應(yīng)用HPLC測(cè)定雙黃連口服液中主要成分含量

靳慧娟

摘要：目的：建立雙波長(zhǎng)高效液相色譜法梯度洗脫方法測(cè)定雙黃連口服液中主要成分含量。方法：采用HederaODS-2色譜柱，以0.2%磷酸水溶液-甲醇流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)324nm、280nm，柱溫為30℃。結(jié)果：該方法在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好、溶液穩(wěn)定性、專屬性良好，且與《中國(guó)藥典》方法檢驗(yàn)結(jié)果一致。結(jié)論：本方法用于雙黃連口服液主要成分含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；黃芩苷；綠原酸；連翹苷；含量

雙黃連口服液組方金銀花、黃芩和連翹。具有疏風(fēng)解表、清熱解毒之功效，臨床上常用于治療細(xì)菌和病毒引起的感冒、流行性感冒以及氣管炎、扁桃體炎、肺炎等癥?！吨袊?guó)藥典》2010年版一部采用高效液相色譜法對(duì)雙黃連口服液中主要成分黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量分別進(jìn)行測(cè)定。供試品溶液需分別制備，檢驗(yàn)時(shí)限較長(zhǎng)，檢驗(yàn)方法較為繁瑣。本研究通過建立雙波長(zhǎng)高效液相色譜法梯度洗脫方法用于雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量的同時(shí)測(cè)定，操作更加簡(jiǎn)便快速，具體方法學(xué)考察如下：

1.儀器與試藥

1.1儀器

CPA225D電子天平（賽多利斯公司）

Agilent1260高效液相色譜儀，HP1100型二極管陣列檢測(cè)器（安捷倫科技有限公司）

1.2試藥

黃芩苷、綠原酸、連翹苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）

甲醇為色譜純?cè)噭ǖ像R科技公司）

磷酸為色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）

試驗(yàn)用水為二次蒸餾的純化水

2.方法

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用Hedera ODS-2色譜柱（4.6mmx250mm，5μm）。0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，梯度洗脫程序：0-5min，20%→30%B；5-35min，30%→45%B；35-50min，45%→70%B；50-55min，70%→20%B；55-60min，20%B。流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)324nm、280nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μl。各組分分離度、拖尾因子在0.95至1.05之間。

2.2混合對(duì)照品貯備液的制備

分別精密稱取綠原酸對(duì)照品25.12mg置25ml容量瓶?jī)?nèi)、連翹苷對(duì)照品20.22mg置25ml容量瓶?jī)?nèi)，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度；再精密稱取黃芩苷對(duì)照品29.95mg，精密量取上述兩種溶液各5ml置同一100ml量瓶?jī)?nèi)，用50%甲醇制成每毫升含黃芩苷299.5μg，綠原酸50.24μg，連翹苷20.22μg的混合溶液作為混合對(duì)照品貯備液。

2.3供試品溶液的制備

精密量取雙黃連口服液1ml置50ml量瓶中，加50%甲醇適量超聲處理15min，加50%甲醇定容至刻度，搖勻后經(jīng)0.45μm的微孔濾膜濾過即得。

3.方法學(xué)考察

3.1線性關(guān)系考察

分別精密量取混合對(duì)照品貯備溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml，分別置于10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液10μl注入高效液相色譜儀，每個(gè)濃度進(jìn)一針，記錄峰面積。以各對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，見表1。結(jié)果表明：黃芩苷、綠原酸、連翹苷試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取混合對(duì)照品貯備溶液5.0ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別于溶液配制完成后0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)精密量取10μl注入高效液相色譜儀，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣一針，記錄峰面積。計(jì)算6針峰面積之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%），黃芩苷、綠原酸、連翹苷6次測(cè)定峰面積的RSD分別為0.56%、0.22%、0.64%。結(jié)果表明：黃芩苷、綠原酸、連翹苷混合溶液在8小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

3.3專屬性試驗(yàn)

按照產(chǎn)品處方，分別取黃芩提取物、金銀花提取物、連翹提取物及適量蔗糖分別制成缺一味制劑，按供試品溶液制備方法制成缺一味空白溶液，精密量取10μl注入高效液相色譜儀。相應(yīng)缺一味空白溶液色譜在黃芩苷、綠原酸、連翹苷處無吸收峰。結(jié)果表明在試驗(yàn)專屬性較好。

3.4兩種含量測(cè)定方法結(jié)果比較

取市售雙黃連口服液三批，分別采用《中國(guó)藥典》雙黃連口服液項(xiàng)下含量測(cè)定方法和本次研究方法對(duì)黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。結(jié)果表明試驗(yàn)方法用于雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量測(cè)定與《中國(guó)藥典》方法檢驗(yàn)結(jié)果一致。

3.討論

雙黃連口服液為黃芩、金銀花、連翹經(jīng)過提取制成的純中藥制劑口服液，具有辛涼解表，清熱解毒的功效。《中國(guó)藥典》中分別對(duì)黃芩、金銀花、連翹含量進(jìn)行了具體的規(guī)定，其中黃芩含量以黃芩苷計(jì)每1ml不得少于10.0mg，金銀花含量以綠原酸計(jì)每1ml不得少于0.60mg，連翹含量以連翹苷計(jì)每1ml不得少于0.30mg。

隨著藥物分析技術(shù)的不斷進(jìn)步，高效液相色譜法在藥品質(zhì)量控制過程中的應(yīng)用日益廣泛，已成為藥品檢驗(yàn)中最為重要的分析方法。本次研究通過建立雙波長(zhǎng)高效液相色譜法梯度洗脫方法用于雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量的同時(shí)測(cè)定，該方法在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好、溶液穩(wěn)定性、專屬性良好，且與《中國(guó)藥典》方法檢驗(yàn)結(jié)果一致。與《中國(guó)藥典》中逐一進(jìn)行檢測(cè)的方法相比操作更加簡(jiǎn)便快速，可用于雙黃連口服液的質(zhì)量控制。