DCPV替代寄主篩選及利用技術(shù)研究

吳華青 趙志平 劉衛(wèi)宏 馮美芳 劉付月清

摘要[目的]篩選增殖DCPV的替代寄主。[方法]利用DCPV感染斜紋夜蛾篩選增殖DCPV的替代寄主，并用人工飼料開展規(guī)模飼養(yǎng)。[結(jié)果]斜紋夜蛾對(duì)DCPV敏感且Pl-DCPV產(chǎn)量高，DCPV對(duì)斜紋夜蛾的LC50為3.39×105 PIB/mL，利用斜紋夜蛾增殖的Pl-DCPV平均增殖量為2.01×108 PIB/頭，Pl-DCPV對(duì)松毛蟲的LC50為1.45×106 PIB/mL，略低于DCPV對(duì)松毛蟲的LC50（3.86×105 PIB/mL）。[結(jié)論]綜合分析，斜紋夜蛾可作為增殖DCPV的合適寄主。

關(guān)鍵詞DCPV；斜紋夜蛾；替代寄主；篩選

中圖分類號(hào)S767.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）21-0143-03

Study on Screening on Alternate Hosts of DCPV and Utilization Technology

WU Huaqing1，ZHAO Zhiping2，LIU Weihong1，LIU Fuyueqing1* et al

（1.Maoming Institute of Forestry Science，Maoming，Guangdong 525000； 2.Forestry Protection Station of Jianghua Forestry Bureau，Jianghua，Hunan 425500）

Abstract[Objective] The aim was to screen alternate hosts for DCPV proliferation. [Method] We infected Prodenia litur by DCPV to screen alternate hosts for DCPV proliferation，and carried out scale breeding by using artificial feed.[Result] Prodenia litur was sensitive to DCPV，and had high yield of PlDCPV.The LC50 of DCPV to Prodenia litur was 3.39×105 PIB/mL，and the average proliferation yield of PlDCPV by using Prodenia litur was 2.01×108 PIB per insect.The LC50 of PlDCPV to Dendrolimus was 1.45×106 PIB/mL，which was slightly lower than that of DCPV to Dendrolimus （3.86×105 PIB/mL）.[Conclusion] Comprehensive analysis，Prodenia litur could be used as suitable alternate hosts for DCPV proliferation.

Key wordsDCPV；Prodenia litur；Alternate hosts；Screening

利用馬尾松毛蟲生產(chǎn)、增殖松毛蟲質(zhì)型多角體病毒（Dendrolimus cytoplasmic polyhedrosis virus，以下簡(jiǎn)稱DCPV）易受季節(jié)及蟲源的限制，林間復(fù)制出來的DCPV，雜質(zhì)偏多，影響質(zhì)量和產(chǎn)量[1]，而采用人工飼料在室內(nèi)飼養(yǎng)馬尾松毛蟲鮮見成功報(bào)道?？梢哉J(rèn)為，利用替代寄主昆蟲來生產(chǎn)DCPV是目前獲得大量DCPV的主要途徑。1990年陳昌潔等[2]、1993年周小毛等[3]、1996年曾陳湘等[4]做了很多這方面的研究，但都未能應(yīng)用于生產(chǎn)。筆者利用DCPV可以感染原宿主以外昆蟲的特點(diǎn)，篩選了對(duì)DCPV敏感、蟲體適中、易飼養(yǎng)、周期短、病毒增殖量高的斜紋夜蛾作為目前合適的替代寄主，并用人工飼料開展了規(guī)模飼養(yǎng)，旨在為實(shí)現(xiàn)DCPV的工廠化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1病毒材料。

病毒材料DCPV 50%甘油懸浮劑，含量為3×109 PIB/mL（PIB是多角體Po-lyhedral inclusion body的簡(jiǎn)寫），由茂名市林業(yè)科學(xué)研究所林間采集后，經(jīng)室內(nèi)分離提純獲得，在-40 ℃低溫冰箱中保存。

1.1.2供試蟲源。樟蠶（Eriogyna pyretorus）、綠翅絹野螟（Diaphania angustalis）、鳳凰木夜蛾（Pericyma crulgeni）采自茂名市林業(yè)科學(xué)研究所科研基地；斜紋夜蛾（Prodenia litur）、菜粉蝶（Pieris rapae）、粘蟲（Mythimna separata Walker）采自菜地；銀紋夜蛾（Argyrogramma agnata）、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua Hiibner）外購(gòu)。

