2種升溫方式對毛蚶呼吸代謝及免疫相關(guān)酶活性的影響

秦藝銘，陳麗梅，李 莉，劉利華，郭永軍，高金偉

(1.天津農(nóng)學院 水產(chǎn)學院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384； 2.山東省海洋生物研究院，山東 青島 266104 )

毛蚶(Scapharcasubcrenata)屬軟體動物門、雙殼綱、翼形亞綱、蚶目、蚶科、毛蚶屬，俗稱毛蛤、麻蚶、瓦楞子等[1]，廣泛分布于東亞的中國、日本、朝鮮沿岸[2-3]，在中國以萊州灣、渤海灣、遼東灣、海州灣等淺海區(qū)資源尤為豐富，其生長的適宜溫度為18～28 ℃[4]。毛蚶作為一種體溫調(diào)節(jié)能力極弱的變溫動物，其體溫主要依賴于周圍環(huán)境溫度。而季節(jié)變化和降雨常引起毛蚶周圍環(huán)境溫度的劇烈波動，對其生長和存活造成不利影響[5]。目前，有關(guān)溫度對毛蚶影響的研究主要包括生長、呼吸代謝和免疫等方面。如姜祖輝等[6-7]分別研究了溫度11～17 ℃和15～25 ℃下毛蚶耗氧率和排氨率的變化，發(fā)現(xiàn)在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶耗氧率和排氨率隨溫度升高而增大；陳麗梅等[5]報道了溫度變化(11～23 ℃)對毛蚶鰓、外套膜和肝胰腺組織中抗氧化酶活性的影響，結(jié)果表明，毛蚶3種組織中的超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性在試驗期間均呈先升后降的趨勢。而有關(guān)溫度變化方式對毛蚶呼吸代謝和免疫相關(guān)酶活性影響的研究卻鮮見報道。

溫度是影響貝類呼吸代謝和酶活性的關(guān)鍵環(huán)境因子之一，溫度變化會在一定程度上導致貝類呼吸代謝和酶活性的改變。呼吸和排泄是貝類重要的生理活動，呼吸率和排泄率通常被用作表征其生理活動強度的重要指標[8]。而超氧化物歧化酶和過氧化氫酶是貝類抗氧化防御系統(tǒng)中的重要組成部分[9]，能有效地消除活性氧，防止細胞膜系統(tǒng)過氧化作用的發(fā)生[10]；酸性磷酸酶和溶菌酶是2種重要的水解酶，在細胞吞噬作用中，通過脫顆粒作用釋放到血清中發(fā)揮分解和防御的作用[11]。因此，檢測和分析生物體呼吸代謝和體內(nèi)的超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶和溶菌酶等酶活性的變化，可以反映出生物體應(yīng)對環(huán)境脅迫的生理生化機制。

筆者用緩慢升溫和急劇升溫2種升溫方式，研究升溫對毛蚶呼吸代謝以及肝胰腺組織中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶和溶菌酶等酶活性的影響，以查明毛蚶對溫度脅迫的響應(yīng)機制，為毛蚶的科學養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用毛蚶殼長(4.99±0.48) cm，采自天津濱海新區(qū)大神堂海域，清潔殼表污物和附著生物后，暫養(yǎng)于水箱中。暫養(yǎng)期間，連續(xù)充氣，每日全量換水1次，并早晚各投喂等鞭金藻(Isochrysisgalbana)1次，每次投喂后使水箱內(nèi)藻類密度達到1×104個/mL。暫養(yǎng)海水鹽度27±1，水溫(15±1)℃。暫養(yǎng)14 d后，挑選健康個體用于試驗。

1.2 試驗設(shè)計

試驗設(shè)4個溫度梯度：15(對照組)、19、23、27 ℃，每個處理組溫度均采用急劇升溫和緩慢升溫2種升溫方式，19、23、27 ℃處理組用加熱棒控制溫度。每個溫度梯度設(shè)置3個平行。

