食品中胭脂蟲紅的高效液相色譜測(cè)定法

李曉瑩

摘要：目的 建立高效液相色譜法測(cè)定食品中胭脂蟲紅的方法。方法 采用提取的溶液為：鹽酸和甲醇，檢測(cè)儀器為：高效液相色譜和二極管陣列，提取和檢測(cè)時(shí)保留時(shí)間定性，定量采用外標(biāo)法。結(jié)果 在100 mg/L時(shí)線性關(guān)系良好，當(dāng)線性相關(guān)系數(shù)>0.999，方法檢出限為0.0004g/kg，方法定量限為0.001g/kg，加標(biāo)回收率是92.3%～105.6%，0.7%～6.5%是相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)值。結(jié)論 采用本文方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)單實(shí)用，該方法適合各類食品中胭脂蟲紅的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：食品；胭脂蟲紅；高效液；相色；譜測(cè)定法

胭脂蟲紅，英文名是：carmine cochineal，中南美洲、墨西哥等地的蒽醌類天然紅色素是胭脂蟲紅的原產(chǎn)地，胭脂紅酸，英文名：camlinicacid，胭脂紅酸屬于活性成分，胭脂紅酸應(yīng)用于食品、化妝產(chǎn)品品、藥類產(chǎn)品、紡織產(chǎn)品，應(yīng)用廣泛，胭脂蟲紅是安全和天然的色素。之一而用于眼部化妝品中。提取胭脂蟲紅色素的原料是寄生在仙人掌類植物上的雌性胭脂蟲。在各類食品中的使用量方面，我國(guó)已做出了具體規(guī)定，但是還沒有建立胭脂蟲紅國(guó)家檢驗(yàn)，還沒有建立胭脂蟲紅行業(yè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于胭脂蟲紅的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢驗(yàn)方法也沒有做出具體規(guī)定。所以，對(duì)于對(duì)食品中胭脂蟲紅的含量檢測(cè)中，應(yīng)當(dāng)建立穩(wěn)定可靠的方法，為其在食品中的含量檢測(cè)提供科學(xué)的指導(dǎo)。根據(jù)我國(guó)的具體狀況，我們所采用的檢測(cè)方法的特點(diǎn)是實(shí)用簡(jiǎn)單，這種方法就是胭脂蟲紅的高效液相色譜測(cè)定法。

1資料與方法

1.1儀管與試劑 島津高效液相色譜儀，規(guī)格為L(zhǎng)C-20AD，二極管陣列檢測(cè)器、恒溫水浴鍋、均質(zhì)機(jī)、粉碎機(jī)、電子天平、離心機(jī)、0.22 μm尼龍膜作為輔助儀器；胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度≥98%，用胭脂紅酸來計(jì)算，德國(guó)Dr.EhrenstorferGmb H為其采購(gòu)地；甲醇，就是色譜純，乙腈，指色譜純；鹽酸溶液2 mol/L：準(zhǔn)確量取鹽酸，容量為20鹽酸，注入水中，水量為100 ml，將其混勻；甲酸溶液：準(zhǔn)確吸取甲酸，容量為9 ml甲酸，將其倒置容量瓶中，體積為1000 ml，用水定容，之后將其混勻[1]。

1.2方法

1.2.1色譜條件 ①迪馬 Diamonsil C18；②反相色譜柱，值為：250 mm×4.6 mm，5 μm；流動(dòng)相：乙腈∶甲酸溶液；脫洗流速為0.8 ml/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量為10 μl；495 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.2樣品前處理

1.2.2.1配制酒和飲料 準(zhǔn)確稱取約2 g試樣于具塞比色管中，其容量為50 ml，加入鹽酸溶液，容量為10 ml，以甲醇定容，混勻至數(shù)值為25 ml，封緊蓋子應(yīng)用封口膜，80 ℃水浴30 min。水浴后，把試樣溫度冷切與室溫相同，并靜置，時(shí)間為30 min，吸取上清液，過0.22 μm尼龍膜上機(jī)測(cè)定。

1.2.2.2冰激凌 把試樣放置在室內(nèi)，等其融化成液體，將試樣攪勻，按方法制備，方法為1.2.2.1。將其水浴，后將其冷卻和室溫相同，其次以12000 r/min，5 min為離心值，放入冰箱，溫度為 4 ℃；取出靜置，待和室溫相同后，吸取上清液過0.22 μm尼龍膜上機(jī)測(cè)定。

1.2.2.3糖果 將糖果試樣粉碎，粉碎儀器為粉碎機(jī)，按方法制備，方法為1.2.2.1。水浴后，待冷切和室溫相同后，以12000 r/min，5 min為離心值，吸取上清液過 0.22 μm尼龍膜上機(jī)測(cè)定。

