GeneXpert MTB/RIF檢查對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷的價(jià)值

郗志華

(太原市第四人民醫(yī)院，山西 太原 030053)

GeneXpert MTB/RIF檢查對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷的價(jià)值

郗志華

(太原市第四人民醫(yī)院，山西 太原 030053)

目的：探討GeneXpert MTB/RIF技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎診斷及利福平耐藥檢測(cè)中的價(jià)值。方法：回顧性分析96例結(jié)核性胸膜炎和4例非結(jié)核性胸膜炎患者，比較胸水涂片抗酸染色法、結(jié)核分枝桿菌BACTEC MGITBD960液體快速培養(yǎng)、GeneXpert MTB/RIF技術(shù)的陽(yáng)性率，并對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性菌株做比例法藥敏與GeneXpert MTB/RIF利福平耐藥性對(duì)比。結(jié)果：GeneXpert MTB/RIF技術(shù)陽(yáng)性率68.75%，明顯高于涂片抗酸染色法2.1%及BACTEC MGITBD960液體快速培養(yǎng)24%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)利福平耐藥性的正確度為91.3%。結(jié)論：GeneXpert MTB/RIF技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎診斷中有重要價(jià)值。

GeneXpert MTB/RIF技術(shù)；BD960液體快速培養(yǎng)；結(jié)核性胸膜炎

我國(guó)是世界衛(wèi)生組織( WHO )認(rèn)定的27個(gè)耐多藥及廣泛耐藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一[1]，發(fā)病率僅次于印度。目前估計(jì)有500萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年由結(jié)核病導(dǎo)致的死亡人數(shù)大約有5萬(wàn)。結(jié)核性胸膜炎是結(jié)核病中的一大類， 由結(jié)核分枝桿菌直接進(jìn)入胸膜腔中和(或)其代謝產(chǎn)物刺激所導(dǎo)致的炎癥，約占胸腔積液病因的30%～60%[2]。目前用常規(guī)方法來(lái)診斷結(jié)核性胸膜炎有較大難度，涂片陽(yáng)性率低，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，影像學(xué)檢查較易發(fā)現(xiàn)，但定性困難，誤診誤治情況時(shí)有發(fā)生，胸膜活檢具有危險(xiǎn)性。隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，GeneXperTMTB/RIF檢查技術(shù)具有快速、敏感、準(zhǔn)確的特性，主要應(yīng)用在痰液檢查，胸水鮮有報(bào)道。本研究將GeneXperTMTB/RIF檢查技術(shù)與涂片，BD960液體快速培養(yǎng)對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年12月～2016年9月于太原市第四人民院就診的疑似結(jié)核性胸膜炎患者。通過臨床癥狀、影像表現(xiàn)，治療療效確診73例，胸水結(jié)核菌培養(yǎng)確診23例，男43例，女53例，年齡14～81歲，平均(46.3±3.4)歲；4例癌性胸膜炎患者，男3例，女1例，年齡15～80歲，平均(46.2±3.3)歲。兩組患者的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2 試劑與儀器

二級(jí)生物安全柜(海爾)，抗酸染液、羅氏培養(yǎng)基(珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))，BACTEC MGITBD960液體快速培養(yǎng)(美國(guó)BD公司)， 全球基金項(xiàng)目GeneXpert 檢測(cè)儀及試劑。

1.3 方法

1.3.1 涂片抗酸染色 取5 mL胸水離心，在玻片2/3處把沉淀涂抹均勻，面積為1 cm×2 cm，行抗酸染色，鏡檢。參照《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》[3]

1.3.2 BACTEC MGITBD960液體快速培養(yǎng)及羅氏比例法藥敏 吸取5 mL胸水，加入2倍的 2%枸櫞酸鈉 半胱氨酸一氫氧化鈉(2%NALC-NaOH)前處理液，旋窩震蕩 20 s。室溫靜置 15～20 min，請(qǐng)勿超過 20 min。加無(wú)菌磷酸鹽緩沖液 PBS(pH6.8)至約 40 mL，蓋緊蓋子，3 000×g離心 15 min，倒掉上清液。添加 1～3 mL PBS(pH=6.8)以中和 pH 至 6.8。取處理后標(biāo)本 0.5 mL加入準(zhǔn)備好的 MGIT 培養(yǎng)管培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)陽(yáng)性時(shí)，轉(zhuǎn)種在中性羅氏培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，待生長(zhǎng)好時(shí)刮取足量配置濃度做比例法利福平藥敏，按《結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》[4]操作。

