血清補(bǔ)體、免疫球蛋白及炎性細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)檢測(cè)在兒童肺炎支原體感染中的應(yīng)用價(jià)值

郭飛波 韓利蓉 余 卉 石 惠

(湖北省天門市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,天門431700)

血清補(bǔ)體、免疫球蛋白及炎性細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)檢測(cè)在兒童肺炎支原體感染中的應(yīng)用價(jià)值

郭飛波 韓利蓉 余 卉 石 惠

(湖北省天門市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,天門431700)

目的：探討動(dòng)態(tài)檢測(cè)血清補(bǔ)體、免疫球蛋白及炎性細(xì)胞因子在兒童肺炎支原體(MP)感染中的臨床價(jià)值。方法：選擇MP感染患兒60例作為MPP組，同期健康體檢兒童60例作為對(duì)照組。采用免疫散射比濁法(INA)檢測(cè)血清補(bǔ)體(C3、C4)及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)測(cè)定IL-8、IL-10、IL-13及TNF-α。結(jié)果：①M(fèi)PP組急性期IgM、C3、C4、IL-8、TNF-α及IL-13顯著高于恢復(fù)期及對(duì)照組(P<0.05)，且恢復(fù)期IL-8、TNF-α、IL-13仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；急性期IgA、IL-10顯著低于對(duì)照組，且恢復(fù)期仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；急性期IgG與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)，而恢復(fù)期顯著高于急性期及對(duì)照組(P<0.05)；②MPP組重型IgM、IgG、C3、C4、IL-8、TNF-α及IL-13顯著高于輕型及對(duì)照組，且輕型的IgM、IL-8、TNF-α、IL-13仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；重型組的IgA及IL-10顯著低于輕型及對(duì)照組，且輕型仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論：兒童MP感染具有明顯的細(xì)胞及體液免疫功能紊亂，動(dòng)態(tài)檢測(cè)血清補(bǔ)體、免疫球蛋白及炎性細(xì)胞因子對(duì)評(píng)定疾病分期、病情程度具有重要價(jià)值。

肺炎支原體；兒童；補(bǔ)體；免疫球蛋白；炎性細(xì)胞因子

肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,MP)是導(dǎo)致兒童呼吸系統(tǒng)疾病及肺炎支原體肺炎(Mycopllasmapneumoniiae pneumoniia,MPP)的常見病原體，可任何年齡段兒童均可感染，有30%以上可發(fā)展為MPP，還可誘發(fā)其他肺外并發(fā)癥，其中有18%左右需要主要治療，嚴(yán)重影響患兒的生長(zhǎng)發(fā)育[1]。MP感染后致病機(jī)制目前尚不完全明確，多認(rèn)為與呼吸道上皮吸附作用、MP感染后炎癥損傷及免疫功能紊亂有關(guān)。新近研究表明，免疫損傷及炎性反應(yīng)在MPP的發(fā)生進(jìn)程中起著關(guān)鍵性作用[2]。因此，研究MP感染患兒的免疫功能及炎癥反應(yīng)水平對(duì)病情評(píng)估及治療決策具有重要意義。本研究動(dòng)態(tài)檢測(cè)了MP感染患兒的血清補(bǔ)體(C3、C4)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及炎性細(xì)胞因子(IL-8、IL-10、IL-13、TNF-α)的變化規(guī)律，分析其與MPP疾病分期及病情嚴(yán)重程度的關(guān)系，為MPP臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年6月～2016年6月我院兒科收治的MP感染患兒60例作為MPP組，其中男34例，女26例，年齡2～36個(gè)月，平均(18.43±3.12)個(gè)月；急性期病程20 h～8 d，平均(4.79±1.98)d；恢復(fù)期病程10 d～8周，平均(15.56±3.21)d。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《實(shí)用兒科學(xué)》(第7版)[3]關(guān)于MPP的診斷標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)病≤8 d為急性期，經(jīng)抗生素治療2～8周且臨床癥狀基本消失、影像學(xué)癥狀消失或明顯改善為恢復(fù)期；②留取標(biāo)本前未使用任何免疫調(diào)節(jié)劑及糖皮質(zhì)激素等對(duì)免疫功能有影響的藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他病原體感染者，WBC明顯增高懷疑混合感染者；②合并支氣管哮喘、肺結(jié)核以及其他感染性疾病者；③具有溶血性貧血肺外并發(fā)癥者；④免疫功能低下或其他疾病導(dǎo)致免疫功能紊亂者。選擇同期門診健康體檢兒童60例作為對(duì)照組，既往無(wú)慢性疾病及免疫性疾病史，近期無(wú)發(fā)熱、咳嗽、感冒及感染史。其中男30例，女30例，年齡3～36個(gè)月，平均(16.89±3.34)個(gè)月。兩組患兒家長(zhǎng)或法定監(jiān)護(hù)人均簽署了知情同意書，且組間年齡及性別構(gòu)成比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 MPP組患兒分別于急性期入院當(dāng)日或次日未使用抗生素前、恢復(fù)期清晨7:00～9:00采集外周靜脈血各3 ml，對(duì)照組兒童入院當(dāng)日采血。4 000 r/min(離心半徑13.5 cm)離心5 min，留取血清標(biāo)本，于-80℃冰箱中保存待測(cè)。