1.2方法

1.2.1DCPV替代寄主篩選。

挑選試驗(yàn)的鱗翅目幼蟲均用所取食寄主作飼料喂養(yǎng)，在室內(nèi)喂養(yǎng)至4齡。將DCPV稀釋為1×106 PIB/mL浸潤(rùn)天然飼料表面，晾干后喂飼幼蟲，喂飼病毒后，前3 d清除死傷的幼蟲，第4天開始至第19天，每天檢查1次，并逐條解剖死蟲的中腸，第20天全部解剖死、活蟲的中腸，統(tǒng)計(jì)感染病毒死亡率。

1.2.2DCPV對(duì)斜紋夜蛾的感染試驗(yàn)。

挑選4齡斜紋夜蛾200頭，將DCPV按梯度稀釋成不同濃度，使DCPV含量分別為1×104、1×105、1×106、1×107 PIB/mL，浸潤(rùn)塊狀人工飼料后，飼養(yǎng)至第4天開始檢查，至第20天結(jié)束，逐條解剖死蟲中腸，并最后解剖殘存活蟲中腸進(jìn)行檢查，確定是否有感染病毒。

1.2.3斜紋夜蛾人工飼養(yǎng)及Pl-DCPV產(chǎn)量測(cè)定。

斜紋夜蛾人工飼料配方由中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院工程中心提供，室內(nèi)繼代擴(kuò)繁技術(shù)參照涂葉茍等[5]的方法，感染DCPV后，提純、測(cè)定Pl-DCPV（從感染DCPV的斜紋夜蛾中腸分離提取出來）的平均產(chǎn)量。

1.2.4Pl-DCPV感染試驗(yàn)。

1.2.4.1Pl-DCPV對(duì)斜紋夜蛾的回接感染試驗(yàn)。

用2×106 PIB/mL Pl-DCPV對(duì)4齡斜紋夜蛾進(jìn)行感染，每天保持清理蟲糞，第4天開始檢查、解剖死蟲中腸，至第20天全部解剖殘存活蟲中腸進(jìn)行檢查，確定是否感染病毒并計(jì)算感染率，安排3批次試驗(yàn)。

1.2.4.2Pl-DCPV對(duì)松毛蟲的感染試驗(yàn)。

在林間挑選個(gè)體均勻的4齡期健康松毛蟲200頭，放到健康、濃密的松枝上，用80目尼龍網(wǎng)袋套緊，每籠20頭，共10籠，待用。將稀釋好的1×104、1×105、1×106、1×107 PIB/mL溶液Pl-DCPV，分別噴灑2籠（2個(gè)重復(fù)），要求均勻噴灑到籠內(nèi)松針，保證松針濕透滴水，另外設(shè)置2籠噴灑清水作對(duì)照。每天保持清理蟲糞，第4天開始檢查、解剖死蟲中腸，至第20天全部解剖殘存活蟲中腸進(jìn)行檢查，確定是否感染病毒并計(jì)算感染死亡率。

2結(jié)果與分析

2.1DCPV感染8種鱗翅目幼蟲的結(jié)果

DCPV對(duì)這8種鱗翅目昆蟲的感染可分為2類：一類是不受感染，如菜粉蝶、綠翅絹野螟、鳳凰木夜蛾、粘蟲和樟蠶；另一類是受感染，如銀紋夜蛾、甜菜夜蛾和斜紋夜蛾。

由表1可知，斜紋夜蛾對(duì)DCPV最敏感，感染達(dá)到77.6%，感染病毒致死的死亡率高達(dá)70.1%。斜紋夜蛾感染后蟲體變色，解剖病蟲觀察，中腸發(fā)病明顯，呈皺褶狀，黃白色。

2.2DCPV對(duì)斜紋夜蛾的感染情況

2.2.1DCPV不同濃度對(duì)斜紋夜蛾的感染死亡率。用不同濃度的DCPV感染4齡斜紋夜蛾，顯示不同程度的致病感染，感染死亡率隨濃度的增大而提高（表2）。由表2可知，DCPV對(duì)斜紋夜蛾的感染死亡率最低為44.0%，最高為82.0%，說明DCPV對(duì)斜紋夜蛾感染致死毒力較強(qiáng)。

2.2.2濃度與感染死亡率的直線回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

依據(jù)表2的數(shù)據(jù)，將濃度轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)og值，表述為x；將感染死亡率轉(zhuǎn)化為機(jī)率值，表述為y，直線回歸方程為y=3.346 8+0.364 9x，濃度對(duì)數(shù)與感染死亡率機(jī)率值相關(guān)系數(shù)rxy=0999，大于r0.05=0.950，表明相關(guān)程度達(dá)到顯著水平，根據(jù)直線回歸方程求得LC50=3.39×105 PIB/mL。

