兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患者細(xì)胞因子IL—2和IL—10水平變化的臨床研究

唐會(huì)濤+郝國平

摘要：目的 探討兒童急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）患者初步診斷時(shí)和化療完全緩解（CR）后血清中IL-2、IL-10水平的變化。方法 收集確診為ALL且經(jīng)過化療獲得完全緩解的患兒30例及健康兒童20例，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）測量初診組、完全緩解組（CR）、健康對(duì)照組血清中IL-2、IL-10的水平，比較化療前后這兩種細(xì)胞因子含量的變化，并分別與健康對(duì)照組做對(duì)比。結(jié)果 初診組患兒IL-2水平（ 3.59±1.18）pg/ml與正常對(duì)照組兒童IL-2水平（6.22±2.03）pg/ml相比較明顯下降（ P<0.001），初診組IL-10的水平（15.88±4.73）pg/ml與正常兒童IL-10的水平（ 5.69±3.44 ）pg/ml相比較則顯著升高（P<0.001）。隨著化療的進(jìn)行IL-2水平（ 4.78±1.57 ）pg/ml明顯上升，（P=0.005），IL-10水平（ 8.14±2.82 ）pg/ml顯著下降（ P<0.001），都未達(dá)到正常兒童水平（P= 0.034和P=0.036）。但是差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 細(xì)胞因子IL-2和IL-10可能在兒童ALL的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了免疫調(diào)節(jié)功能，其含量的變化在一定程度上能夠反應(yīng)兒童ALL患兒體內(nèi)的免疫功能狀態(tài)的好壞。

關(guān)鍵詞：兒童；急性淋巴細(xì)胞白血??；IL-2IL-10；流式細(xì)胞術(shù)

Abstract：Objective To investigate the children with acute lymphoblastic leukemia（ALL）patients at initial diagnosis and chemotherapy complete remission（CR）after IL-2 in serum，the change of IL-10 level.Methods Diagnosed with ALL after chemotherapy and 20 cases of complete remission in 30 cases of children and healthy children by flow cytometry（FCM）measurement diagnosis group，complete remission group（CR），healthy control group serum IL-2，IL-10 level changes of these two cytokines were compared before and after chemotherapy，and compared with the healthy control group respectively.Results The level of IL-2（3.59±1.18） pg/ml in the newly diagnosed group was significantly lower than that in the normal control group （6.22±2.03） pg/ml（P<0.001）.The level of IL-10 in the first visit group（15.88±4.73）pg/ml was significantly higher than that of the normal children （5.69±3.44），IL-10（P<0.001），compared with the normal children.With chemotherapy were IL-2 level （4.78±1.57）pg/ml significantly increased（P=0.005），IL-10（8.14±2.82）pg/ml decreased significantly（P<0.001），has not reached the level of normal children（P= 0.034 and P=0.036）.But the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion The cytokines IL-2 and IL-10 may play an immunoregulatory function in the development and progression of ALL in children.The changes of their contents can reflect the immune function in children with ALL.

Key words：Children；Acute lymphoblastic leukemia；IL-2IL-10；Flow cytometry

近年來，有許多關(guān)于白血病患者體內(nèi)細(xì)胞因子變化的研究，但大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的對(duì)象以成人為主，也有部分實(shí)驗(yàn)的對(duì)象包括成人和兒童，并且兒童的平均年齡偏大，很少完全以兒童為主要對(duì)象的實(shí)驗(yàn)研究。兒童急性白血病尤其是低年齡段的患者數(shù)量呈逐年增加趨勢，且兒童免疫功能尚未完善，因此，了解兒童免疫功能狀態(tài)十分必要。兒童急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）是兒童惡性腫瘤中最常見的疾病，以骨髓中白血病細(xì)胞克隆性增生為主，抑制了正常造血細(xì)胞的產(chǎn)生，并侵犯其他組織和器官，從而使患兒表現(xiàn)出貧血、出血、感染、骨痛、關(guān)節(jié)浸潤等一系列臨床癥狀，且起病急，病情進(jìn)展快，病程短，易復(fù)發(fā)，給家庭帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前白血病的發(fā)病機(jī)理尚不十分明確，可能與染色體異常、化工燃料、病毒感染、輻射、遺傳易感性等因素相關(guān)。有研究[1]證實(shí)細(xì)胞因子的分泌和調(diào)節(jié)異常能使腫瘤細(xì)胞逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視，細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)失衡可能為急性白血病的發(fā)病提供機(jī)會(huì)[2]。現(xiàn)采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)我院30名ALL患兒化療前及完全緩解后血清中細(xì)胞因子IL-2和IL-10的含量進(jìn)行測定，探討這兩種細(xì)胞因子水平的變化與兒童ALL患者體內(nèi)免疫功能狀態(tài)的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料 收集山西省兒童醫(yī)院血液科2015年7月～2016到2月依據(jù)臨床癥狀、體征及相關(guān)輔助檢查確診為急性淋巴細(xì)胞白血病，且經(jīng)過化療6個(gè)月后得到完全緩解的患兒30例作為實(shí)驗(yàn)組，男19例，女11例，年齡1～15歲，平均年齡5.72歲，其中28例T型ALL，2例B型ALL。同期門診兒童保健科體檢健康的兒童20例作為對(duì)照組，男12例，女8例，年齡2～13歲，平均年齡6.73歲。

