ILC2通過激活STAT6和分泌IL-13調(diào)節(jié)慢性腎功能衰竭患者的免疫功能*

孫占朋， 李 欣， 楊 焰， 黎 博， 魏紅艷， 胡春林， 付清玲， 廖曉星△

(1中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科，2廣東省人民醫(yī)院急危重癥醫(yī)學(xué)部， 廣東 廣州 510080；3林芝市人民醫(yī)院， 西藏 林芝 860000； 4中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科， 廣東 廣州 510080)

ILC2通過激活STAT6和分泌IL-13調(diào)節(jié)慢性腎功能衰竭患者的免疫功能*

孫占朋1， 李 欣2,3， 楊 焰1， 黎 博1， 魏紅艷1， 胡春林1， 付清玲4， 廖曉星1△

(1中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科，2廣東省人民醫(yī)院急危重癥醫(yī)學(xué)部， 廣東 廣州 510080；3林芝市人民醫(yī)院， 西藏 林芝 860000；4中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科， 廣東 廣州 510080)

目的： 探討II型固有淋巴細(xì)胞(ILC2)在慢性腎衰發(fā)生發(fā)展中的作用及其可能機(jī)制。方法: 選擇中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院2016年3月～2016年12月入院的慢性腎功能衰竭患者36例，選取同期健康體檢者32例為對照。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中ILC2的比例；ELISA技術(shù)檢測血漿中白細(xì)胞介素(IL)-13的濃度；提取慢性腎衰患者及健康對照者PBMC后分別分為3組(對照組、細(xì)胞因子刺激組、干預(yù)組)進(jìn)行體外培養(yǎng)3 d后，ELISA法測定上清液中IL-13濃度；Western blot法對健康對照者PBMC在刺激前及刺激后15 min、30 min、1 h、2 h的轉(zhuǎn)錄活化因子6(STAT6)的磷酸化水平進(jìn)行檢測。結(jié)果: 慢性腎功能衰竭患者PBMC中ILC2比例及血漿IL-13濃度均較健康人高(P<0.05)； 體外培養(yǎng)上清液中，慢性腎功能衰竭患者的3個亞組中IL-13濃度均較健康人高(P<0.05)，且2類人群中均呈現(xiàn)出細(xì)胞因子刺激組較對照組升高，干預(yù)組較細(xì)胞因子刺激組降低的現(xiàn)象；Western blot結(jié)果顯示p-STAT6的蛋白水平隨時間的延長逐漸增高。結(jié)論: 慢性腎衰患者外周血中ILC2的比例升高，同時ILC2內(nèi)STAT6活化并分泌大量IL-13，介導(dǎo)Th2細(xì)胞的極化而調(diào)節(jié)免疫。

II型固有淋巴細(xì)胞； 流式細(xì)胞術(shù)； 慢性腎功能衰竭； 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子6； 白細(xì)胞介素-13

2型固有淋巴細(xì)胞(type 2 innate lymphoid cell，ILC2)是近期發(fā)現(xiàn)的一類新型的免疫細(xì)胞，該類細(xì)胞在固有免疫、淋巴組織形成、組織重塑、腫瘤以及代謝穩(wěn)態(tài)中具有重要的作用。ILC2具有典型的淋巴細(xì)胞的形態(tài)，但缺乏T細(xì)胞、B細(xì)胞和髓系細(xì)胞的標(biāo)志，且高表達(dá)IL-7受體(CD127)。ILC2早期被不同的研究者所發(fā)現(xiàn)，分別被命名為NHCs、nuocyte或Ih2[1-4]。此外，有研究表明ILC2高表達(dá)MHCⅡ類分子和共刺激分子[5]。ILC2與Th2細(xì)胞相類似，廣泛存在于腸、腸系膜淋巴結(jié)、肺、肺引流淋巴結(jié)、氣管、皮膚、動物脂肪和血液中。目前已有大量研究表明ILC2能快速分泌Th2型細(xì)胞因子如IL-5、IL-13等，并且是其主要的細(xì)胞來源。

