麻疹病毒PCR檢驗(yàn)的措施和效果探討

程玲++韋肖云

[摘要] 目的 研究并探討麻疹病毒的聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢驗(yàn)措施及其檢驗(yàn)效果。方法 方便選取2014年1月—2016年12月期間本疾控中心接到各轄區(qū)內(nèi)上報的160例疑似麻疹病例作為研究對象，所有患者均采集咽拭子、血液標(biāo)本送檢，咽拭子采取PCR檢驗(yàn)，血液標(biāo)本采取ELISA法檢驗(yàn)，比較兩種方法對麻疹病毒的檢測結(jié)果。結(jié)果 160例疑似麻疹病例中，經(jīng)兩種方法檢測后排除23例風(fēng)疹病毒陽性病例，剩余137例病例中，發(fā)病后4 d內(nèi)，PCR檢驗(yàn)對麻疹病毒的陽性檢出率明顯高于ELISA法檢驗(yàn)（80.28% vs 60.56%，P<0.05），而在發(fā)病4天后，PCR檢驗(yàn)對麻疹病毒的陽性檢出率與ELISA法檢驗(yàn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（81.82% vs 78.79%，P>0.05）。ELISA法檢驗(yàn)結(jié)果為陰性而PCR檢驗(yàn)為陽性的病例中，其檢測時間多分布于發(fā)病后1～4 d內(nèi)。 結(jié)論 在麻疹病毒的病原學(xué)檢測中，PCR檢驗(yàn)可對早期麻疹患者進(jìn)行診斷，還可對早期ELISA法診斷為陰性的患者進(jìn)一步診斷，可有效減少漏診，具有較高的輔助診斷價值。

[關(guān)鍵詞] 麻疹病毒；PCR檢驗(yàn)；ELISA；檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)

[中圖分類號] R440 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）05（b）-0029-03

[Abstract] Objective To research the measures and effect of measles virus PCR test. Methods Convenient selection 160 cases of patients suspected with measles virus reported to our center from January 2014 to December 2016 were selected and the throat swab of all patients was collected and the blood specimens were submitted and the throat swab adopted the PCR test and the blood specimens adopted the ELISA method for test， and the test results of the two methods for the measles virus was compared. Results Of the 160 cases of patients， 23 cases were excluded with measles virus positive cases after the two methods test， and the positive test rate of PCR test for the measles virus of the other 137 cases in 4 days after onset was obviously higher than that of ELISA method test， （80.28% vs 60.56%， P<0.05）， and the after four-day onset， and there was no statistical difference in the positive test rate of measles virus between the PCR test and ELISA method， （81.82% vs 78.79%，P>0.05）， but the test time was distributed in 1 to 4 days after onset for cases whose ELISA method test result was negative but PCR test result was positive. Conclusion In the etiology test of measles virus， the PCR test can diagnose the patients with early measles， but also can further diagnose the patients whose diagnosis result was negative by the early ELISA method， which can effectively reduce the missed diagnosis with higher adjunctive diagnosis value.

[Key words] Measles virus； PCR test； ELISA； Test medicine

麻疹病毒是導(dǎo)致急性病毒性呼吸系統(tǒng)感染的主要病原體，其臨床表現(xiàn)以發(fā)熱、出疹為主，具有較高的發(fā)病率和傳染性，多發(fā)生于兒童人群，對兒童的身心健康較為不利[1-2]。對麻疹病毒予以早期檢出，有利于及時采取干預(yù)措施，避免麻疹暴發(fā)，但由于麻疹病毒與風(fēng)疹病毒較為相似，在早期診斷時容易混淆，故還需進(jìn)一步對二者進(jìn)行鑒別區(qū)分。聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一種新型的實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)，多被用于病原微生物核酸的快速檢測中，該研究為探討麻疹病毒的PCR檢驗(yàn)措施及其檢驗(yàn)效果，方便收集2014年1月—2016年12月期間160例疑似麻疹病例的咽拭子、血液標(biāo)本分別采取PCR法、ELISA法進(jìn)行檢測，并比較其對麻疹病毒的檢測結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該疾控中心接到各轄區(qū)內(nèi)上報的160例疑似麻疹病例作為研究對象，其中，男性92例，女性68例，年齡分布于5～12歲，平均年齡為（8.75±3.16）歲，均出現(xiàn)發(fā)熱、出疹癥狀，均在出疹14 d內(nèi)送院就診，且由醫(yī)院將其病情上報至該本疾控中心。在接受檢測前，所有病例均對檢測方法和目的進(jìn)行詳細(xì)了解，積極配合咽拭子、血液標(biāo)本采集。

