肝臟靶向表達(dá)趨化因子CXCL10抑制ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷①

李 靜 王學(xué)富

(安徽醫(yī)科大學(xué)，合肥230032)

肝臟靶向表達(dá)趨化因子CXCL10抑制ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷①

李 靜 王學(xué)富

(安徽醫(yī)科大學(xué)，合肥230032)

目的：本研究探索趨化因子CXCL10在免疫介導(dǎo)的肝臟損傷方面的作用及其作用機(jī)制。方法：尾靜脈高壓注射CXCL10表達(dá)載體72 h后檢測肝臟中CXCL10的表達(dá)水平；再尾靜脈注射刀豆蛋白(Concanavalin A，ConA)誘導(dǎo)免疫介導(dǎo)的肝臟損傷；檢測并比較CXCL10表達(dá)組和對照組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)水平、組織損傷水平、IFN-γ水平、TNF-α水平及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例和數(shù)量的差異。結(jié)果：CXCL10表達(dá)載體注射72 h后，肝臟中CXCL10的表達(dá)水平顯著升高；CXCL10表達(dá)質(zhì)粒預(yù)處理可以有效減輕ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷，CXCL10表達(dá)組小鼠血清中的ALT水平顯著低于對照組， CXCL10表達(dá)組小鼠血清中IFN-γ和TNF-α的水平明顯低于對照組，CXCL10表達(dá)組小鼠肝臟中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例和數(shù)量高于對照組。結(jié)論：趨化因子CXCL10表達(dá)載體預(yù)處理可減少炎性細(xì)胞因子并減輕ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷，對治療免疫介導(dǎo)的肝炎具有重要意義。

刀豆蛋白A；肝臟損傷；CXCL10；炎性細(xì)胞因子

趨化因子是介導(dǎo)免疫細(xì)胞定向遷移和歸巢的重要分子。不同的免疫反應(yīng)會產(chǎn)生特定的趨化因子，同時各種免疫細(xì)胞亞群表達(dá)特定的趨化因子受體，因此，應(yīng)答部位通過產(chǎn)生特異性的趨化因子招募特異性的免疫細(xì)胞介導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答。CXCL10屬于CXC趨化因子亞家族，由包括IFN-γ在內(nèi)的多種致炎性分子刺激內(nèi)皮細(xì)胞、肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞等產(chǎn)生[1]。CXCL10受體CXCR3主要表達(dá)在CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NKT細(xì)胞和NK細(xì)胞等細(xì)胞上[2]。 CXCL10在抗病毒和抗腫瘤中發(fā)揮著重要作用[3]，但目前對CXCL10在抗炎癥方面的功能尚未有太多報道。本課題通過構(gòu)建并高壓注射CXCL10表達(dá)載體使其在肝臟中靶向表達(dá)，同時觀察此預(yù)處理對免疫介導(dǎo)的肝臟損傷的影響，研究CXCL10在抗炎方面的作用，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1小鼠 6～8周齡雄性SPF級C57BL/6小鼠，體重19～21 g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級動物房， 室溫為18～23℃，濕度為40%～60%，每籠5只，可自由飲水?dāng)z食。實(shí)驗(yàn)亦在SPF級動物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.1.2試劑 刀豆蛋白A Ⅳ型(ConA)、Percoll(美國Sigma 公司)；Trizol試劑(美國Invitrogen公司)；FITC-CD25、PE-CD4、Percp-CY5.5-NK1.1、APC-Foxp3等抗體(美國eBioscience公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國Fermentas公司)；IFN-γ和TNF-α酶聯(lián)檢測試劑盒(深圳達(dá)科為公司)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測定試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品)；SYBR GreenⅠmix (TaKaRa公司)；實(shí)時熒光定量PCR引物由上海生工合成，CXCL10 P1：CCAAGTGCTGCCGTCATTTTC，P2：GGCTCGCAGGGATGATTTCAA；GAPDH P1：CAACTGGTCGTGGACAACCAT，P2：GCACGGACACTCACAATGTTC；其他試劑均為國藥集團(tuán)市售分析純。

1.2方法

1.2.1質(zhì)粒高壓注射 將20只C57BL/6小鼠分為CXCL10表達(dá)質(zhì)粒注射組和空質(zhì)粒注射組，每組各10只。將CXCL10表達(dá)質(zhì)粒和空質(zhì)粒分別溶于無菌生理鹽水中，按照每只鼠10 μg/2 ml的劑量分別經(jīng)尾靜脈高壓注射。注射之后，觀察小鼠的狀態(tài)，等待其恢復(fù)正常之后放回飼養(yǎng)籠內(nèi)。高壓注射72 h后取肝臟組織，檢測肝臟組織中CXCL10的表達(dá)量，比較兩者的差異。