有文獻(xiàn)表明，ILC2在哮喘、變應(yīng)性鼻炎等疾病患者中含量升高，且ILC2可能通過產(chǎn)生IL-5、IL-13導(dǎo)致疾病進(jìn)展。體外研究發(fā)現(xiàn)IL-25、IL-33可以激活I(lǐng)LC2，導(dǎo)致IL-5、IL-13等細(xì)胞因子大量產(chǎn)生[6-7]。慢性腎功能衰竭(chronic renal failure，CRF)在其疾病進(jìn)程中存在著長期的慢性炎癥，但CRF中關(guān)于ILC2的比例及功能變化情況尚未明確。為此，我們擬以CRF的患者為研究對象，采用密度梯度離心法提取出其中的單個核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)，觀測其中ILC2細(xì)胞的比例及功能變化情況，并探索可能的干預(yù)方式，以期為CRF的診治提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 標(biāo)本獲取

本課題獲得中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的同意和批準(zhǔn)，以及患者或家屬的同意并簽訂知情同意書。選擇2016年3月～2016年12月期間我院收治明確診斷為CRF的患者36例，其中男性20例，女性16例，年齡(54.3±16.3)歲。所有患者的臨床和實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查均符合CRF的診斷標(biāo)準(zhǔn)；排除風(fēng)濕免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等)、腫瘤、支氣管哮喘、變應(yīng)性鼻炎等疾病；患有精神疾患、嚴(yán)重心腦血管疾病、近2月內(nèi)做過胸腹部手術(shù)等患者及有大面積燒傷者亦不列為選擇對象。選取同期于我院門診健康體檢者32例作為對照組，其中男性18例，女性14例，平均年齡(52.8±17.4)歲，既往無泌尿系統(tǒng)疾病史，經(jīng)詢問病史、體格檢查等均未發(fā)現(xiàn)異常。兩組性別、年齡構(gòu)成差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 ILC2的檢測 診斷為CRF后取5 mL肝素抗凝管采集全血標(biāo)本，于3 h內(nèi)進(jìn)行外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)的分離，采用Ficoll密度梯度離心，獲取外周血單個核細(xì)胞,細(xì)胞總量達(dá)1～5×106個。血漿凍存于-80 ℃冰箱備用。分離出的PBMC根據(jù)ILC2的表面標(biāo)記進(jìn)行染色[染色方案為FITC Lin-(BD)、FITC FceRI-(eBioscience)、PE CRTH2+(BD)、PE-CyTM7 CD127+(eBioscience)]，4 ℃孵育30 min，PBS重懸，300×g離心5 min后去上清，再次加入300 μL PBS重懸，轉(zhuǎn)移入流式管內(nèi)，10色科研用分析型流式細(xì)胞儀(Beckman-Gallios)檢測ILC2占PBMC的比例(若不能立刻上機(jī)檢測，需使用4%多聚甲醛固定，但一般于固定12 h內(nèi)上機(jī))，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。在淋巴細(xì)胞中標(biāo)記為Lin-(CD2-、CD3-、CD14-、CD16-、CD19-、CD56-、CD235a-)、FceRI-、CRTH2+和CD127+的細(xì)胞即為ILC2。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 同時獲取健康體檢者與CRF患者的PBMC，將其接種于96孔板內(nèi)，每位患者或健康對照(healthy control，HC)者的PBMC細(xì)胞分別分為3組，第1組為對照組，除培養(yǎng)基外不加任何成分；第2組為細(xì)胞因子刺激組(cytokine組)，加入刺激劑IL-2(50 μg/L)、IL-25(10 μg/L)和IL-33(10 μg/L)；第3組為干預(yù)組，除加入上述刺激劑外，再加入治療用甲強(qiáng)龍(methylprednisolone，MP; 10 mg/L)。于含5% CO2的37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)3 d。