1.2.2測(cè)定方法 采用免疫散射比濁法(INA)測(cè)定血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及血清補(bǔ)體(C3、C4)，儀器為貝克曼庫(kù)爾特AU5800系列全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑；采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)測(cè)定血清IL-8、IL-10、IL-13及TNF-α，儀器為美國(guó)BioRed-680型酶標(biāo)儀，試劑盒由日本東京富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)。操作均由同一名經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)科人員嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.3觀察指標(biāo) 比較分析MPP組急性期、恢復(fù)期與對(duì)照組，重型、輕型與對(duì)照組的血清補(bǔ)體(C3、C4)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及炎性細(xì)胞因子(IL-8、IL-10、IL-13、TNF-α)水平。符合以下①～③中任意2條及④～⑤任意1條判定為重癥MPP：①經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素規(guī)范治療7 d以上無(wú)效，即胸片無(wú)改善或體溫持續(xù)超過(guò)38.5℃甚至病情加重；②出現(xiàn)明顯心動(dòng)過(guò)速或氣促癥狀，可伴有血壓降低、發(fā)紺以及三凹征等；③胸X線片顯示1個(gè)肺葉或肺段以上出現(xiàn)大片狀陰影，或者累及單葉甚至多葉病變；④出現(xiàn)嚴(yán)重低氧血癥、心力衰竭、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等一系列肺外并發(fā)癥；⑤出現(xiàn)肺不張、肺膿腫以及胸腔積液等一系列肺內(nèi)并發(fā)癥者。

2 結(jié)果

2.1MPP組不同分期與對(duì)照組免疫球蛋白、補(bǔ)體水平比較 MPP組急性期IgA顯著低于恢復(fù)期及對(duì)照組，且恢復(fù)期仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；急性期IgG與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)，恢復(fù)期明顯高于急性期及對(duì)照組(P<0.05)；急性期IgM、C3、C4顯著高于恢復(fù)期及對(duì)照組(P<0.05)，恢復(fù)期與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)，見表1。

2.2MPP組不同分期與對(duì)照組細(xì)胞因子水平比較 MPP組急性期IL-8、TNF-α及IL-13水平均顯著高于恢復(fù)期及對(duì)照組(P<0.05)，且恢復(fù)期仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；急性期IL-10顯著低于恢復(fù)期及對(duì)照組，且恢復(fù)期仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

2.3MPP組不同病情與對(duì)照組免疫球蛋白、補(bǔ)體水平與比較 MPP組重型IgA顯著低于輕型及對(duì)照組，且輕型顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；重型IgM顯著高于輕型及對(duì)照組，且輕型顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；重型IgG、C3、C4顯著高于輕型及對(duì)照組(P<0.05)，輕型與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)，見表3。

2.4MPP組不同病情與對(duì)照組細(xì)胞因子水平比較 MPP組重型IL-8、TNF-α及IL-13顯著高于輕型及對(duì)照組，且輕型顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；重型IL-10顯著低于輕型及對(duì)照組，且輕型顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，見表4。

表1 MPP組不同分期與對(duì)照組免疫球蛋白、補(bǔ)體水平比較

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with recovery stage,2)P<0.05.

表2 MPP組不同分期與對(duì)照組細(xì)胞因子水平比較

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with recovery stage,2)P<0.05.

表3 MPP組不同病情與對(duì)照組免疫球蛋白、補(bǔ)體水平與比較

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with mild,2)P<0.05.

表4 MPP組不同病情與對(duì)照組細(xì)胞因子水平比較

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with mild,2)P<0.05.