1.2標(biāo)本采集 分別抽取初診組、完全緩解組（CR）、健康對(duì)照組兒童清晨空腹靜脈血2 ml，離心后取上清液，放置于-80℃冰箱待檢。

1.3檢測方法 采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM） 進(jìn)行測定，流式細(xì)胞儀由美國BD公司生產(chǎn)，試劑購買于北京礦博生物技術(shù)股份有限公司，嚴(yán)格按照試劑公司提供的細(xì)胞因子檢測使用手冊進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過SPSS17.0軟件，采用單因素方差分析中Dunnett T3檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P<0.05為差異有顯著性。

2結(jié)果

兒童急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）患者化療前和完全緩解后體內(nèi)IL-2和IL-10水平的變化值如下，見表1。

初診組IL-2水平（3.59±1.18）pg/ml與正常組兒童IL-2水平（6.22±2.03）pg/ml相比較明顯下降（P<0.001），初診組IL-10的水平（ 15.88±4.73）pg/ml與正常兒童IL-10的水平（ 5.69±3.44）pg/ml相比較則顯著升高（P<0.001）。隨著化療的進(jìn)行IL-2水平（4.78±1.57）pg/ml明顯上升（P=0.005），IL-10水平（8.14±2.82）pg/ml顯著下降（P<0.001），都未達(dá)到正常兒童水平（P=0.034和P=0.036）。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3討論

人體內(nèi)的細(xì)胞因子主要是由輔助性T淋巴細(xì)胞1（Th1）型和輔助性T淋巴細(xì)胞2（Th2）型細(xì)胞分泌而來，其中Th1型細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子主要有INF-r、IL-2等，Th2型細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子主要有IL-4、IL-10等。Th1型細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子主要在細(xì)胞免疫中發(fā)揮效能，而機(jī)體抗腫瘤機(jī)制的重要形式是由細(xì)胞免疫介導(dǎo)的；Th2型細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子主要在機(jī)體的免疫系統(tǒng)中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。因此這兩種細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子在人體的免疫應(yīng)答反應(yīng)中保持動(dòng)態(tài)平衡是十分重要的，一旦其中一類細(xì)胞因子在機(jī)體的免疫應(yīng)答中處于明顯優(yōu)勢位置，人體的機(jī)能就會(huì)發(fā)生免疫功能紊亂，造成各種疾病的發(fā)生。如果Th1/Th2之間的平衡被打破，并向Th2漂移，機(jī)體免疫功能受到抑制，抗腫瘤能力下降[3]，而最嚴(yán)重的后果是可能使人患上惡性腫瘤。

IL-2是人體發(fā)揮免疫功能過程中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞免疫最主要的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，IL-2主要由活化的Th1細(xì)胞分泌，其他與免疫相關(guān)的細(xì)胞也能分泌少量的IL-2，如：B淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DC）、CD8+T淋巴細(xì)胞（CTL）、NKT細(xì)胞和肥大細(xì)胞等。IL-2主要的免疫調(diào)節(jié)作用包括：①促使T、B淋巴細(xì)胞增殖、分化及抗體的分泌；②增強(qiáng)淋巴細(xì)胞表面黏附分子（AM）的表達(dá)，誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞[4]；③促進(jìn)CD8+細(xì)胞的產(chǎn)生；④促進(jìn)干擾素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子的分泌，增強(qiáng)抗白血病作用[5]；⑤能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生NK細(xì)胞并促進(jìn)其增殖，增強(qiáng)活化NK細(xì)胞的自然殺傷能力[6]；⑥激活巨噬細(xì)胞及增強(qiáng)其吞噬及抗原提呈功能，在機(jī)體的抗腫瘤過程中發(fā)揮一定的免疫功效[7]；⑦活化淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK），誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的死亡；⑧能促使抗原已致敏的CD4+Th細(xì)胞（Th0）向Th1型細(xì)胞方向分化。IL-2水平在白血病患者血清中均有不同程度的降低[8-9]，有兩種主要的原因可能與之相關(guān)，一方面可能由于白血病細(xì)胞分泌大量sIL-2R，與效用性淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的IL-2R競爭性的結(jié)合IL-2，從而使血清中IL-2的含量明顯減少[10]；另一方面考慮是IL-2主要來源細(xì)胞Th1型細(xì)胞數(shù)量的減少和其分泌IL-2能力的下降造成的。這次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ALL患兒化療前血清中IL-2的含量較正常對(duì)照組明顯下降，從而使得Th1型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)能力顯著減弱，這可能是造成白血病細(xì)胞惡性克隆性增生的主要原因之一。