1.2.2實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒?將60只C57BL/6小鼠分為CXCL10表達(dá)質(zhì)粒注射組和空質(zhì)粒注射組，每組各30只。注射72 h后，60只小鼠經(jīng)尾靜脈按照10 mg/kg(體重)的劑量注射ConA，6、12和24 h后，收集小鼠血清和肝組織[4]。血清用于檢測ALT、IFN-γ、TNF-α的水平，肝組織用于免疫細(xì)胞亞群檢測和組織病理的觀察。

1.2.3實(shí)時熒光定量PCR CXCL10高壓注射 72 h 后，取肝臟組織，用Trizol提取法提取 RNA，再逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR分析。PCR反應(yīng)體系為20 μl： 10 μl Sybergre-en Mix(2×) +2 μl cDNA+1 μl primers mix+7 μl ddH2O。PCR程序?yàn)閮刹椒ǎ?4℃ 5 min，(94℃ 15 s+58℃ 20 s，共35個循環(huán))。實(shí)驗(yàn)完成后進(jìn)行相對定量分析。

1.2.4ALT檢測 按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。將血清進(jìn)行稀釋后加入96孔板中，加入基質(zhì)液混勻，同時制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；37℃孵育30 min后加入2,4二硝基苯肼混勻；37℃孵育20 min后加入0.4 mol/L NaOH終止反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀檢測吸光值。

1.2.5酶聯(lián)免疫檢測 按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。將血清和標(biāo)準(zhǔn)品分別加入反應(yīng)孔中，37℃孵育2 h后洗板；加入一抗，37℃孵育1 h后洗板；再加入二抗，37℃孵育1 h后洗板；加入反應(yīng)底物，根據(jù)顏色變化適時終止顯色，通過酶標(biāo)儀檢測吸光值。

1.2.6組織病理分析 ConA處理12 h后收集的肝組織固定于福爾馬林中，再流水沖洗過夜，經(jīng)過脫水包埋，制成石蠟組織塊，再進(jìn)行組織切片、脫蠟水化、染色，最后進(jìn)行脫水、透明、封片、拍照。通過HE染色觀察肝組織的損傷情況。

1.2.7免疫細(xì)胞亞群分析 ConA處理12 h后收集的肝組織，過200目篩網(wǎng)進(jìn)行研磨，冰上沉降10 min 后，吸取上清至50 ml離心管，2 000 r/min離心10 min，去上清收集沉淀，40% Percoll重懸沉淀加于70%Percoll上，2 400 r/min離心30 min，取中間層的細(xì)胞，PBS洗2次后計(jì)數(shù)。取適量細(xì)胞大鼠血清封閉，標(biāo)記FITC-CD4、PE-NK1.1、Percp-CY5.5-CD8、APC-CD3用于檢測肝臟淋巴細(xì)胞亞群，標(biāo)記FITC-CD25、PE-CD4、Percp-CY5.5-NK1.1外標(biāo)抗體，再標(biāo)記APC-Foxp3內(nèi)標(biāo)抗體用于檢測調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，最后進(jìn)行流式檢測和分析。

2 結(jié)果

2.1高壓注射CXCL10表達(dá)載體對肝臟CXCL10表達(dá)的影響 為研究CXCL10對肝臟損傷的作用，我們制備了CXCL10表達(dá)載體pcDNA3.0-CXCL10，空載體pcDNA3.0-Null作為對照質(zhì)粒。我們通過高壓注射將質(zhì)粒導(dǎo)入到肝細(xì)胞中，用熒光定量PCR的方法檢測了肝組織中CXCL10的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)pcDNA-CXCL10質(zhì)粒處理組小鼠肝組織中CXCL10的水平顯著高于對照組(P<0.005)，見圖1。此結(jié)果說明高壓注射pcDNA-CXCL10質(zhì)?？梢杂行г黾痈闻K局部CXCL10的表達(dá)水平，達(dá)到靶向肝臟的應(yīng)用效果，因此可以用來研究CXCL10對肝臟損傷的影響。

圖1 肝臟中CXCL10的表達(dá)量Fig.1 Expression of CXCL10 in liverNote:Real-time PCR assay.***.P<0.005,compare with Null group.