3 討論

小兒MP感染后由于組織器官功能不成熟、免疫系統(tǒng)發(fā)育不全、早期臨床癥狀不典型而就診不及時(shí)等，容易出現(xiàn)肺外并發(fā)癥，如不及時(shí)治療將影響患兒的生長(zhǎng)發(fā)育甚至危及生命。既往認(rèn)為MP感染致病主要是由于局部肺組織中MP定植、繁殖所致炎癥反應(yīng)引起，隨著臨床對(duì)MP研究及認(rèn)識(shí)的不斷加深，越來(lái)越傾向于免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制[4]。Medina等[5]認(rèn)為，MP感染后機(jī)體可經(jīng)歷免疫逃逸、調(diào)節(jié)、抑制及蓄積等復(fù)雜過(guò)程，而自身免疫抗體與細(xì)胞因子相互誘導(dǎo)和相互制約，形成復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)致疾病的發(fā)生及發(fā)展。因此，了解MP感染患兒的免疫及炎性細(xì)胞因子變化是疾病診療的關(guān)鍵。

機(jī)體感染MP后，IgM是體液免疫中出現(xiàn)最早的抗體，3～4周左右即可升高至峰值，但消失較早，恢復(fù)期多可降低至正常水平。由于MP感染多有2～3周左右的潛伏期，早期缺乏典型癥狀，故MPP患兒就診時(shí)血清IgM多處于較高水平[6]。本研究中，MPP組急性期血清IgM水平較對(duì)照組顯著升高，而恢復(fù)期已經(jīng)降低至正常水平，與上述理論基本一致。此外，MPP組急性期血清IgG水平處于正常范圍，而在恢復(fù)期后呈現(xiàn)高水平表達(dá)。主要是IgG在MP感染后出現(xiàn)時(shí)間較IgM更晚，多在發(fā)病后第2周才開始升高，第5周左右升高至峰值[2]。血清IgA約占總免疫球蛋白含量的10%～20%，通常在MP感染后2周左右表現(xiàn)出升高趨勢(shì)。由于免疫功能降低是兒童感染MP的主要原因之一，故大部分MMP患兒的血清IgA水平較正常水平更低，且在感染MP后可進(jìn)一步加重體液免疫功能缺陷，導(dǎo)致IgA缺乏[7]。IgA作為一種重要的黏膜局部免疫抗體，一旦缺乏勢(shì)必會(huì)導(dǎo)致呼吸道的抗病毒能力降低，進(jìn)而增加感染風(fēng)險(xiǎn)[1]。本研究中，MPP組急性期血清IgA水平顯著低于對(duì)照組，恢復(fù)期雖然有明顯升高，但仍呈現(xiàn)低水平表達(dá)，表明MPP患兒具有明顯的免疫功能紊亂或免疫功能低下，IgA合成不足可能是其炎癥持續(xù)以及組織損傷的主要原因之一。此外，重型MPP的血清IgA顯著低于輕型及對(duì)照組，而IgM及IgG顯著高輕型及對(duì)照組，這與楊香紅等[8]報(bào)道相似，進(jìn)一步證實(shí)MPP患兒普遍存在免疫功能紊亂狀態(tài)，主要表現(xiàn)為IgM、IgG合成過(guò)度及IgA合成不足，且病情越重免疫功能紊亂越明顯。

MP感染后免疫應(yīng)答主要通過(guò)B細(xì)胞分泌免疫球蛋白、T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及補(bǔ)體系統(tǒng)激活而發(fā)揮。但MP持續(xù)感染導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)激活，可生成大量中性粒細(xì)胞趨化因子，病變部位大量聚集白細(xì)胞并釋放出水解酶，導(dǎo)致局部增生及損害，引起自身免疫損傷[9]。本研究中，MPP組急性期血清C3、C4水平均顯著高于恢復(fù)期及對(duì)照組，證實(shí)MP感染后早期可出現(xiàn)補(bǔ)體系統(tǒng)激活，且隨著病情進(jìn)展可導(dǎo)致連鎖反應(yīng)，為對(duì)抗、清除病原體將生成大量C3、C4，故在MPP急性期及重型中血清C3、C4水平將明顯升高。進(jìn)入恢復(fù)期后，抗原抗體不斷形成且補(bǔ)體明顯消耗，血清C3、C4水平趨于正常水平。