2.3 IL-13測定 嚴(yán)格按照IL-13 ELISA檢測試劑盒(Amershan life science)說明書操作。取凍存血漿，室溫解凍后，ELISA測定IL-13的含量；收集96孔板內(nèi)培養(yǎng)3 d后的細(xì)胞及培養(yǎng)液后離心，取上清液進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋后行ELISA檢測。將100 μL樣本加入IL-13單抗包被孔中，加入已標(biāo)記生物素的IL-13多抗，形成雙夾心抗原抗體復(fù)合物，再加入酶標(biāo)的生物素抗體，加入酶的底物發(fā)生顯色反應(yīng)，酶標(biāo)儀450 nm處讀吸光度值。描繪不同稀釋濃度IL-13標(biāo)準(zhǔn)品曲線，計(jì)算樣品IL-13含量，以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4 Western blot法檢測信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子6(signal transducers and activators of transcription 6，STAT6)的磷酸化水平 對健康人PBMC在加刺激劑(IL-2、IL-25、IL-33)前及刺激后15 min、30 min、1 h、 2 h的p-STAT6蛋白水平進(jìn)行檢測。取健康人PBMC細(xì)胞，提取全蛋白，用BCA蛋白定量試劑盒對所提蛋白進(jìn)行定量，并進(jìn)行蛋白預(yù)處理。取50 μg蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳, 按濕轉(zhuǎn)法將電泳產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到PVDF 膜, 5%的脫脂奶粉封閉2 h, 滴加 I 抗4 ℃過夜，TBST洗膜(5 min、3次), 滴加HRP標(biāo)記的 II 抗，室溫下孵育1 h，TBST 洗膜(5 min、3 次)，膠片曝光，顯影、定影，并計(jì)算蛋白灰度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用Graph Pad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，兩組間差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)方法進(jìn)行比較；多組比較采用單因素方差分析，用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行均數(shù)間兩兩比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 CRF患者中ILC2比例的變化

在CRF組中ILC2在PBMC中的占比為(0.03±0.02)%。ILC2在PBMC中的比例消除了Lin-細(xì)胞和PBMC絕對數(shù)量變化帶來的影響，最能反應(yīng)其在炎癥反應(yīng)中的功能活化情況，這一比例在CRF組顯著高于健康對照組(P<0.05)，見圖1。

2 CRF患者血漿中IL-13含量的變化

CRF組患者血漿中IL-13的含量為(2.58±0.73) ng/L，健康對照組血漿中IL-13的含量為(0.84±0.58) ng/L，兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

3 體外細(xì)胞因子刺激及激素干預(yù)后IL-13含量的變化

CRF患者PBMC體外培養(yǎng)的上清液中，對照組、細(xì)胞因子刺激組和干預(yù)組的IL-13的含量分別為(12.77±8.01) ng/L、(454.54±339.60) ng/L和(114.57±58.47) ng/L；在健康成年人組，上述3組IL-13的含量分別為(1.26±0.67) ng/L、(66.06±18.24) ng/L和(8.34±1.99) ng/L。CRF患者的細(xì)胞因子刺激組IL-13含量較對照組顯著升高(P<0.01)，干預(yù)組IL-13的含量較刺激組有所下降(P<0.01)，健康人亞組亦表現(xiàn)出這一規(guī)律，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CRF患者PBMC體外培養(yǎng)的上清液中對照組、細(xì)胞因子刺激組和干預(yù)組的IL-13含量均較健康人升高，且兩兩相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖3。

Figure 1.Ratio of ILC2 in total PBMCs. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsHC group.

圖1 PBMC中ILC2的流式細(xì)胞術(shù)分析

Figure 2.IL-13 concentration in plasma. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsHC group.

圖2 CRF患者與健康人血漿中IL-13含量的比較

Figure 3.Changes of IL-13 content in， PBMCinvitro. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsHC；#P<0.05vscontrol；△P<0.05vscytokine.

圖3 CRF患者與健康人PBMC體外培養(yǎng)干預(yù)后IL-13含量的變化

4 PBMC中p-STAT6活化情況

Western blot結(jié)果顯示p-STAT6的蛋白水平隨細(xì)胞因子刺激時間的延長逐漸增高，見圖4。這表明p-STAT6在刺激劑的作用后逐漸激活。

Figure 4.The protein levels of p-STAT6 after stimulation. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 min group.

圖4 健康人PBMC體外刺激后不同時點(diǎn)p-STAT6蛋白水平的比較

討 論

ILC2起源于骨髓淋巴祖細(xì)胞，在轉(zhuǎn)錄因子RORα和GATA3的調(diào)控下發(fā)育成熟，其在發(fā)育和形態(tài)上屬于淋巴細(xì)胞譜系，但不表達(dá)T細(xì)胞或B細(xì)胞表面的特異性識別受體TCR或BCR，不表達(dá)譜系發(fā)育分子Lineage[8]。人ILC2特異性表達(dá)IL-7受體α鏈(CD127)以及Th2細(xì)胞的化學(xué)誘導(dǎo)趨向性受體CRTH2；在IL-33、IL-25及胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，TSLP)的刺激下可產(chǎn)生大量2型細(xì)胞因子[9]。小鼠實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)ILC2可以對抗寄生蟲感染，通過分泌大量IL-13使杯狀細(xì)胞大量分泌黏液、平滑肌收縮以清除寄生蟲[7]。