1.2 方法

所有病例均采集咽拭子、血液標(biāo)本送檢，咽拭子采取PCR檢驗(yàn)，先采用無菌棉簽對病例咽部分泌物進(jìn)行采集，將咽拭子置于病毒標(biāo)本保存液中，根據(jù)麻疹病毒RNA試劑盒說明書對RNA進(jìn)行提取，待其反應(yīng)體系完成配置后，在ABI 7500熒光定量PCR儀下進(jìn)行擴(kuò)增，再進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄、預(yù)變性、變性、退火、延伸等操作，再收集熒光信號；血液標(biāo)本采取ELISA法檢驗(yàn)，先采用注射器于病例肘靜脈抽取3 mL靜脈血液，在4℃下對血液標(biāo)本進(jìn)行持續(xù)10 min的離心處理，離心速度為3 000 r/min，待血清分離后取血清，按照麻疹病毒ELISA法IgM抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行檢測，在Bio-Tek ELX 808酶標(biāo)儀下對450 nm處的吸光度值進(jìn)行計算。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩種方法對麻疹病毒的檢測結(jié)果（發(fā)病后4 d內(nèi)、發(fā)病4 d后ELISA、PCR對麻疹病毒的陽性檢出率）。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，表現(xiàn)形式為例（n）、百分比（%）， P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測時間分析

根據(jù)表1可以看出，PCR檢測共檢出111例陽性，ELISA共檢出95例陽性，ELISA法檢驗(yàn)結(jié)果為陰性而PCR檢驗(yàn)為陽性的病例中，其檢測時間多分布于發(fā)病后1～4 d內(nèi)，發(fā)病4 d內(nèi)ELISA檢驗(yàn)陰性而PCR檢驗(yàn)陽性共有17例，發(fā)病4 d后ELISA檢驗(yàn)陰性而PCR檢驗(yàn)陽性共有3例；PCR檢測陰性而ELISA檢測陽性共有4例，發(fā)病4 d內(nèi)3例，發(fā)病4 d后1例。

2.2 兩種檢驗(yàn)方法對麻疹病毒的檢測結(jié)果比較

160例疑似麻疹病例中，經(jīng)兩種方法檢測后排除23例風(fēng)疹病毒陽性病例，以減少風(fēng)疹病毒對麻疹病毒檢測結(jié)果的干擾。剩余137例病例中，發(fā)病后4 d內(nèi)，共有71例病例接受檢測，PCR檢驗(yàn)對麻疹病毒的陽性檢出率明顯高于ELISA法檢驗(yàn)（P<0.05）；而在發(fā)病4 d后，共有66例病例接受檢測，PCR檢驗(yàn)對麻疹病毒的陽性檢出率與ELISA法檢驗(yàn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

麻疹病毒是一種球形病毒，在外界環(huán)境中的存活能力較弱，容易因高溫、干燥、太陽直射而失去抵抗力，但其對寒冷的耐受度較高，因此，麻疹病毒多在冬春季節(jié)分散傳播。麻疹病毒是麻疹的病原體，而麻疹屬于兒童期常見呼吸系統(tǒng)傳染病，具有較強(qiáng)的傳染性，臨床表現(xiàn)為皮丘疹、發(fā)熱、呼吸道癥狀等，通常情況下，如小兒患者未出現(xiàn)并發(fā)癥，其預(yù)后相對較好，而一旦出現(xiàn)并發(fā)癥，很可能會導(dǎo)致小兒患者死亡，因此，需對麻疹進(jìn)行有效預(yù)防[3-4]。

我國將麻疹病毒感染列為早期計劃免疫接種任務(wù)，通過接種麻疹疫苗可在一定程度上預(yù)防麻疹的發(fā)生，但也有部分兒童仍會發(fā)生麻疹，而由于麻疹的傳染性較強(qiáng)，因此，需在早期進(jìn)行診斷和治療，以減少大面積疫情暴發(fā)。由于麻疹病毒與風(fēng)疹病毒較為相似，其引發(fā)的感染癥狀也較為相似[5-6]，因此，臨床上在早期診斷麻疹時容易與風(fēng)疹混淆，對其治療十分不利。