1.2.2.4熟肉和膨化食品 將糖果試樣粉碎，按方法制備，方法為1.2.2.1。將其水浴，后將其冷卻和室溫相同，其次以12 000 r/min，5 min為離心值，放入冰箱，溫度為 4 ℃；取出靜置，待和室溫相同后，吸取上清液過0.22 μm尼龍膜上機(jī)測(cè)定[2]。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，重量為10.0 mg，溶解采用甲醇溶，容切值至50 ml時(shí)，此溶液濃度為200 mg/L，在溫度為4℃中它可儲(chǔ)存2個(gè)月的時(shí)間。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 依次準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液，吸至具塞比色管中，具塞比色管體積為于50 ml，加入鹽酸溶液同該試樣處理，處理方法是1.2.2.1，鹽酸溶液容量為10 ml，之后上機(jī)測(cè)定?？v坐標(biāo)是胭脂蟲紅峰面積，橫坐標(biāo)是胭脂蟲紅濃度，單位為mg/L。

1.2.5結(jié)果 試樣中胭脂蟲紅含量的計(jì)算公式為：試樣中胭脂蟲紅含量為X-，（g/kg）為胭脂紅酸計(jì)，為試樣溶液中胭脂蟲紅濃度，一定容體積為V，單位為ml，取樣量為m，單位為g。

1.2.6回收率和精密度試驗(yàn) 選取GB 2760-2014 中所列胭脂蟲紅限量值，添加4個(gè)濃度：低、中、高和與檢出限靠近，在6 種試樣中進(jìn)行加標(biāo)回收，應(yīng)用精密度試驗(yàn)于6組試樣中。對(duì)樣品進(jìn)行分組，每種樣分為4個(gè)組次，7份樣品在每組中稱取。第一組量為0.001/kg，第二組是0.25/kg，第三組是0.50/kg，第四組是1.0 g/kg，加入胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)溶液到這4組樣品中，0.001 g/kg數(shù)值為靠近檢出限濃度，處理和測(cè)定方法與此前一樣。

1.2.7方法檢出限 使用標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)峰高，計(jì)算方法檢出限根據(jù)3倍噪聲計(jì)算方法業(yè)計(jì)算，定量限根據(jù) 10 倍噪聲計(jì)算方法計(jì)算，核對(duì)用空白樣品加標(biāo)[3]。

2結(jié)果

2.1線性范圍和回歸方程、檢出限和定量限 范圍是4.0～100 mg/L時(shí)胭脂蟲紅線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系全部>0.999，方法檢出限是0.0004g/kg，方法定量限的數(shù)值為0.001 g/kg。

2.2回收率和精密度 樣品回收率范圍數(shù)值是 92.3%～105.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍數(shù)值為0.7%～6.5%。

3討論

3.1代表性樣品的選擇 允許使用胭脂蟲紅的具有代表性的試樣，在進(jìn)行測(cè)驗(yàn)過程中按照限量值來測(cè)驗(yàn)。

3.2方法適用范圍 本文測(cè)定方法適合飲料、糖果、膨化食品等各類食品。

3.3前處理方法的確定 胭脂蟲紅在不同pH值下，胭脂蟲紅所呈現(xiàn)的顏色也不相同同，指在高效液相色譜儀檢測(cè)器上的最大吸收峰不同，因此采用向樣品提取液中，向其加入一定量的鹽酸，把酸堿性質(zhì)相異的試樣整體調(diào)至呈酸性，使試樣提取液穩(wěn)定為最大吸收峰，峰值為495 nm，最終建立的測(cè)定方法具有穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

3.4干擾 研究結(jié)果證明苯甲酸和對(duì)羥基苯甲酸乙酯以及對(duì)羥基苯甲酸丙酯在類似條件下不存在干擾，此外在類似條件不存在干擾還有對(duì)羥基苯甲酸丁酯、糖精鈉、安賽蜜等 18 中常見食品添加劑；證明姜黃素、辣椒紅素等天然色素與胭脂蟲紅混用不存在干擾。

參考文獻(xiàn)：

[1]顧正健，黃雅佩，沈陽(yáng)，等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定冷飲中禁限用色素胭脂蟲紅酸、喹啉黃和堿性藍(lán)26[J].化學(xué)試劑，2014，04：325-328，342.

[2]付忠源.高效液相色譜法測(cè)定豬肉脯中胭脂蟲紅的含量[J]. 理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)），2014，03：368-370.

[3]趙艦，甘源，肖義夫，等.反相高效液相色譜法測(cè)定食品中的蘇丹紅1號(hào)[A].重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì).重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C].重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)，2006：5.

[4]虞成華， 陸志蕓， 朱偉，等.反相高效液相色譜法測(cè)定食品中胭脂蟲紅色素[J].理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2012，48（8）：991-992.

[5]郭蒙京，李堃，趙丹瑩.食品中胭脂蟲紅的高效液相色譜測(cè)定法[J].職業(yè)與健康，2016，32（18）：2508-2510.

編輯/高章利