2.2高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對血清ALT的影響 為研究CXCL10對ConA誘導(dǎo)肝臟損傷的影響，我們提前3 d高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒，再尾靜脈注射ConA誘導(dǎo)肝臟損傷，分別在ConA注射后的0、6、12和24 h檢測血清中ALT水平。結(jié)果顯示，在ConA處理后的不同時間點(diǎn)，CXCL10表達(dá)質(zhì)粒處理組小鼠血清中ALT水平顯著低于對照組(P<0.01)，見圖2。此結(jié)果說明高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒可以顯著抑制ConA導(dǎo)致的ALT水平升高，減輕ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷。

2.3高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對肝臟病理損傷的影響 為觀察肝組織中的病理損傷，我們進(jìn)行了病理切片和HE染色檢測。結(jié)果顯示，對照組小鼠在其肝臟門靜脈周圍有大量的壞死，且肝小葉的結(jié)構(gòu)被破壞。而CXCL10表達(dá)質(zhì)粒處理組小鼠肝臟中壞死區(qū)域明顯減小，肝小葉破壞減少，見圖3。此結(jié)果說明高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)?？梢杂行У匾种艭onA誘導(dǎo)的肝臟組織病理損傷。

2.4高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對血清IFN-γ的影響 IFN-γ是介導(dǎo)ConA誘導(dǎo)肝臟損傷的主要炎性介質(zhì)[5]。為觀察CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對IFN-γ的影響，我們檢測了ConA處理后6、12和24 h小鼠血清中IFN-γ的水平。結(jié)果顯示，在ConA處理后的不同時間點(diǎn)，CXCL10表達(dá)質(zhì)粒處理組小鼠血清中的IFN-γ水平顯著低于空質(zhì)粒處理的對照組小鼠，見圖4。此結(jié)果說明預(yù)先高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒會降低ConA誘導(dǎo)的IFN-γ水平。

2.5高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對血清TNF-α的影響 TNF-α也是介導(dǎo)ConA誘導(dǎo)肝臟損傷的炎性介質(zhì)之一[6]。為觀察CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對TNF-α的影響，我們檢測了ConA處理12 h后小鼠血清中TNF-α的水平。結(jié)果顯示，CXCL10表達(dá)質(zhì)粒處理組小鼠血清中的TNF-α水平顯著低于空質(zhì)粒處理的對照組小鼠(P<0.05)，見圖5。此結(jié)果說明預(yù)先高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒也會降低ConA誘導(dǎo)的TNF-α的水平。

圖2 血清ALT水平Fig.2 ALT levels in seraNote:ALT assay.Compared with Null group，**.P<0.01.

2.6高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對肝臟中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是機(jī)體主要的抑制炎癥反應(yīng)的免疫細(xì)胞[7]。為研究CXCL10表達(dá)質(zhì)粒對ConA誘導(dǎo)肝臟損傷過程中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響，我們檢測了ConA處理12 h后肝臟單個核細(xì)胞的數(shù)量、各免疫細(xì)胞亞群(包括CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NKT細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞)的比例及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例和數(shù)量。結(jié)果顯示，CXCL10表達(dá)質(zhì)粒處理組小鼠肝臟中的單個核細(xì)胞的數(shù)量高于空質(zhì)粒處理組小鼠(P<0.05)，見圖6A。 而CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NKT細(xì)胞、NK細(xì)胞的比例在兩組間無顯著差異，見圖6B。但CXCL10表達(dá)質(zhì)粒處理組小鼠肝臟中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例顯著高于空質(zhì)粒處理組小鼠(P<0.01)，而且調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量也顯著高于對照組小鼠(P<0.01)，見圖6C。此結(jié)果說明高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒會增加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例和數(shù)量，從而抑制ConA誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，減輕ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷。

圖3 肝臟病理損傷觀察 (HE,×100)Fig.3 Pathological examination in liver(HE,×100)

圖4 血清IFN-γ水平Fig.4 IFN-γ levels in seraNote:ELISA assay.Compared with Null group，*.P<0.05,**.P<0.01.

圖5 血清TNF-α水平Fig.5 TNF-α levels in seraNote:ELISA assay.Compared with Null group.*.P<0.05.

圖6 肝臟中免疫細(xì)胞的比例與數(shù)量Fig.6 Percentages and numbers of immune cells in liverNote:A.Number of hepatic mononuclear cells;B.Percentage of immune cells in the liver;C.Percentage and number of regulatory T cells.FACS assay，compared with Null group，**.P<0.01.