2型細(xì)胞因子既可以由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，也可以由ILC2產(chǎn)生；然而IgE的產(chǎn)生主要還是依賴T細(xì)胞分泌的2型細(xì)胞因子。ILC2在IgE介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中所起作用較小，充其量為輔助作用。結(jié)合臨床實(shí)踐中，很多患者并無IgE升高證據(jù)，推測ILC2在Th2免疫反應(yīng)主導(dǎo)的疾病中是Th2細(xì)胞因子的重要來源，且ILC2的作用不依賴T細(xì)胞和B細(xì)胞。

IL-13是一種重要的Th2細(xì)胞因子?，F(xiàn)已經(jīng)明確，IL-13是一種10 kD含有112個氨基酸的蛋白質(zhì)，3個α螺旋疏水結(jié)構(gòu)構(gòu)成其核心。其編碼基因位于第5條染色體長臂的3區(qū)1帶(5q31)，由4個外顯子和3個內(nèi)含子構(gòu)成[10]。IL-13對單核巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等具有多種生物學(xué)活性。Minty等[11]報(bào)道，IL-13可明顯抑制由細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α等細(xì)胞因子，在急慢性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮抗炎作用。

人 IL-13 主要由 CD4、CD8 T 細(xì)胞產(chǎn)生，部分由肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞分泌。IL-13 通過與細(xì)胞表面的IL-13受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。已經(jīng)證實(shí)多種免疫性腎小球疾病存在NO產(chǎn)生亢進(jìn)，IL-13可抑制NO產(chǎn)生及NO合成酶mRNA表達(dá)，因此IL-13在腎小球腎炎發(fā)病中發(fā)揮著重要作用[12]。Lakkis等[13]的實(shí)驗(yàn)表明，用抗腎小球基膜抗體誘發(fā)大鼠腎小球腎炎后，測得IL-13 mRNA的表達(dá)顯著增高，提示IL-13在調(diào)節(jié)腎臟炎癥中有重要意義。

慢性腎衰竭是各種原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的共同轉(zhuǎn)歸。IL-13作為多功能的免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子在腎臟病中的表達(dá)和作用機(jī)制的研究已備受重視。有研究顯示CRF患者血漿中IL-13水平較正常對照組增高，且隨著腎功能損害程度的加重而增高，至尿毒癥時達(dá)最高，且與肌酐呈負(fù)相關(guān)[14-15]，從而推測CRF患者血漿IL-13增加，可能作為一種重要的防御機(jī)制拮抗腎小球系膜細(xì)胞的增殖和炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的損害作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CRF患者PBMC中ILC2的比例明顯升高，與健康對照組相比差異顯著，且同時血漿中IL-13水平明顯高于正常人，推測在CRF患者常有低水平的內(nèi)毒素血癥發(fā)生，機(jī)體處于炎癥狀態(tài)，受炎癥刺激，外周血中PBMC處于激活狀態(tài)，尤其是ILC2體積增大，功能被激活，炎癥因子產(chǎn)生增加，同時IL-13分泌也隨之增加，以拮抗炎癥介質(zhì)生物活性，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。

體外刺激結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在IL-2、IL-25和IL-33聯(lián)合刺激下，無論是健康人還是CRF患者，IL-13的水平顯著增高，且CRF組較健康對照組升高更為明顯，進(jìn)一步證明IL-13的分泌主要來自于ILC2細(xì)胞功能的激活，而非T細(xì)胞。再加入激素干預(yù)后，健康對照組和CRF組IL-13的分泌量均較不加激素組下降，說明了激素對炎癥反應(yīng)的抑制作用，也為臨床上慢性腎炎、慢性腎衰患者的激素治療提供了新的依據(jù)。

STAT是一種新型的轉(zhuǎn)錄因子家族，可與靶基因調(diào)控區(qū)DNA結(jié)合，且與酪氨酸磷酸化信號偶聯(lián)，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[16-17]。哺乳動物的STAT家族成員包括STAT1(αβ)、STAT2、STAT3(αβγ)、STAT4、STAT5a、STAT5b、STAT6等共7種[18]。新近研究發(fā)現(xiàn)，STAT6在Th2分化中起關(guān)鍵作用，而且是Th2分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子，可促進(jìn)Th2細(xì)胞增殖和產(chǎn)生IL-4、IL-13等細(xì)胞因子，使Th1/Th2比例失衡[19]。

