釋：一是AT1R和Mas受體之間存在相互作用，它們通過跨膜區(qū)域的疏水作用和分子間二硫鍵形成異源二聚體[24-25]。AT1R和Mas受體的共表達，使其與AngⅡ結(jié)合的能力增加了135%[24]，此時肺組織Ang II也較高[3]，因而肺損傷繼續(xù)加重。雖然Ang (1-7)和Mas受體的表達逐漸升高，但還不足以對抗AngⅡ和AT1受體的作用。另外一個原因是，我們只觀察了缺血再灌注后12 h的肺損傷變化，觀察時間相對較短；Chen等[15]報道，脂多糖誘導(dǎo)的肺損傷變化在損傷后7 d有所恢復(fù)，而外源性給予Ang (1-7)干預(yù)，在損傷后3 d才能通過Mas受體發(fā)揮保護作用。雖然如此，研究結(jié)果已顯示出Ang (1-7)和Mas受體逐漸增加的趨勢，并在4 h開始明顯升高。這種升高雖不能逆轉(zhuǎn)肺損傷的進展，但從病理組織學(xué)上部分改善了肺泡壁和毛細(xì)血管壁的通透性，減少了滲出。因此，再灌注6 h和12 h的肺組織臟器系數(shù)、W/D、BALF細(xì)胞總數(shù)和蛋白含量較4 h略有下降(除BALF細(xì)胞總數(shù)外)。此外，類似的研究結(jié)果在課題組對LIR腎損傷中AT1R和Mas受體蛋白表達的研究中也得到證實[26]。

綜合大量文獻及本研究結(jié)果，缺血再灌注后局部肺組織AT1R蛋白和Mas受體蛋白的差異性表達可能參與了急性肺損傷的發(fā)生與發(fā)展，但其與急性肺損傷發(fā)生的關(guān)系及相關(guān)機制，還需進一步深入研究。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅 森)

Changes of lung AT1R and Mas receptor protein expression in lung tissue of mice with lung injury after limb ischemia-reperfusion

LIU Fan, WANG Xiao-ying, SHAHIN Ahmed, MUHAMMED Rafi-N, LI Shu-min, YANG Xiu-hong

(DepartmentofPhysiology,SchoolofBasicMedicalSciences,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology，HebeiKeyLaboratoryforChronicDiseases，TangshanKeyLaboratoryforPreclinicalandBasicResearchonChronicDiseases,Tangshan063000,China.E-mail:ljkyxhljn@163.com)

AIM: To explore the role of imbalance of local renin-angiotensin system (RAS) in lung injury by observing the changes of angiotensin Ⅱ type 1 receptor (AT1R) and Mas receptor protein expression in the lung and the degree of lung injury subject to limb ischemia-reperfusion (LIR) in the mice. METHODS: Male ICR mice (n=42, 8 weeks old) were randomly assigned into 7 groups (6 in each group), including control group and 6 model groups with LIR of 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h and 12 h reperfusion. Tourniquets were used to block the blood flow of the hind limbs of the ICR mice and were released after 2 h ischemia to initiate reperfusion. The mice were sacrificed by eyeball blood withdrawal at different time points after reperfusion. The organ coefficient and wet/dry weight ratio (W/D) of the lung tissue were calculated. Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was taken for cell counting and protein concentration measurement. The histopathological changes of the lung tissues was observed, and the pathological score was calculated. The protein expression of AT1R and Mas receptor in the lung tissues was determined by Western blot. RESULTS: The organ coefficient, W/D of lung tissue, and cell number and protein concentration in BALF of model groups were significantly higher than those in control group after LIR. The pathological changes were found in the lung tissue of model mice, including alveolar capillary dilation and congestion， edema， inflammatory cell infiltration in peripheral vascular, alveolar and bronchial walls， alveolar septal thickening and inflammatory cell infiltration. The lung injury score was elevated gradually along with the extension of reperfusion time. The protein expression of AT1R began to increase at reperfusion time points of 0.5 h and 1 h. With the extension of reperfusion time, the protein expression of AT1R decreased gradually. Conversely, the protein expression of Mas receptor increased gradually with prolonged reperfusion. CONCLUSION: LIR induces acute lung injury gradually. The imbalance of AT1R and Mas receptor expression may be involved in the damage process.

Ischemia-reperfusion; Lung injury; Renin-angiotensin system; AngiotensinⅡ type 1 receptor; Mas receptor

1000- 4718(2017)07- 1264- 07

2016- 09- 23

2017- 04- 05

國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81372029)；河北省自然科學(xué)基金資助項目(No. H2015209153)；國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(No. 201510081007)； 河北省研究生創(chuàng)新資助項目(No. CXZZBS2017127)

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.07.018

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