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)預(yù)先高壓注射CXCL10表達(dá)質(zhì)粒可以顯著抑制ConA誘導(dǎo)的ALT水平升高，減少肝臟損傷面積，降低炎性細(xì)胞因子濃度，增加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，對免疫介導(dǎo)的肝臟損傷具有明顯的保護(hù)作用。

包括病毒感染在內(nèi)的多種原因?qū)е碌母闻K損傷都是由活化的免疫細(xì)胞通過直接殺傷肝細(xì)胞或釋放炎性因子誘導(dǎo)肝細(xì)胞死亡的方式來介導(dǎo)的。ConA可以直接活化肝臟中的T細(xì)胞介導(dǎo)肝臟損傷[4]。因此，ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷可以很好地模擬多種免疫介導(dǎo)的肝臟疾病，所以得到了廣泛的應(yīng)用。

CXCL10又稱IFN-γ誘導(dǎo)蛋白10，主要由IFN-γ刺激單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生[1]。IFN-γ可以促進(jìn)CXCL10的分泌，推動免疫細(xì)胞向感染部位或炎癥部位聚集，發(fā)揮抗病毒、抗腫瘤、促炎癥等作用。其受體CXCR3屬于G蛋白偶聯(lián)超家族，主要表達(dá)在T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞上，也表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞及某些腫瘤細(xì)胞上[3]。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL10-CXCR3與肝臟疾病密切相關(guān)。CXCR3參與缺血再灌注導(dǎo)致的肝臟損傷[8]。HBX會誘導(dǎo)CXCL10表達(dá)從而招募免疫細(xì)胞進(jìn)入肝臟[9，10]。CXCR3會促進(jìn)脂肪性肝炎[11]。因此，CXCL10-CXCR3介導(dǎo)的免疫過程對多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展都有重要的作用。

被CXCL10招募的免疫細(xì)胞從功能上分析，既有免疫促進(jìn)細(xì)胞，也有免疫負(fù)調(diào)細(xì)胞。因此，最終結(jié)果取決于多種免疫細(xì)胞的綜合效應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)CXCL10可以顯著地抑制ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷和炎癥應(yīng)答。在T細(xì)胞中存在具有免疫負(fù)調(diào)功能的細(xì)胞亞群，即調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，其在體內(nèi)通過多種免疫抑制功能發(fā)揮維持機(jī)體免疫耐受的作用[7]。有文獻(xiàn)報道調(diào)節(jié)性T細(xì)胞會抑制炎癥反應(yīng)減輕ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷且調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表面也表達(dá)CXCR3[12，13]。腫瘤微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞通過分泌CXCL10招募調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)入腫瘤局部，抑制免疫細(xì)胞對腫瘤的殺傷功能[14]。因此，我們推測在小鼠肝臟中過表達(dá)CXCL10會招募更多的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)入肝臟組織，通過其免疫抑制功能減輕了ConA誘導(dǎo)的肝臟炎癥和肝臟損傷，起到顯著的保護(hù)作用。通過分析肝臟中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例和數(shù)量我們發(fā)現(xiàn)，CXCL10可以招募調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位，從而發(fā)揮抑制作用，減輕炎癥。除調(diào)節(jié)性T細(xì)胞外，體內(nèi)還有MDSC等其他免疫負(fù)調(diào)細(xì)胞[15]，這些細(xì)胞是否會被CXCL10招募進(jìn)入肝臟發(fā)揮抑制炎癥的作用還有待研究。除招募免疫細(xì)胞外，CXCL10是否可通過其他機(jī)制發(fā)揮抑制炎癥的作用也有待深入研究。

本研究證實(shí)肝內(nèi)預(yù)先過表達(dá)趨化因子CXCL10可以減輕ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷，為自身免疫性肝炎在內(nèi)的免疫性肝臟疾病的預(yù)防和治療提供新思路和新方法，為通過免疫調(diào)控的方式治療肝臟疾病提供新依據(jù)。

[1] Basset L,Chevalier S,Danger Y,etal.Interleukin-27 and IFNgamma regulate the expression of CXCL9,CXCL10,and CXCL11 in hepatitis[J].J Mol Med (Berl)，2015，93(12):1355-1367.

[2] Lacotte S,Brun S,Muller S,etal.CXCR3,inflammation,and autoimmune diseases[J].Ann N Y Acad Sci，2009，1173:310-317.

