針刺 內(nèi)關(guān)穴對慢性心衰小鼠心功能及炎性因子的影響

郭 穎，孫興華，武文鵬，孫遠征，祝鵬宇，趙廣然

（黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，哈爾濱 150001）

針刺 內(nèi)關(guān)穴對慢性心衰小鼠心功能及炎性因子的影響

郭 穎，孫興華，武文鵬，孫遠征*，祝鵬宇，趙廣然

（黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，哈爾濱 150001）

目的 研究針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心力衰竭小鼠心功能及炎性因子的影響。方法 動物分為正常組、模型組、針刺組，每組各15只，腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液制備慢性心力衰竭模型。針刺組每日上午行針刺干預，針刺干預結(jié)束后，間隔30 min予以腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液，連續(xù)針刺干預4周。正常組和模型組只予捆綁固定，不進行任何治療。采用多普勒超聲檢測心功能；采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進行測定血清細胞因子IL-1β、IL-10、TNF-α含量。結(jié)果 與模型組比較，針刺組在LVEDD、LVESD呈降低趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）；與模型組比較，針刺組在LVEF、LVFS呈升高趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。與模型組比較，針刺組小鼠血清IL-1β、TNF-α含量均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。與模型組比較，針刺組小鼠血清IL-10含量呈升高趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。結(jié)論 針刺內(nèi)關(guān)穴能夠增加慢性心衰小鼠LVEDD和LVESD，從而改善心室重塑；降低LVEF和LVFS，改善心功能；還能提高血清中IL-10含量，抑制炎性因子的表達；降低促炎因子IL-1β、TNF-α含量，減緩炎性反應進程。

慢性心力衰竭；心功能；炎性因子；針灸療法；穴，內(nèi)關(guān)

心力衰竭，又稱充血性心力衰竭，是心臟疾病發(fā)展的終末期階段，是各種心臟疾病導致心功能不全的一種綜合征。分為急性心力衰竭（AHF）和慢性心力衰竭（CHF）。慢性心力衰竭以外周血流分布異常和神經(jīng)內(nèi)分泌激活為特征，臨床上以左心衰較為常見，多見于冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓性心臟病、二尖瓣及主動脈瓣關(guān)閉不全等。以往研究[1-3]表明，中醫(yī)藥可以通過多層次、多水平的作用機制改善慢性心力衰竭，在改善心室重構(gòu)、逆轉(zhuǎn)心衰進程等方面有良好的作用。本研究旨在觀察針刺內(nèi)關(guān)穴對慢性心衰小鼠心功能及其炎性因子的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性小鼠45只，4周齡，體質(zhì)量（22.56±1.83）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學藥物安全性評價中心提供，合格證編號為：SCXK（黑）2013004。清潔級動物實驗室，正常光照和溫控，相對濕度45%～65%。自由進食、飲水。

1.2 試劑與儀器 鹽酸異丙腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司產(chǎn)品）、IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）、IL-10酶聯(lián)免疫試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）、TNF-α酶聯(lián)免疫試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）、“華佗牌”一次性Φ0.25 mm×13 mm針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司產(chǎn)品）、電子秤（湖南儀器儀表總廠天平廠產(chǎn)品）、低溫高速離心機（美國Biorad公司產(chǎn)品）、VEvo2100彩色多普勒超聲儀（Visual Sonics Inc公司產(chǎn)品）。

1.3 模型建立、分組與干預方法 動物隨機分為3組，即：正常組、模型組、針刺組，每組各15只。模型組和針刺組參照文獻[4]，制備小鼠慢性心衰模型。連續(xù)腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液，每次注射3 mg/kg，注射2次/d，連續(xù)4周。正常組，每日腹腔注射等劑量的生理鹽水。針刺組每日上午行針刺干預。內(nèi)關(guān)穴參照中國針灸學會實驗針灸分會制定的《實驗動物穴位圖譜》取小鼠內(nèi)關(guān)穴，采用一次性Φ0.25 mm×13 mm針灸針直刺小鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，進針約3 mm，留針30 min，期間每間隔10 min行小幅度捻轉(zhuǎn)行針。針刺干預結(jié)束后，間隔30 min予以腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液。連續(xù)針刺干預4周。正常組和模型組只予捆綁固定，不進行任何治療。