急劇升溫處理組是將暫養(yǎng)在15 ℃海水中的毛蚶分別轉(zhuǎn)移到溫度為19、23、27 ℃的水槽中，每個平行組隨機取出1只毛蚶，立即測定其耗氧率和排氨率，并在轉(zhuǎn)移后的0、3、6、12、24、48、72、96 h自每個平行組隨機取出2只毛蚶，用于免疫酶活性的檢測。緩慢升溫處理組升溫幅度為1 ℃/12 h，同時達到各預設(shè)溫度并維持恒定溫度3 d后，每個平行組隨機取出1只毛蚶立即測定其耗氧率和排氨率，另外取出2只毛蚶用于酶活性的檢測。

1.3 耗氧率和排氨率的測定

試驗以1 L廣口瓶為呼吸瓶，每瓶放1只生存狀態(tài)良好、規(guī)格一致的毛蚶，加滿海水后立即用保鮮膜封口。每組試驗呼吸瓶的水環(huán)境與各處理水槽中水環(huán)境相同，以不加毛蚶的呼吸瓶作為對照。以毛蚶放入試驗水體張殼為起始時間計時，試驗持續(xù)2 h。

溶解氧的測定采用Winker碘量法，NH4-N質(zhì)量濃度則采用次溴酸鈉氧化法測定(GB/T 12763.4—2007)。試驗結(jié)束后，用游標卡尺測定毛蚶的殼長(cm)和殼寬(cm)，取軟體部組織于60 ℃下烘干至恒定質(zhì)量。根據(jù)試驗前后水體中溶解氧和NH4-N質(zhì)量濃度的變化，按下式計算毛蚶的耗氧率[OR，mg/(g·h)] 和排氨率[NR，μmol/(g·h)]：

OR=(ρ0,DO-ρt,DO)V/(m×t)

式中，ρ0,DO和ρt,DO為試驗開始和結(jié)束時水體中溶解氧質(zhì)量濃度(mg/L)的變化，V為呼吸瓶中水體的體積(L)，m為毛蚶軟組織干質(zhì)量(g)，t為試驗持續(xù)時間(h)。

NR=(ρt,NH4-N-ρ0,NH4-N)V/(m×t′)

式中，ρ0,NH4-N和ρt,NH4-N為試驗開始和結(jié)束時水體中NH4-N質(zhì)量濃度(mg/L)的變化，V為呼吸瓶中水體的體積(L)，m為毛蚶軟組織干質(zhì)量(g)，t′為試驗持續(xù)時間(h)。

Q10=(M2/M1)10/ (θ2-θ1)

式中，Q10為溫度對毛蚶代謝的影響強度，M1和M2分別為試驗溫度(θ1)和試驗溫度(θ2)時毛蚶的代謝率耗氧率或排氨率。

O∶N=(OR/16)/(NR/14)

式中，O∶N為毛蚶呼吸氧原子數(shù)與排出氨態(tài)氮原子數(shù)之比。

1.4 免疫酶活性的測定

解剖毛蚶，取其肝胰腺組織用0.86%生理鹽水清洗，經(jīng)液氮速凍后-80 ℃保存，待樣品全部采集完成后統(tǒng)一測定。測定時加入其組織質(zhì)量9倍體積的生理鹽水，冰浴中研磨，所得的組織勻漿，4 ℃ 3000 r/min離心10 min，取上清液，將6只毛蚶肝胰腺組織的上清液以相同比例混合后于-80 ℃保存?zhèn)溆?。超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶和溶菌酶等免疫酶活性以及蛋白質(zhì)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進行測定，具體方法參見試劑盒使用說明。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗所得數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0和Origin 8.0軟件進行分析和作圖，采用單因素方差分析進行數(shù)據(jù)分析，通過Duncan多重比較法分析2種升溫方式下毛蚶耗氧率、排氨率和酶活性的差異，以P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 2種升溫方式對毛蚶呼吸代謝的影響