在麻疹早期診斷中，特異性的IgM抗體檢測可對麻疹病毒診斷起到輔助診斷作用，我國現(xiàn)階段的麻疹病毒診斷多采用ELISA法對血清中的特異性IgM抗體進(jìn)行檢測，但在實(shí)際工作中，這種檢測方法的早期陽性檢出率并不高，存在漏診[7]。近年來，臨床上針對病毒等病原微生物的檢測逐漸開始應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)檢測，聚合酶鏈反應(yīng)是一種新型的快速檢測技術(shù)，對病毒核酸具有較高的靈敏性和特異性[8]。該研究為探討聚合酶鏈反應(yīng)檢測對麻疹病毒的檢驗(yàn)效果，對160例疑似麻疹病例進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，160例疑似麻疹病例中，經(jīng)兩種方法檢測后排除23例風(fēng)疹病毒陽性病例，剩余137例病例中，發(fā)病后4 d內(nèi)，PCR檢驗(yàn)對麻疹病毒的陽性檢出率明顯高于ELISA法檢驗(yàn)（P<0.05），而在發(fā)病4 d后，PCR檢驗(yàn)對麻疹病毒的陽性檢出率與ELISA法檢驗(yàn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），同時，該研究還發(fā)現(xiàn)，ELISA法檢驗(yàn)結(jié)果為陰性而PCR檢驗(yàn)為陽性的病例中，其檢測時間多分布于發(fā)病后1～4 d內(nèi)，這提示該研究聚合酶鏈反應(yīng)在麻疹病毒早期感染階段的檢出效果較好，其陽性檢出率高于ELISA法。該研究結(jié)果與褚文達(dá)[9]的研究報道結(jié)果相對一致，證實(shí)了該研究的可靠性，在褚文達(dá)的研究中，在發(fā)病后4 d內(nèi)對疑似麻疹患者進(jìn)行血液、咽拭子采樣和檢測，研究發(fā)現(xiàn)，ELISA法檢測陽性率不及PCR法，其陽性檢出率分別為37.04%、59.26%，且發(fā)現(xiàn)ELISA法檢出陰性而PCR檢出陽性的標(biāo)本多分布于發(fā)病后1～5 d內(nèi)（發(fā)病后第1、2、3、4、5、6、7天分別占比17.31%、11.54%、25.00%、17.31%、17.31%、7.69%、3.85%），說明PCR法可對麻疹病毒進(jìn)行快速有效檢測，尤其是對出疹早期麻疹病毒，可減少因ELISA法的漏診。這可能與麻疹病毒的分布有關(guān)，ELISA檢測的主體為血液標(biāo)本，而聚合酶鏈反應(yīng)檢測的主體為咽拭子，麻疹病毒主要分布與呼吸道中，在早期階段，咽部分泌物中的麻疹病毒分布較多，而在后期，麻疹病毒可能會逐漸進(jìn)入血液，故后期階段ELISA法的陽性檢出率與PCR法接近。

綜上所述，在麻疹病毒的病原學(xué)檢測中，PCR檢驗(yàn)可對早期麻疹患者進(jìn)行診斷，還可對早期ELISA法診斷為陰性的患者進(jìn)一步診斷，可有效減少漏診，具有較高的輔助診斷價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 徐軍，趙曉，侯存軍，等.麻疹的實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志：電子版，2016，10（3）：261-264.

[2] 孔祥軍，申鎮(zhèn)維，何繼紅，等.麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和腮腺炎病毒多重RT-PCR法的建立[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2013，31（6）：409-411.

[3] Ammour Y，F(xiàn)aizuloev E，Borisova T，et al.Quantification of measles， mumps and rubella viruses using real-time quantitative TaqMan-based RT-PCR assay[J].Journal of Virological Methods，2013，187（1）：57-64.

[4] 王偉，王海梅，劉雙成，等.RT-PCR法檢測尿液標(biāo)本中麻疹病毒核蛋白（N）基因的臨床應(yīng)用及意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，43（12）：911-913.

[5] Sheikhakbari S，Mokhtari-Azad T，Salimi V，et al.The Use of Oral Fluid Samples Spotted on Filter Paper for the Detection of Measles Virus Using Nested RT-PCR[J].Journal of clinical laboratory analysis，2012，26（3）：215-222.

[6] 陳玲霞，姬莉莉，孫建飛，等.麻疹實(shí)驗(yàn)室診斷中ELISA法和實(shí)時熒光定量RT-PCR法的比較[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016， 23（1）：106-108.

[7] 侯存軍，陳洪曉，柳君如，等.麻疹實(shí)驗(yàn)室診斷中病毒抗原與RNA檢測的對比研究[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志：電子版，2014，7（3）：349-351.

[8] 顧文珍，朱瑩瑩，倪紅霞，等.寧波地區(qū)2014年麻疹流行情況及病毒基因型分析[J].國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2016，43（4）：254-257.

[9] 褚文達(dá).ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒檢測中的應(yīng)用比較分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23（11）：1352-1354.

（收稿日期：2017-02-15）