1.4 檢測指標 心功能檢測：戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠，小鼠仰臥固定于鼠板，于左前胸鎖骨下至肋骨下緣備皮。多普勒超聲經(jīng)胸前壁測定小鼠左心結(jié)構(gòu)及功能，在左室長軸像引導下，測量左心室舒張末徑（LVEDD）、左心室收縮膜徑（LVESD）、左心室射血分數(shù)（LVEF%）、左室內(nèi)徑縮短率（LVFS%）進行心功能分析。血清炎性因子含量測定：小鼠腹主動脈取血5 mL，注入試管中，搖勻，3 000 r/min離心20 min，分離血清，均分3份。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進行測定血清細胞因子IL-1β、IL-10、TNF-α含量，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學分析 用SPSS 18.0軟件包進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示。多個樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法；方差不齊時用Tamhane’s T2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠心功能比較 見表1。

2.2 各組小鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α含量比較 見表2。

表1 各組小鼠心功能比較(x±s, n=15)

表2 各組小鼠IL-1β、IL-10、TNF-α比較(x±s, n=15) pg/mL

3 討論

內(nèi)關(guān)穴是治療心胸疾病的經(jīng)典穴和首選穴[5]。內(nèi)關(guān)穴位手厥陰經(jīng)治絡(luò)穴，還是八脈交會穴，通于陰維脈?！皟?nèi)關(guān)”首載于《靈樞·經(jīng)脈》“手心主之別，名曰內(nèi)關(guān)?！薄峨y經(jīng)·二十九難》載：“陰維為病苦心痛?！眱?nèi)關(guān)穴的主治病癥為“心系實則痛，虛則為煩心。”心包經(jīng)與三焦經(jīng)相表里，針刺內(nèi)關(guān)穴能夠通三焦、調(diào)諸臟，為內(nèi)關(guān)穴治療心胸疾病提供了理論依據(jù)。以往研究[6]表明，電針內(nèi)關(guān)穴能顯著改善心肌缺血大鼠心肌缺血狀態(tài)，改善心肌細胞的損傷和細胞凋亡，升高血清中PGF1α含量，降低血清中TXB2含量，抑制酸敏感離子通道開放。電針內(nèi)關(guān)穴能通過抑制心肌細胞β1-AR的過度激活延緩高血壓-心肌肥厚的進程[7]。研究[8]顯示，針刺內(nèi)關(guān)穴能夠通過“內(nèi)關(guān)-心臟神經(jīng)投射的同源細胞”調(diào)節(jié)心臟的功能活動，通過調(diào)節(jié)心臟局部神經(jīng)遞質(zhì)作用改善心肌肥厚。本實驗通過腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液建立了慢性心衰模型，目前是比較公認的建模方法。本組研究結(jié)果顯示，通過腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素注射液制備慢性心衰小鼠模型，模型組造模后小鼠LVEDD和LVESD增大，LVEF和LVFS降低，說明小鼠心功能受損；針刺內(nèi)關(guān)穴干預能夠縮短慢性心衰小鼠的LVEDD和LVESD，逆轉(zhuǎn)心肌重構(gòu)，進而改善心功能。