2.1.1 2種升溫方式對毛蚶耗氧率和排氨率的影響

單因素方差分析表明，溫度對毛蚶的耗氧率和排氨率有極顯著影響(P<0.01)。在試驗溫度范圍內(nèi)，2種升溫方式下，毛蚶耗氧率和排氨率的變化趨勢相似，均表現(xiàn)為隨溫度的升高先升后降，于23 ℃達到最大值(圖1)。

急劇升溫方式下，23 ℃處理組中毛蚶耗氧率顯著高于15、19、27 ℃處理組(P<0.05)，且15、19、27 ℃處理組間毛蚶耗氧率差異不顯著 (P>0.05)。緩慢升溫方式下，23 ℃處理組中毛蚶耗氧率顯著高于19 ℃處理組(P<0.05)，與15、27 ℃處理組間毛蚶耗氧率差異不顯著 (圖1a，P>0.05)。2種升溫方式相比較，23 ℃急劇升溫與緩慢升溫方式間毛蚶耗氧率差異極顯著 (P<0.01)，19、27 ℃ 2種升溫方式間毛蚶耗氧率差異不顯著 (P>0.05)。

急劇升溫方式下，23 ℃處理組中毛蚶排氨率顯著高于其他3個溫度處理組(P<0.05)；27 ℃處理組中毛蚶排氨率與15 ℃對照組相比差異顯著(P<0.05)，與19 ℃處理組相比差異不顯著 (P>0.05)。

圖1 2種升溫方式對毛蚶耗氧率(a)和排氨率(b)的影響Fig.1 Effects of two warming patterns on oxygen consumption rates (a) and ammonia excretion rates (b) of ark shell S. subcrenata 大寫字母“A、B、C”表示急劇升溫方式下不同溫度處理組各數(shù)據(jù)存在顯著性差異(P<0.05)，小寫字母“a、b、c”表示緩慢升溫方式下不同溫度處理組各數(shù)據(jù)存在顯著性差異(P<0.05). “A, B, and C” indicate significant differences among groups under rapid warming (P<0.05), “a, b, and c” indicate significant differences among groups under slow warming (P<0.05).

緩慢升溫方式下，23 ℃處理組中毛蚶排氨率與27 ℃處理組差異顯著 (P<0.05)，與15、19 ℃處理組差異不顯著 (P>0.05)。2種升溫方式相比較，19 ℃急劇升溫與緩慢升溫方式間毛蚶排氨率差異顯著 (P<0.05)，23、27 ℃ 2種升溫方式間毛蚶排氨率差異極顯著 (P<0.01)。

2.1.2 2種升溫方式對毛蚶代謝率Q10值的影響

2種升溫方式下毛蚶耗氧率Q10值和排氨率Q10值在19～23 ℃最大，其中急劇升溫方式下毛蚶耗氧率Q10值和排氨率Q10值分別為11.84和8.75(表1)，緩慢升溫方式下毛蚶耗氧率Q10值和排氨率Q10值分別為4.64和2.43(表2)。急劇升溫方式下毛蚶耗氧率Q10值和排氨率Q10值在23～27 ℃最小，分別為0.34和0.18。緩慢升溫方式下毛蚶耗氧率Q10值在15～19 ℃最小，為0.43；排氨率Q10值在23～27 ℃最小，為0.04。

表1 急劇升溫對毛蚶代謝率Q10的影響

表2 緩慢升溫對毛蚶代謝率Q10的影響

2.1.3 2種升溫方式對毛蚶O∶N的影響

在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶O∶N為0.64～5.33(表3)。急劇升溫與緩慢升溫方式下毛蚶O∶N均在19 ℃最小，分別為0.64和1.12。急劇升溫方式下毛蚶O∶N在15 ℃有最大值，為2.14；緩慢升溫方式下毛蚶O∶N在27 ℃有最大值，為5.33。

表3 2種升溫方式對毛蚶O∶N的影響

2.2 2種升溫方式對毛蚶免疫相關(guān)酶活性的影響

2.2.1 緩慢升溫方式對毛蚶免疫相關(guān)酶活性的影響

緩慢升溫方式對毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶活性的影響見圖2a。在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶的活性在15 ℃有最大值，并且顯著高于19、23、27 ℃處理組(P<0.05)，19、23、27 ℃處理組間毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶的活性均差異顯著(P<0.05)。

