膽清膠囊的質(zhì)量標準研究

萇 玲 吳孟嵐 舒 柯* 王定兵 龍建丹 朱 丹

1.貴州省藥品檢驗所，貴州 貴陽 550004；2.黔東南州食品藥品檢驗檢測中心，貴州 凱里 556000； 3.貴州圣濟堂制藥有限公司，貴州 貴陽 550004

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膽清膠囊的質(zhì)量標準研究

萇 玲1吳孟嵐2舒 柯1*王定兵3龍建丹3朱 丹3

1.貴州省藥品檢驗所，貴州 貴陽 550004；2.黔東南州食品藥品檢驗檢測中心，貴州 凱里 556000； 3.貴州圣濟堂制藥有限公司，貴州 貴陽 550004

目的：建立膽清膠囊中虎耳草的薄層色譜鑒別及虎耳草中巖白菜素的含量測定方法。方法：采用薄層色譜法對膽清膠囊中虎耳草進行定性鑒別，采用高效液相色譜法測定虎耳草中巖白菜素的含量；色譜柱為Thermo C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，采用梯度洗脫；流速1mL/min；柱溫30℃；檢測波長為275nm。結(jié)果：薄層色譜鑒別斑點清晰，陰性對照無干擾；巖白菜素在0.05048μg～0.70666μg范圍中線性關系良好，r=0.9993，平均回收率為98.01%，RSD為1.39%(n=6)。結(jié)論：所建立的方法簡便、準確、重復性好，可用于膽清膠囊中虎耳草鑒別和巖白菜素的含量測定。

膽清膠囊；虎耳草；巖白菜素

膽清膠囊是按苗醫(yī)理論組方的復方制劑，具有清熱利濕、舒肝利膽的作用，臨床用于肝膽濕熱所致的脘脅疼痛、呃逆嘔惡、口干口苦、大便秘結(jié)，以及膽囊炎、膽石癥見上述證候者。膽清膠囊由虎耳草、鳳尾草、大黃和牛膽汁四味藥材組成[1]，方中虎耳草、鳳尾草、大黃粉碎成最細粉備用，牛膽汁濾過，與上述最細粉混勻，制成顆粒，干燥，裝入膠囊即得。原標準中只有大黃、牛膽汁及鳳尾草的薄層色譜鑒別和大黃的含量測定，對組方中成分最多的虎耳草無質(zhì)量控制標準，為提高該中成藥的質(zhì)量標準，增強用藥安全性，特建立虎耳草的薄層色譜鑒別及虎耳草中巖白菜素的含量測定。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀及配套工作站；超聲波清洗器(北京醫(yī)療設備廠，功率250W，頻率33kHz)；電子天平(梅特勒XPE205)。

1.2 材料 膽清膠囊(規(guī)格為0.3g/粒，批號：20150101、20150301、20150302)；陰性樣品自制；槲皮素(批號：100081-201408)、巖白菜素(批號: 111532-201203)購自中國食品藥品檢定研究院。薄層色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司)，乙腈為色譜純、水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別 取本品內(nèi)容物4g，加甲醇20mL，加熱回流2h，濾過，濾液加水5mL，蒸去甲醇，殘液用石油醚(30～60℃)提取3次，每次5mL，棄去石油醚液，提取后的水溶液加稀鹽酸5mL，水浴上加熱水解30min，冷卻后用乙酸乙酯20mL分2次振搖提取，合并提取液，揮干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液；取缺虎耳草的陰性樣品同法制成陰性對照溶液；另取槲皮素對照品加甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對照品溶液[2]。按照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述三種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶4∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，在紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色熒光斑點。結(jié)果表明，樣品斑點清晰，分離度好，陰性無干擾。見圖1。

2.2 含量測定

2.2.1 對照品的制備 精密稱取巖白菜素對照品，加甲醇制成每1mL含巖白菜素0.04mg的溶液，即為對照品溶液。

2.2.2 供試品的制備 取本品內(nèi)容物，研細，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率25kHz)1h，放冷，稱重，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 依照處方工藝，制備缺虎耳草的陰性樣品，并按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Thermo-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(0～20min，9%A；20～22min，9%A→20%A；22～32min，20%A；32～34min，20%A→9%A；34～55min，9%A)；檢測波長：275nm；流速：1.0mL/min，柱溫：30℃；進樣量10μL：理論塔板數(shù)按巖白菜素計算應不低于5000。結(jié)果見圖2。2.2.5 線性范圍考察 巖白菜素對照品溶液：0.050476mg/mL，進樣體積為1、2、4、6、7、10、12、14μL。 按上述色譜條件測定對照品峰面積，以峰面積為縱坐標，巖白菜素的濃度為橫坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程，巖白菜素：y=1569274.1894x+6434.7273，r=0.9993。結(jié)果表明巖白菜素在0.05048～0.70666μg范圍中線性關系良好。