細胞因子是特異性免疫和非特異性免疫反應的蛋白質(zhì)介質(zhì)，在抗原刺激的免疫應答及炎癥反應過程中由多種細胞產(chǎn)生，并同相應靶細胞的高親和力受體結(jié)合后在局部或全身發(fā)揮復雜的生物學功能。心肌缺血和再灌注導致心肌組織細胞產(chǎn)生損傷級聯(lián)反應，可能是啟動或觸發(fā)心肌細胞死亡的主要機制。炎性反應是動脈粥樣硬化形成的關(guān)鍵因素，從啟動期白細胞的募集到不穩(wěn)定斑塊的碎裂，均有炎癥反應的參與。炎癥細胞產(chǎn)生的細胞因子是造成心肌細胞死亡的主要原因。心肌缺血后，許多免疫細胞及細胞因子參與了免疫應答和調(diào)節(jié)，許多細胞因子作為啟動因素誘導心肌缺血后的炎性反應，這些細胞因子形成網(wǎng)絡(luò)，影響著心肌缺血損傷的發(fā)展及預后。其中包括白細胞介素1β（IL-1β）、白細胞介素10（IL-10）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等。IL-1β是一個在免疫和炎性反應中起著多種生物活性的細胞因子，心肌缺血后IL-1βmRNA和蛋白在心肌缺血后表達增加，表明IL-1β參與了心肌缺血損傷同修復過程。研究[9]提示，TNF-α水平的高低與心室泵血功能下降和心肌重構(gòu)有密切關(guān)系。本組研究結(jié)果顯示，針刺內(nèi)關(guān)穴能夠有效提高血清IL-10含量，說明針刺內(nèi)關(guān)穴能夠起到抑制炎性因子的作用；針刺內(nèi)關(guān)穴能夠有效降低血清中IL-1β、TNF-α含量，說明針刺內(nèi)關(guān)穴能夠降低心肌組織及血漿促炎因子IL-1β、TNF-α含量，減緩炎性反應進程。

綜上，針刺內(nèi)關(guān)穴能夠增加慢性心衰小鼠LVEDD和LVESD，從而改善心室重塑；降低LVEF和LVFS，改善心功能。同時，針刺內(nèi)關(guān)穴還能提高血清中IL-10含量，抑制炎性因子的表達；降低促炎因子IL-1β、TNF-α含量，減緩炎性反應進程。

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Effect of acupuncture atN eiguan(PC 6) on cardiac function and infl ammatory factor of chronic heart failure mice

GUO Ying, SUN Xinghua, WU Wenpeng, SUN Yuanzheng*, ZHU Pengyu, ZHAO Guangran
(The Second Affi liated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150001, China)

Objective To study the effect of acupuncture at Neiguan (PC 6) on cardiac function and infl ammatory factor of chronic heart failure m ice. Methods Rats were random ly divided into regular group, model group and acupuncture group, 15 m ice in each group. To make chronic heart failure model by intraperitoneal injection of isopropyl adrenaline hydrochloride. Acupuncture group was treated w ith acupuncture at the end of each day. After the end of acupuncture intervention, 30m in was injected intraperitoneally w ith isoprenaline hydrochloride injection for 4 weeks. The normal group and model group were treated only by binding and w ithout any treatment. Cardiac function were determined by Doppler ultrasound. Content of IL-1β, IL-10, TNF-α w ithin serum cytokine were determ ined by ELISA. Results Compared w ith model group, LVEDD and LVESD has a decreasing tendency in acupuncture group and the difference was statistically signifi cant (P<0.01); Compared w ith model group, LVEF and LVFS has a increasing tendency in acupuncture group and the difference was statistically signifi cant (P<0.01); Compared w ithmodel group, IL-1β and TNF-α were markedly decreased in acupuncture group and the difference was statistically significant (P <0.01); Compared w ith model group, the content of IL-10 has a increasing tendency in acupuncture group and the difference was statistically signifi cant (P <0.01).Conclusion Acupuncture on Neiguan (PC 6) point can increase LVEDD and LVESD of chronic cardiac failure rats and improve ventricular remodeling; Decrease LVEF and LVFS to improve cardiac function; The therapy can increase content IL-10 and decrease expression of infl ammatory factor; Decrease content of IL-1β, TNF-α and slow down course of infl ammatory reaction.

chronic cardiac failure; cardiac function; infl ammatory factor; acupuncture; point, Neiguan (PC 6)

R245.3

A

2095-6258（2017）03-0362-03

??輯：張海洋

2016-10-21）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.03.006

黑龍江中醫(yī)藥大學科研基金項目（面上項目：2014XX）；國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設(shè)項目（孫遠征名老中醫(yī)工作室；國中醫(yī)藥人教發(fā)[2014] 20號）。

郭 穎（1985 -），女，博士研究生，主要從事針灸治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床和基礎(chǔ)研究。

*通信作者：孫遠征，男，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導師，電話-（0451）87093371，電子信箱- sunyuanzheng @163.com