緩慢升溫方式對毛蚶肝胰腺中過氧化氫酶活性的影響見圖2b。在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶肝胰腺中過氧化氫酶的活性呈先升后降的趨勢，在19 ℃有最大值，并且顯著高于23、27 ℃處理組(P<0.05)。15 ℃對照組毛蚶肝胰腺中過氧化氫酶的活性與19、23、27 ℃處理組毛蚶肝胰腺中過氧化氫酶的活性均無顯著差異(P>0.05)，23、27 ℃處理組間毛蚶肝胰腺中過氧化氫酶的活性差異不顯著(P>0.05)。

緩慢升溫方式對毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶活性的影響見圖2c。在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶活性在15 ℃有最大值，并且顯著高于19、23、27 ℃處理組(P<0.05)，19 ℃處理組毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶活性顯著低于23、27 ℃處理組(P<0.05)，23、27 ℃處理組間毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶的活性差異不顯著(P>0.05)。

緩慢升溫方式對毛蚶肝胰腺中溶菌酶活性的影響見圖2d。在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶肝胰腺中溶菌酶的活性呈先升后降的趨勢，在19 ℃有最大值，并且顯著高于15、23、27 ℃處理組(P<0.05)，15 ℃對照組毛蚶肝胰腺中溶菌酶的活性顯著低于23、27 ℃處理組(P<0.05)，23、27 ℃處理組間毛蚶肝胰腺中溶菌酶的活性差異不顯著(P>0.05)。

圖2 緩慢升溫方式下毛蚶超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶和溶菌酶活性的變化Fig.2 Changes in activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), acid phosphatase (ACP) and lysozyme (LSZ) at slow warming 小寫字母“a、b、c”表示緩慢升溫方式下不同溫度處理組各數(shù)據(jù)存在顯著性差異(P<0.05). “a, b, and c” indicate significant differences among groups at slow warming(P<0.05).

2.2.2 急劇升溫方式對毛蚶免疫相關(guān)酶活性的影響

急劇升溫方式對毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性的影響見圖3a、圖3b。15 ℃對照組毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活性在試驗期間基本保持穩(wěn)定，19、23 ℃處理組毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活性隨時間變化趨勢不明顯，27 ℃處理組毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活性呈先升后降的變化趨勢，在6 h達到峰值，并顯著高于對照組(P<0.05)。

急劇升溫方式對毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶和溶菌酶活性的影響見圖3c、圖3d。15 ℃對照組毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶和溶菌酶的活性在試驗期間基本保持穩(wěn)定，19 ℃處理組毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶和溶菌酶的活性隨時間變化趨勢不明顯，23、27 ℃處理組毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶和溶菌酶的活性呈先升后降的變化趨勢，在6 h達到峰值，并顯著高于對照組(P<0.05)。

圖3 急劇升溫方式下毛蚶超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶和溶菌酶活性的變化Fig.3 Changes in activities of SOD, CAT, ACP and LSZ at rapid warming 小寫字母“a、b、c”表示急劇升溫方式下相同取樣時間點各數(shù)據(jù)存在顯著性差異(P<0.05). “a, b, and c” indicate significant differences among groups at rapid warming(P<0.05).