[3] Van Raemdonck K,Van den Steen PE,Liekens S,etal.CXCR3 ligands in disease and therapy[J].Cytokine Growth Factor Rev，2015，26:311-327.

[4] Chen J,Wei Y,He J,etal.Natural killer T cells play a necessary role in modulating of immune-mediated liver injury by gut microbiota[J].Sci Rep，2014，4:7259.

[5] Abe H,Kimura A,Tsuruta S,etal.Aryl hydrocarbon receptor plays protective roles in ConA-induced hepatic injury by both suppressing IFN-expression and inducing IL-22[J].Intern Immunol，2014，26:129-137.

[6] Li X,Liu HC,Yao QY,etal.Quercetin protects mice from ConA-induced hepatitis by inhibiting HMGB1-TLR expression and down-regulating the nuclear factor Kappa B pathway[J].Inflammation，2015，39(1)：96-106.

[7] Campbell DJ.Control of regulatory T cell migration,function,and homeostasis[J].J Immunol，2015，195:2507-2513.

[8] Zhai Y,Shen XD,Hancock WW,etal.CXCR3+CD4+T cells mediate innate immune function in the pathophysiology of liver ischemia/reperfusion injury[J].J Immunol,2006,176:6313-6322.

[9] Zhou Y,Wang S,Ma JW,etal.Hepatitis B virus protein X-induced expression of the CXC chemokine IP-10 is mediated through activation of NF-kappa B and increases migration of leukocytes[J].J Biol Chem,2010,285:12159-12168.

[10] Fabiani S.Hepatitis B virus infection and interferon-inducible protein-10[J].Clin Ter,2015,166:e188-196.

[11] Zhang X,Chu ES,Li X,etal.Cxc chemokine receptor 3 promotes steatohepatitis in mice through mediating inflammatory cytokines,macrophage,and autophagy[J].Clin Gastroenterol Hepatol,2015,13:1382-1383.

[12] Paust HJ,Riedel JH,Krebs CF,etal.CXCR3+regulatory T cells control TH1 responses in crescentic GN[J].J Am Soc Nephrol,2015,27(7):1933-1942.

[13] Hoerning A,Koss K,Datta D,etal.Subsets of human CD4(+) regulatory T cells express the peripheral homing receptor CXCR3[J].Eur J Immunol,2011,41:2291-2302.

[14] Redjimi N,Raffin C,Raimbaud I,etal.CXCR3+T regulatory cells selectively accumulate in human ovarian carcinomas to limit type I immunity[J].Cancer Res,2012,72:4351-4360.

[15] Viola A,Sarukhan A,Bronte V,etal.The pros and cons of chemokines in tumor immunology[J].Trends Immunol,2012,33:496-504.

[收稿2016-09-07 修回2016-12-21]

(編輯 倪 鵬)

Liver-targetedexpressionofchemokineCXCL10inhibitsConA-inducedliverinjury

LIJing,WANGXue-Fu.AnhuiMedicalUniversity,Hefei230032,China

Objective:To explore the effect and mechanism of CXCL10 on immune-mediated liver injury.Methods:The CXCL10 expression vector was injected into mice by hydrodynamic injection. The levels of CXCL10 in the liver were measured 72 hours after injection.Concanavalin A (ConA) was injected into mice to induce immune-mediated liver injury.The levels of alanine a minotransferase (ALT),tissue damage,IFN-γ,TNF-α and percentages and numbers of regulatory T cells were tested and compared between CXCL10 expression group and control group.Results:The levels of CXCL10 in the liver were significantly increased at 72 hours after CXCL10 expression vector was injected.The pretreatment of CXCL10 expression vector markedly reduced ConA-induced ALT levels,IFN-γ levels and TNF-α levels.Additionally,the pretreatment of CXCL10 expression vector increased the percentages and numbers of regulatory T cells in the liver.Conclusion:The pretreatment of CXCL10 expression vector decreases the levels of inflammatory cytokines and attenuates ConA-induced liver injury,which might be beneficial for the treatment for immune-mediated liver injury.

Concanavalin A；Liver injury；CXCL10；Inflammatory cytokine

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.06.005

①本文為國家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(No.81302863)。

李 靜(1985年-)，女，博士，講師，主要從事病原微生物與分子免疫學(xué)方面研究，E-mail:lijing1812@ahmu.edu.cn。

及指導(dǎo)教師:王學(xué)富(1985年-)，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事免疫學(xué)方面的研究，E-mail:wangxuefu@ahmu.edu.cn。

R392

A

1000-484X(2017)06-0828-05