IL-10是機(jī)體免疫過程中的起主要負(fù)向調(diào)控作用的細(xì)胞因子，具有十分顯著的抑制免疫的功能[11]。主要Th2分泌而來，腫瘤細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）及單核巨噬細(xì)胞也是IL-10的重要來源之一，樹突狀細(xì)胞（DC）、中性粒細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞、上皮細(xì)胞也能分泌少量。IL-10的免疫抑制能力主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①抑制Th0型細(xì)胞向Thl型細(xì)胞方向增殖、分化，促進(jìn)Th0型細(xì)胞向Th2型細(xì)胞方向增殖、分化，并且能使Th1型細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力減弱，從而使機(jī)體的免疫功能處于抑制狀態(tài)，易于腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，最終導(dǎo)致腫瘤性疾病的形成。②阻礙樹突狀細(xì)胞（DC）、吞噬細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞（APC）在免疫過程中發(fā)揮遞呈抗原的功效，使細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞（CTL）處于免疫無應(yīng)答狀態(tài)，容易造成免疫功能缺陷，為腫瘤的產(chǎn)生創(chuàng)造便利的環(huán)境。③抑制炎癥反應(yīng)，缺乏可導(dǎo)致自身免疫性疾病。④抑制NK細(xì)胞的活化，減低IL-2活化NK細(xì)胞分泌IFN-γ和TNF-α的能力，使機(jī)體的抗腫瘤活性下降。當(dāng)人體發(fā)生惡性病變時(shí)，體內(nèi)的Treg細(xì)胞明顯增多，而腫瘤細(xì)胞和Treg細(xì)胞可大量分泌IL-10，腫瘤患者體內(nèi) Th2型細(xì)胞占據(jù)優(yōu)勢狀態(tài)[12]，而Th2是IL-10的主要分泌源，從而使得腫瘤患者血清中的IL-10水平升高顯著。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：患兒血清中的IL-10含量明顯增多，嚴(yán)重抑制了機(jī)體的免疫功能，使得免疫監(jiān)視能力嚴(yán)重下降，從而有利于白血病細(xì)胞的免疫逃逸，促進(jìn)了白血病的發(fā)生，與Douillard等[13]的研究結(jié)果一致。

患兒治療前血清中IL-2的含量與對(duì)照組正常兒童相比較明顯降低，IL-10含量顯著升高，和一些學(xué)者[14-16]的結(jié)論相同，說明Th1型和Th2型細(xì)胞因子異常表達(dá)。Th2 型細(xì)胞因子在急性白血病患兒體內(nèi)占據(jù)優(yōu)勢地位[11]，可使患兒CTL細(xì)胞、NK細(xì)胞和DC細(xì)胞數(shù)量的急劇減少和功能的明顯減低，分泌抗體能力下降，造成細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答顯著降低，使機(jī)體的免疫功能受抑，從而導(dǎo)致了急性白血病患兒體內(nèi)免疫功能發(fā)生嚴(yán)重紊亂。隨著化療的進(jìn)行，完全緩解后患兒血清中IL-2的含量明顯升高，IL-10的含量則急劇下降，與文獻(xiàn)[14，16]結(jié)果一致，這可能是由于緩解后患兒體內(nèi)免疫功能有所提高，參與免疫應(yīng)答的效應(yīng)淋巴細(xì)胞數(shù)目上升，分泌IL-2增多，經(jīng)化療作用患兒體內(nèi)腫瘤負(fù)荷明顯降低，使得IL-10的分泌量顯著減少。然而IL-2和IL-10的含量都未達(dá)到對(duì)照組正常兒童水平，考慮與長期化療形成的免疫抑制作用有密切關(guān)系；且患兒年齡小，免疫功能尚未成熟，完全緩解后患兒機(jī)體的免疫功能正處于逐漸恢復(fù)中，所以機(jī)體的免疫功能重建需要一定時(shí)間。所以。有科研人員[17-19]研究證明急性白血病患者血清中IL-10含量的顯著升高是疾病預(yù)后不佳的主要因素之一，如果化療后患兒體內(nèi)IL-10的含量仍然很高，可能預(yù)示著疾病的惡化[20]。

由此可見，細(xì)胞因子IL-2和IL-10在兒童ALL的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮了免疫調(diào)節(jié)功能，其含量的變化在一定程度上能夠反應(yīng)ALL患兒體內(nèi)的免疫功能狀態(tài)的好壞，通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測急性白血病患兒血清中IL-2、IL-10含量的變化了解患兒體內(nèi)的免疫功能情況，可作為判斷病情嚴(yán)重程度、評(píng)價(jià)療效和預(yù)測疾病預(yù)后的指標(biāo)之一，也為兒童ALL患者的治療奠定理論基礎(chǔ)。

近年來，IL-2作為一種免疫治療藥物已經(jīng)應(yīng)用于許多腫瘤性疾?。ㄈ纾悍伟?、腎癌、直腸癌、黑色素瘤等）的臨床治療，其中對(duì)腎癌[21]、黑色素瘤最有效，IL-2聯(lián)合化療在急性白血病患者的治療中也取得了不錯(cuò)的療效，但是大多數(shù)治療用于成人患者，較少用于兒童患者，因此，可以開展IL-2聯(lián)合化療用于兒童ALL患者的臨床試驗(yàn)以提高患兒的長期生存時(shí)間和質(zhì)量。

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