3 討 論

3.1 2種升溫方式對毛蚶呼吸代謝的影響

溫度是貝類生存環(huán)境的關(guān)鍵因素之一，貝類的生長、繁殖和代謝等都與溫度密切相關(guān)[12]。本試驗發(fā)現(xiàn)，在試驗溫度范圍內(nèi)，毛蚶耗氧率和排氨率整體變化趨勢為隨溫度的升高先增后減。這種變化趨勢與同為雙殼貝類的魁蚶(S.broughtonii)[13]、硬殼蛤(Mercenariamercenaria)[14]、蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)[15]隨溫度變化的情況相似。海洋生物體內(nèi)存在著代謝補充途徑，當外界環(huán)境溫度突然升高時，它們會通過代謝補充途徑提高自身的代謝率以適應(yīng)這種變化[16]。而已有研究表明，在適宜溫度范圍內(nèi)，貝類代謝率隨著溫度的升高而增加，超出此范圍代謝就會出現(xiàn)異常[14-15,17]。本試驗中海水溫度超過23 ℃時，毛蚶的耗氧率和排氨率開始降低，說明溫度超過23 ℃對毛蚶的呼吸代謝產(chǎn)生了抑制作用。同緩慢升溫方式相比，急劇升溫方式下毛蚶耗氧率和排氨率更高，意味著毛蚶在水溫急劇變化條件下需要消耗更多能量，這與徐東等[18]對蝦夷扇貝的研究結(jié)果一致。姜娓娓等[19]同樣采用了2種升溫方式分析溫度變化對皺紋盤鮑(Haliotisdiscushannai)耗氧率和排氨率的影響，也得到了類似的結(jié)果：溫度高于20 ℃時，溫度急劇變化組的皺紋盤鮑具有更高的耗氧率和排氨率。

Q10值是反映生物體內(nèi)反應(yīng)速度與溫度關(guān)系的一個指標，表示溫度每升高10 ℃所引起的代謝率的變化[8]。研究表明，雙殼貝類的Q10值通常為1.0～2.5，平均為2.0[20-21]。從本試驗結(jié)果來看，毛蚶代謝率的Q10平均值為3.01，19～23 ℃2種升溫方式下毛蚶的耗氧率Q10值分別達到了11.84和4.64，排氨率Q10值分別為8.75和2.43，與其他結(jié)論值相比，毛蚶的Q10值相對較大，說明毛蚶對溫度的敏感性相對較高。有研究表明，Q10值越大，說明該溫度范圍內(nèi)，由溫度的升高引起的代謝率變化越大[8]。本試驗中，19～23 ℃溫度區(qū)間Q10值高于其他溫度區(qū)間，說明毛蚶在此區(qū)間對溫度較為敏感，代謝旺盛。從本試驗結(jié)果來看，急劇升溫方式下毛蚶代謝率Q10值在15～19 ℃、19～23 ℃均高于緩慢升溫方式下毛蚶代謝率Q10值，這說明毛蚶生理代謝對溫度的劇烈變化較為敏感，這與徐東等[18]得到的研究結(jié)果相似。

O∶N是表征動物呼吸底物的重要參數(shù)，反映了動物在特定狀態(tài)下體內(nèi)的脂肪、糖類和蛋白質(zhì)代謝的比例關(guān)系[22]，是評估動物生理呼吸代謝中能源物質(zhì)消耗情況的一個重要指標。Mayzaud[23]研究表明，當生物體完全進行蛋白質(zhì)代謝時，O∶N較低，約為7；Ikeda[24]認為，當生物體由蛋白質(zhì)和脂肪氧化供能時，O∶N約為24；Conover等[25]研究表明，如果機體耗能主要由脂肪或碳水化合物提供，O∶N將大于24，甚至無窮大。從本試驗結(jié)果來看，毛蚶O∶N為0.64～5.33，說明毛蚶在本試驗過程中主要以蛋白質(zhì)代謝為主，與王沖等[7]研究結(jié)果一致。