Th細(xì)胞亞群以及炎性細(xì)胞因子在MP致病過(guò)程中具有關(guān)鍵性作用，一方面細(xì)胞因子可直接對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生作用而反饋性調(diào)節(jié)免疫功能，另一方細(xì)胞因子之間可相互作用而影響免疫平衡。TNF-α是一種雙向作用因子，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，但過(guò)度分泌或持續(xù)增高可誘導(dǎo)或加重炎癥反應(yīng)的發(fā)生；IL-8則是一種由單核細(xì)胞分泌的趨化性炎性因子，在呼吸道疾病的發(fā)生中具有重要意義[10]。本研究中，重型及急性期MPP患兒的血清IL-8、TNF-α水平均分別顯著高于輕型、恢復(fù)期及對(duì)照組，且在輕型及恢復(fù)期仍顯著高于對(duì)照組，提示上述炎性細(xì)胞因子參與了MPP的發(fā)生、發(fā)展全程?？赡苁怯捎贛P異種抗原而進(jìn)入血液循環(huán)后，能夠激活單核巨噬細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞而釋放出大量的IL-8、TNF-α等，而上述細(xì)胞因子又將進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，加速M(fèi)PP的發(fā)生及發(fā)展[11]。IL-10是一種抗炎因子，對(duì)單核巨噬細(xì)胞具有強(qiáng)效活性抑制作用，還可抑制IL-β及TNF-α等的生成，從而抑制炎癥反應(yīng)，血清IL-10水平降低多提示機(jī)體免疫功能失調(diào)或持續(xù)炎癥損傷[12]。本研究中，急性期、重型MPP患兒的IL-10水平較對(duì)照組明顯降低，且恢復(fù)期仍處于低水平表達(dá)狀態(tài)，認(rèn)為MPP患兒具有IL-10分泌受抑現(xiàn)象，抗炎因子分泌不足而導(dǎo)致機(jī)體促炎因子處于相對(duì)優(yōu)勢(shì)地位，難以抑制促炎因子所致瀑布效應(yīng)，進(jìn)而發(fā)生一系列持續(xù)性炎癥損傷。IL-13是一種由Th2細(xì)胞生成的抗炎因子，主參與了機(jī)體抗炎反應(yīng)及抗原呈遞過(guò)程，臨床研究發(fā)現(xiàn)其在支氣管哮喘患者中具有明顯的過(guò)度表達(dá)現(xiàn)象[13]。本研究中急性期及重型MPP患兒表現(xiàn)為IL-13水平高表達(dá)而IL-10低表達(dá)，認(rèn)為MP感染后機(jī)體的免疫系統(tǒng)及促炎/抗炎系統(tǒng)紊亂，抗炎細(xì)胞因子分泌不足而導(dǎo)致炎癥持續(xù)以及組織損傷，而IL-13等依賴特異性抗炎細(xì)胞因子可能是低于MP感染的保護(hù)性免疫因子，對(duì)于控制機(jī)體炎癥反應(yīng)具有積極意義[14]。

綜上所述，兒童MP感染普遍存在補(bǔ)體系統(tǒng)激活、免疫功能降低或紊亂、促炎與抗炎反應(yīng)同時(shí)持續(xù)存在、促炎因子高表達(dá)，且急性期及重型MMP患兒的免疫紊亂較為明顯，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患兒的血清補(bǔ)體、免疫球蛋白及炎性細(xì)胞因子水平變化對(duì)疾病的早期診斷、病情評(píng)估及治療具有重要價(jià)值。

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[收稿2016-10-24 修回2016-12-13]

(編輯 張曉舟)

Valueofchangesofserumcomplement,immunoglobulinandinflammatorycytokinesinchildrenwithmycoplasmapneumonia

GUOFei-Bo,HANLi-Rong,YUHui,SHIHui.TianmenFirstPeople′sHospitalofHubeiProvince,Tianmen431700,China

Objective:To investigate the clinical value of the changes of serum complement,immunoglobulin and inflammatory cytokines in children with mycoplasma pneumonia (MP).Methods:60 cases of children with MP infection were collected as MPP group,60 cases of healthy children as control group.The serum levels of complement (C3,C4) and immunoglobulin (IgA,IgG,IgM) were detected by INA,the serum levels of inflammatory cytokines (IL-8,IL-10,IL-13,TNF-α) were detected by ELISA.Results:①The serum levels of IgM,C3,C4,IL-8,TNF-α and IL-13 in MPP group in acute stage were significantly higher than those in the recovery stage and control group (P<0.05),the levels of IL-8,TNF-α,IL-13 in the recovery stage were significantly higher than those in control group (P<0.05);the serum levels of IgA,IL-10 in MPP group in acute stage were significantly lower than those in the recovery stage and control group,and these were still significantly lower than the control group (P<0.05);the IgG in MPP group in acute stage was not significant difference with control group (P>0.05),but it in recovery stage was significantly higher than the acute stage and the control group (P<0.05).②The serum levels of IgM,IgG,C3,C4,IL-8,TNF-α and IL-13 in MPP group in severe were significantly higher than those in the mild stage and control group (P<0.05),and the levels of IgM,IL-8,TNF-α,IL-13 in the severe stage were significantly higher than those in control group (P<0.05);the serum levels of IgA,IL-10 in MPP group in severe stage were significantly lower than those in the mild stage and control group,and these in mild stage were still significantly lower than the control group (P<0.05).Conclusion:Children with MP infection have a significant cellular and humoral immune dysfunction,the detection of the changes of serum complement,immunoglobulin and inflammatory cytokines is valuable to assessing the disease staging and degree.

Mycoplasma pneumoniae;Children;Complement;Immunoglobulin;Inflammatory cytokines

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.06.021

郭飛波(1980年-)，男，碩士,副主任,主管檢驗(yàn)師,主要從事病毒免疫及分子病毒方面的研究。

R725

A

1000-484X(2017)06-0910-05