2.2.6 精密度試驗 取上述對照品溶液10μL，按2.2.4項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定巖白菜素的峰面積。結(jié)果巖白菜素峰面積的RSD為0.67%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取同1份供試品(20150302)，按2.2.2項下方法制備，按2.2.4項下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、24h進樣，測定巖白菜素峰面積，RSD為0.78%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.8 重復性試驗 取同1份供試品(20150302)，按2.2.2項下方法平行制備6份供試品溶液，按2.2.4項下色譜條件測定巖白菜素含量，結(jié)果巖白菜素平均含量為0.8999mg/g，RSD為0.51%，表明該方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知巖白菜素含量的供試品6份(平均含量為0.8999mg/g)，分別精密加入含0.01896mg/mL的巖白菜素對照品溶液25mL，按2.2.2項下方法制備，按2.2.4項下色譜條件測定巖白菜素含量，計算加樣回收率，平均加樣回收率為98.01%，RSD為1.39%，結(jié)果表明該方法回收率較好。結(jié)果見表1。

表1 巖白菜素加樣回收率試驗結(jié)果 (n=6)

2.2.9 樣品測定 分別精密稱取不同批次的供試品粉末1g，按2.2.2項下方法制備，按2.2.4項下色譜條件分別測定峰面積和計算巖白菜素含量，三批樣品測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定 (n=3)

3 討論

3.1 薄層色譜 試驗中分別對溫度、濕度、以及薄層板進行了考察，結(jié)果表明供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點，且斑點清晰，分離度好，陰性無干擾，重現(xiàn)性好。

3.2 供試品的制備 試驗中分別對提取方法、提取時間、提取溶劑以及提取溶劑的體積進行了考察，結(jié)果表明50%的甲醇25mL超聲1h，有效成分提取完全，方法簡便。

3.3 檢測波長 經(jīng)查閱資料并對巖白菜素進行光譜掃描后，確定檢測波長為275nm。3.4 色譜條件優(yōu)化 試驗中分別比較了不同的流動相系統(tǒng)、柱溫及流速，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，梯度洗脫，柱溫30℃，流速1.0mL/min時，色譜峰基線分離，峰型對稱，分離較好，保留時間適中。

虎耳草主要化學成分有巖白菜素、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素 3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、沒食子酸、原兒茶酸、琥珀酸、反甲基丁烯二酸、β-谷甾醇及長鏈烷烴等[4]。筆者在原標準的基礎上經(jīng)研究，增加了虎耳草的薄層鑒別和含量測定，方法專屬性好，靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定可靠，使膽清膠囊的質(zhì)控標準更趨完善，可有效控制膽清膠囊的質(zhì)量。

[1]WS-10049(ZD-0049)-2002-2011Z .國家藥品標準[S].

[2]貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準[M]. 貴陽：貴州科技出版社，2003:235.

[3]徐昌艷，張麗艷，李燕. 黔產(chǎn)苗藥虎耳草的 HPLC 指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑學雜志，2012,18(5):73-76.

[4]蒲祥，宋良科.虎耳草的研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2009, 37(31):15224 -15226.

Study on Quality Standard of Danqing Capsule

CHANG Ling1WU Menglan2SHU Ke1*WANG Dingbing3LONG Jiandan3ZHU Dan3

1.Guizhou Provincial Institute for Drug Control, Guiyang 550004,China; 2.Qiandongnan Prefecture Food Drug Inspection Testing Center, Kaili 556000,China; 3.Guizhou Shengjitang Pharmaceutical Co. Ltd.Guiyang 550004,China

Objective To establish a method for the determination of Danqing capsule in the Saxifraga stolonifera by TLC and the content of Bergenin in Saxifraga stolonifera. Methods The TLC method of Danqing capsule in in the Saxifraga stolonifera were identified, the content of Bergenin in Saxifraga stolonifera was determined by HPLC; column chromatography Thermo C18(4.6mm×250mm，5μ), flow phase: with acetonitrile as the mobile phase A, with 0.1% phosphoric acid as mobile phase B, the gradient elution, flow rate of 1ml/min, column temperature 30℃, detection wavelength was 275nm.Results TLC spots were clear, without the interference of negative control; Bergeninum in 0.05048μg～0.70666μg range linear relationship is good,r=0.9993. The average recovery rate was 98.01%,RSD=1.39% (n=6). Conclusion The established method is simple, accurate and with good reproducibility and can be used for the determination of the content of Bergenin in Saxifraga stolonifera in Danqing capsule and the identification of Saxifraga stolonifera.

Danqing Capsule;Saxifragastolonifera; Bergenin

萇玲(1979-)，女，本科，主管藥師，研究方向為藥品復核檢驗、標準擬定。E-mail:29630048@qq.com

R284.1

A

1007-8517(2017)11-0046-03

2017-04-10 編輯：梁志慶)