3.2 2種升溫方式對毛蚶免疫相關(guān)酶活性的影響

在逆境下，生物體內(nèi)產(chǎn)生的自由基大量積累，打破了細胞內(nèi)原有的動態(tài)平衡狀態(tài)，對細胞產(chǎn)生損傷[26]。而貝類的非特異免疫體系中，抗氧化系統(tǒng)對氧自由基的清除是最重要的[9]。該系統(tǒng)中的超氧化物歧化酶是降解活性氧自由基的第一道防線，可將超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫或過氧化物；過氧化氫酶再將過氧化氫轉(zhuǎn)化為水和氧氣，以減輕自由基對機體的損害[27]。本試驗中，在急劇升溫方式下，毛蚶肝胰腺中的超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性在27 ℃處理組中隨時間變化呈現(xiàn)先升后降的趨勢，這種變化趨勢與陳麗梅等[5]研究溫度突變對毛蚶肝胰腺中這2種酶活性影響的結(jié)果一致。這可能是由于高溫脅迫下，毛蚶體內(nèi)的活性氧自由基不斷積累，毛蚶啟動抗氧化防御系統(tǒng)，通過催化過氧陽離子的歧化反應(yīng)，消除氧自由基的傷害；隨著高溫脅迫時間的延長，機體產(chǎn)生過多的活性氧自由基超過其承受上限，從而導致機體抗氧化功能發(fā)生紊亂，機體免疫力下降[19]。和其他處理組相比，27 ℃處理組抗氧化酶活性隨時間變化趨勢最為明顯，說明毛蚶在此溫度點發(fā)生了應(yīng)激性的生理生化反應(yīng)；19 ℃和23 ℃處理組中毛蚶超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活性隨著升溫時長的增加也有一定的波動性，但整體來說，其活性變化沒有明顯的規(guī)律。

本試驗中，緩慢升溫方式下，毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性分別為89.26～156.75 U/mg和23.62～27.61 U/mg；急劇升溫方式下，毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性分別為77.54～178.21 U/mg和4.71～29.85 U/mg。2種升溫方式相比，急劇升溫方式下毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性變化范圍更大，波動更劇烈，說明急劇升溫對毛蚶肝胰腺中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性的影響更為嚴重。

酸性磷酸酶和溶菌酶是存在于細胞內(nèi)溶酶體中的2種水解酶。酸性磷酸酶是溶酶體的標志性酶類，能夠催化有機磷酸酯水解，打開磷酸酯鍵，將磷酸酯根離子釋放，進而破壞細菌的細胞壁，對機體起到免疫防御的作用[28]。溶菌酶為堿性蛋白，其作用機制主要在于它能夠溶解細菌細胞壁中的肽聚糖成分，從而使細菌的細胞壁破損，細胞崩解[29]。本試驗中，急劇升溫方式下，23、27 ℃處理組毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶和溶菌酶的活性隨時間的變化趨勢為先升后降，在6 h達到峰值。姜娓娓等[19]在研究5、10、15、20、25 ℃溫度梯度下皺紋盤鮑消化腺中酸性磷酸酶和溶菌酶的活性時，也得到了相同的變化趨勢。結(jié)合抗氧化酶的活性變化發(fā)現(xiàn)，高溫脅迫可能同時誘導毛蚶體內(nèi)抗氧化酶和水解酶等免疫相關(guān)酶活性的變化。隨著脅迫時間的延長，毛蚶啟動免疫防御系統(tǒng)，提高體內(nèi)免疫相關(guān)酶的活性，從而增強機體的免疫防御能力。

本試驗中，緩慢升溫方式和急劇升溫方式下，毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶活性分別為45.67～54.55 U/g和38.08～88.26 U/g。2種升溫方式相比，急劇升溫方式下毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶活性變化范圍更大，波動更劇烈，說明急劇升溫對毛蚶肝胰腺中酸性磷酸酶活性的影響更為嚴重。緩慢升溫方式和急劇升溫方式下，毛蚶肝胰腺中溶菌酶活性的變化分別為0.66～14.52 μg/mg和0.66～2.31 μg/mg。2種升溫方式相比，急劇升溫方式下毛蚶肝胰腺中溶菌酶的活性數(shù)值偏小，說明急劇升溫嚴重抑制了毛蚶肝胰腺中溶菌酶的活性。

綜上所述，2種升溫方式對毛蚶呼吸排泄以及超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶和溶菌酶等免疫相關(guān)酶活性均會產(chǎn)生顯著影響，且急劇升溫比緩慢升溫對毛蚶的影響更加明顯。在毛蚶的養(yǎng)殖生產(chǎn)及運輸中，應(yīng)當盡量避免環(huán)境溫度的劇烈波動，以免引起毛蚶出現(xiàn)強烈應(yīng)激反應(yīng)而導致死亡。