STAT6在胞質(zhì)內(nèi)是作為一種潛在的單體形式存在。當(dāng)IL-13同膜受體(IL-4Rα)結(jié)合，酪氨酸系統(tǒng)被激活后進(jìn)而激活胞漿內(nèi)STAT6，引起該蛋白Y641位點(diǎn)上的酪氨酸殘基磷酸化，激活的SH2區(qū)域發(fā)生同源或異源二聚化而形成二聚體；二聚體進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與特定的DNA位點(diǎn)結(jié)合，引起相關(guān)基因(如IgE、IL-4R、eotaxin等)的表達(dá)。在生理情況下正常細(xì)胞STAT6的配體依賴性激活是一個短暫的過程，STAT6 蛋白的異常表達(dá)與許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)。STAT6 不僅誘導(dǎo)并確保Th細(xì)胞分化為Th2，為細(xì)胞表型維持所必需，同時可使已經(jīng)分化的Th1細(xì)胞重新表現(xiàn)出Th2的表型特征。

本實(shí)驗(yàn)中正常人PBMC中p-STAT6隨時間的延長表達(dá)量逐漸增高，表明在刺激劑的作用下，p-STAT6逐漸被IL-13通過一系列反應(yīng)激活，產(chǎn)生相應(yīng)的抗炎作用。綜上，ILC2可能通過調(diào)控STAT6所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)來調(diào)控慢性腎衰患者免疫系統(tǒng)。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 余小慧)

ILC2 regulates chronic renal failure patients’ immunity by secretion of IL-13 through activating of STAT6

SUN Zhan-peng1, LI Xin2, 3, YANG Yan1, LI Bo1, WEI Hong-yan1, HU Chun-lin1, FU Qing-ling4, LIAO Xiao-xing1

(1DepartmentofEmergencyMedicine,TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,2DepartmentofEmergency&CriticalCareMedicine,GuangdongProvincialPeople’sHospital,Guangzhou510080,China;3ThePeople’sHospitalofLinzhiCity,Linzhi860000,China;4DepartmentofOtorhinolaryngology,TheFirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China.E-mail:liaowens@163.com)

AIM: To explore the effect and possible mechanism of type 2 innate lymphoid cell (ILC2) on the development of chronic renal failure (CRF). METHODS: The patients with chronic renal failure (n=36) in the Fist Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University from March 2016 to December 2016 were selected, and 32 healthy persons in the same period were enrolled in the study for control. The proportion of ILC2 in the PBMC of CRF patients and healthy controls was detected by flow cytometry, IL-13 concentration in the plasma was measured by ELISA. The isolated PBMCs from the patients and healthy persons were divided into 3 groups (control group, cytokine group, intervention group) and culturedinvitrofor 3 days, respespestively， then IL-13 concentration was measured by ELISA. The protein levels of phosphorylated signal transducers and activators of transcription 6 (p-STAT6) in the PBMC of healthy controls before stimulation and after stimulation for 15 min, 30 min, 1 h, 2 h were determined by Western blot. RESULTS: The proportion of ILC2 in the PBMC and the plasma IL-13 concentration of CRF patients was higher than that in the healthy controls (P<0.05). In the culture supernatantinvitro, IL-13 concentration in the 3 subgroups of CRF patients (control group, cytokine group, intervention group) were all higher than that in the healthy controls (P<0.05), both the 2 groups showed a trend that the active IL-13 concentration in cytokine group was higher than that in control group, and that in intervention group was lower than that in cytokine group. The protein levels of p-STAT6 in cytokine stimulated-PBMC with a time dependent manner. CONCLUSION: The percentage of ILC2 in the PBMC is elevated in CRF patients. Furthermore, the ILC2 secret large amount of IL-13 to mediate the polarization of Th2 cells to regulate immunity through activating p-STAT6.

Type 2 innate lymphoid cells; Flow cytometry; Chronic renal failure; Signal transducers and activators of transcription 6; IL-13

1000- 4718(2017)07- 1301- 05

2016- 11- 28

2017- 03- 17

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81671882; No. 81471832; No. 81272062)；廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 2016A030311039)；廣東省科技計(jì)劃(No. 2015A020212012)；廣東省人民醫(yī)院人才引進(jìn)項(xiàng)目

R392.32； R692.5

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.07.024

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