1.3.3 GeneXpert 技術(shù) 用美國(guó)Cephid公司提供的消化液消化1 mL胸水15 min，消化液量視情況而定。吸取2 mL消化后的液體加入試劑盒。把試劑盒放入檢測(cè)儀中，編號(hào)登記。經(jīng)1.5 h，由電腦軟件自動(dòng)讀取結(jié)果，可以同時(shí)檢測(cè)出結(jié)核分支桿菌的量及利福平耐藥性。

1.4 質(zhì)量控制

操作均在安全柜內(nèi)進(jìn)行，參加國(guó)家結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室藥敏熟練度測(cè)試，以 H37RV標(biāo)準(zhǔn)株作為陽(yáng)性參照，加以質(zhì)控檢測(cè)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種檢測(cè)方法陽(yáng)性率比較

GeneXpert MTB/RIF技術(shù)陽(yáng)性率68.75%，明顯高于涂片抗酸染色法2.1%及BACTEC MGITBD960液體快速培養(yǎng)24%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1，2。

表1 GeneXpert與BD960比較 例

表2 GeneXpert與涂片比較 例

2.2 藥敏試驗(yàn)

以羅氏比例法利福平藥敏為標(biāo)準(zhǔn)，共有23例標(biāo)本，羅氏比例法利福平藥敏耐藥4例，敏感19例；GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)利福平耐藥2例，敏感21例。其中有2例與羅氏比例法利福平藥敏不相符，GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)利福平耐藥性的正確度為91.3%。

3 討論

胸膜炎病因復(fù)雜，臨床表現(xiàn)無(wú)特異性，確診困難，早期診斷和治療對(duì)患者的預(yù)后非常重要?？顾崛旧团囵B(yǎng)結(jié)核分枝桿菌是診斷結(jié)核性胸膜炎的金標(biāo)準(zhǔn)，但是培養(yǎng)和涂片陽(yáng)性率偏低，僅為10%左右[5]。其主要原因是：胸水中結(jié)結(jié)核分枝桿菌量少；胸水中沒有結(jié)核分枝桿菌(由代謝物刺激而產(chǎn)生)；胸水量大不好收集。

GeneXpert MTB/RIF 是由美國(guó)Cepheid公司研發(fā)、采用 GeneXpert檢測(cè)系統(tǒng)的一種半套式實(shí)時(shí)熒光定量PCR體外診斷技術(shù),簡(jiǎn)化了傳統(tǒng) PCR檢測(cè)步驟(樣品的制備，核酸的提取、擴(kuò)增，目標(biāo)序列的檢測(cè)等)，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。巢式PCR的應(yīng)用使檢測(cè)敏感度提高了2～3個(gè)數(shù)量級(jí)，也減少了非特異性擴(kuò)增。其步驟在獨(dú)立的一次性試劑盒內(nèi)由系統(tǒng)自動(dòng)完成，檢出時(shí)間只需1.5 h左右。 GeneXpert檢測(cè)試劑盒能檢測(cè)樣本中的結(jié)核分支桿菌和與利福平耐藥相關(guān)的rpoB基因,主要針對(duì)rpoB 基因的81bp中部分區(qū)域設(shè)計(jì)探針。能對(duì)耐多藥患者進(jìn)行初篩，有很高的敏感性和特異性，檢驗(yàn)周期短。本研究回顧分析應(yīng)用GeneXpert MTB/RIF 系統(tǒng)檢測(cè)確診結(jié)核性胸膜炎患者的胸水，其陽(yáng)性率 68.75%，明顯高于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)和涂片檢測(cè)。

綜上所述，GeneXpert技術(shù)操作簡(jiǎn)單，高效，快速，生物安全性高，可以推廣使用。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 衛(wèi)生部介紹全國(guó)肺結(jié)核疫情現(xiàn)狀[EB /OL] . ( 2011 - 03 - 21 ). http: / /www.m oh. gov. cn.

[2] 馬 玙.提高我國(guó)結(jié)核性胸膜炎的診治水平[J].中國(guó)防癆雜志，2009,31(1):1-2.

[3] 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心. 痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊(cè)[M].北京:中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社, 2004.

[4] 趙雁林，王黎霞，成時(shí)明，等.分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化程序及質(zhì)量保證手冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.

[5] 張凌峰，高 梅．多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)良惡性胸腔積液的診斷價(jià)值[J]．海南醫(yī)學(xué)，2013，24(5)：708．

本文編輯：王知平

郗志華，男，檢驗(yàn)師，從事臨床檢驗(yàn)工作

R446.19

B

1671-0126(2017)02-0043-02