2.3斜紋夜蛾人工飼養(yǎng)及Pl-DCPV產(chǎn)量測(cè)定結(jié)果

利用人工飼料對(duì)斜紋夜蛾連續(xù)飼養(yǎng)了2年，每年飼養(yǎng)9～10代，每代平均歷期32～38 d。Pl-DCPV的產(chǎn)量最低為1.57×108 PIB/頭，最高為3.16×108 PIB/頭，平均為2.01×108 PIB/頭（表3）。按DCPV防治馬尾松毛蟲用量7.5×1010 PIB/hm2

計(jì)算，約375頭斜紋夜蛾幼蟲增殖產(chǎn)生的多角體就可防治1 hm2林地的松毛蟲。

2.4Pl-DCPV的感染試驗(yàn)結(jié)果

2.4.1Pl-DCPV對(duì)斜紋夜蛾的回接感染試驗(yàn)結(jié)果。

Pl-DCPV對(duì)4齡斜紋夜蛾的回接感染率最低為14.5%，最高為30.6%，平均為25.1%，其中因感染PlDCPV而致死的分別有3、8和8頭，感染死亡率分別為6.3%、16.3%和8.5%，平均9.9%（表4）。

2.4.2Pl-DCPV對(duì)馬尾松毛蟲的感染測(cè)定結(jié)果。

感染試驗(yàn)結(jié)果表明，Pl-DCPV對(duì)馬尾松毛蟲的毒力能夠維持在較高水平（表5）。依據(jù)表5的數(shù)據(jù)，將濃度轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)og值，表述為x；將感染死亡率轉(zhuǎn)化為機(jī)率值，表述為y，直線回歸方程為y=3.450 9+0.300 1x，濃度對(duì)數(shù)與感染死亡率機(jī)率值相關(guān)系數(shù)rxy=0.992，大于r0.05=0.950，表明相關(guān)程度達(dá)到顯著水平。根據(jù)直線回歸方程求得LC50=1.45×106 PIB/mL，略低于劉清浪等[6]研究得出的DCPV對(duì)松毛蟲的毒力（LC50=3.86×105 PIB/mL）。

3結(jié)論與討論

從DCPV對(duì)斜紋夜蛾的感染死亡率、濃度與感染死亡率的相關(guān)性、回歸方程及致死中濃度來看，斜紋夜蛾對(duì)DCPV比較敏感；且斜紋夜蛾蟲體適中，病毒增殖量大，可作為生產(chǎn)、增殖松毛蟲質(zhì)型多角體病毒的寄主。

P1-DCPV平均產(chǎn)量為2.01×108 PIB/頭，與林間宿主馬尾松毛蟲增殖的多角體病毒回收量接近。Pl-DCPV對(duì)4齡松毛蟲的LC50為1.45×106 PIB/mL，毒力稍低于DCPV對(duì)松毛蟲的毒力，但感染死亡率高。同時(shí)發(fā)現(xiàn)P1-DCPV對(duì)斜紋夜蛾的回接感染效果差，說明DCPV經(jīng)過斜紋夜蛾體內(nèi)增殖后，對(duì)斜紋夜蛾的致病性已發(fā)生改變，具體致病機(jī)理需繼續(xù)研究。

參考文獻(xiàn)

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[2] 陳昌潔，王志賢，陶糧，等.利用棉鈴蟲為宿主增殖松毛蟲質(zhì)型多角體病毒[J].林業(yè)科學(xué)研究，1990，3（3）：263-265.

[3] 周小毛，戴冠群.馬尾松毛蟲質(zhì)型多角體病毒替代宿主的研究[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，14（1）：114-121.

[4] 曾陳湘，吳若光，何雪香.用棉鈴蟲生產(chǎn)的馬尾松毛蟲質(zhì)型多角體病毒對(duì)馬尾松毛蟲的毒力[J].廣東林業(yè)科技，1996，12（1）：27-29.

[5] 涂業(yè)茍，曾吉華.斜紋夜蛾的人工飼養(yǎng)技術(shù)[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22（1）：87-88.

[6] 劉清浪，吳若光，曾陳湘.應(yīng)用馬尾松毛蟲質(zhì)型多角體病毒防治松毛蟲的研究[J].病毒學(xué)雜志，1986，1（4）：65-72.

45卷21期吳華青等DCPV替代寄主篩選及利用技術(shù)研究