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    結(jié)腸腺瘤癌變過程中MTA1、RECK的表達(dá)及意義

    2017-06-05 15:06:07陳現(xiàn)亮吳義娟趙慧敏韓寶娟
    關(guān)鍵詞:絨毛狀癌變腺瘤

    陳現(xiàn)亮,吳義娟,呂 卓,趙慧敏,韓寶娟

    ·短篇論著·

    結(jié)腸腺瘤癌變過程中MTA1、RECK的表達(dá)及意義

    陳現(xiàn)亮,吳義娟,呂 卓,趙慧敏,韓寶娟

    目的 分析MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤及結(jié)腸癌組織中的表達(dá),探討MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的作用。方法 應(yīng)用免疫組化SABC法檢測(cè)104例結(jié)腸癌組織、114例結(jié)腸腺瘤組織、30例正常結(jié)腸組織中MTA1、RECK蛋白表達(dá),并復(fù)習(xí)相關(guān)文獻(xiàn)。結(jié)果 正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌組織中MTA1的陽性率呈逐漸增高趨勢(shì)(P<0.05);結(jié)腸腺瘤(中重度異型增生)組中MTA1的陽性率高于結(jié)腸腺瘤(輕度異型增生)組(P<0.05);MTA1在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而升高(P<0.05)。RECK在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組中的陽性率分別為100%、78.57%、77.27%、53.85%;正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌組中RECK的陽性率呈逐漸降低趨勢(shì);中重度異型增生結(jié)腸腺瘤組中RECK的陽性率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);RECK在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而降低(P<0.05)。結(jié)論 結(jié)腸癌組織中MTA1呈高表達(dá),RECK表達(dá)缺失。MTA1、RECK參與正常組織、癌前病變、癌組織的發(fā)生、發(fā)展,在結(jié)腸腺瘤的癌變過程中起著重要作用。

    結(jié)腸腫瘤;結(jié)腸癌;結(jié)腸腺瘤;MTA1;RECK

    結(jié)腸腺瘤是一種結(jié)腸良性腫瘤,被認(rèn)為是結(jié)腸癌的癌前病變,腺瘤的病理類型與腺瘤惡變密切相關(guān),積極診斷和治療結(jié)腸腺瘤是控制、減少結(jié)腸癌發(fā)病的重要途徑。但目前有關(guān)結(jié)腸腺瘤癌變的機(jī)制研究較少,且其具體機(jī)制尚不明確[1-2]。近年來許多研究結(jié)果顯示MTA1、RECK與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3-5]。因此研究結(jié)腸癌的早期腫瘤標(biāo)志物成為熱點(diǎn),這些研究將有助于對(duì)結(jié)腸癌的早期臨床診斷、預(yù)后評(píng)價(jià)并且為進(jìn)一步探討結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法對(duì)不同病理類型結(jié)腸腺瘤及結(jié)腸癌中MTA1、RECK的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),探討其在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的作用,對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)腸腺瘤的癌變可能性及化學(xué)干預(yù)有重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 臨床資料 收集2010~2015年邢臺(tái)市人民醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)切除的104例結(jié)腸腺癌標(biāo)本,由兩位高年資病理科醫(yī)師嚴(yán)格按WHO(2000)消化系統(tǒng)腫瘤標(biāo)準(zhǔn)明確診斷,并根據(jù)其制定的病理標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)。全部病例術(shù)前均未行化療或放療。患者年齡31~83歲,男性79例,女性25例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者60例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者44例,按Dukes分期中國改良法分期標(biāo)準(zhǔn):A+B期44例,C+D期60例;并按WHO(2000)結(jié)直腸癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn):高+中分化80例,低分化24例。腸鏡活檢及切除結(jié)腸腺瘤標(biāo)本114例,年齡28~74歲,其中男性82例,女性32例,結(jié)直腸腺瘤組依據(jù)其伴上皮內(nèi)病變的程度分為輕度異型增生組82例、中重度異型增生組32例,根據(jù)其組織學(xué)類型分為管狀腺瘤70例、絨毛狀腺瘤44例。正常結(jié)腸組織30例,年齡24~70歲,男性18例,女性12例。

    1.2 方法 免疫組化染色按SABC試劑盒操作說明書進(jìn)行。鼠抗人MTA1單克隆抗體(1C3)購自美國Santa Cruz公司,工作濃度為1 ∶100。羊抗鼠辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗;兔抗人RECK單克隆抗體(D8C7)購自福州邁新公司,工作濃度為即用型;防脫片劑APES及DAB顯色劑均購自北京中杉金橋公司;以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,用已知陽性切片作為陽性對(duì)照。

    1.3 結(jié)果判斷 MTA1蛋白定位于細(xì)胞核,呈棕黃色顆粒為陽性;RECK蛋白定位于胞質(zhì)或胞核呈棕黃色著色為陽性。結(jié)果判定:所有病理染色標(biāo)本均由兩名病理醫(yī)師判斷,判斷標(biāo)準(zhǔn):染色強(qiáng)度按棕色深淺可分為0分、1分、2分及3分,按陽性細(xì)胞比例范圍分為(0)0分、(0~30%)1分、(30%~60%)2分和(>60%)3分;最后將兩項(xiàng)得分結(jié)果相加:0~2分為陰性,3~6分為陽性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 MTA1、RECK在不同結(jié)腸組織中的表達(dá) MTA1在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組織中的陽性率分別為6.67%、42.85%、63.64%、84.61%(圖1)。MTA1在結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),由此可見MTA1在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中的陽性率呈逐漸增高趨勢(shì)(表1)。RECK在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組中的陽性率分別為100%、78.57%、77.27%、53.85%(圖2)。RECK在結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),由此可見RECK在正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中的陽性率呈逐漸降低趨勢(shì)(表1)。

    表1 MTA1、RECK在不同結(jié)腸組織中的表達(dá)

    結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤、管狀腺瘤及正常結(jié)腸組相比,☆P<0.05;絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤、正常結(jié)腸組織相比,*P<0.05;管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織相比,△P<0.05

    2.2 MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的表達(dá) 在結(jié)腸腺瘤中MTA1的陽性率分別為39.02%(輕度異型增生)、81.25%(中重度異型增生),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RECK在輕度異型增生結(jié)腸腺瘤、中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中的陽性率分別為90.24%、46.88%,中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中RECK陽性率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表2)。

    表2 MTA1、RECK在結(jié)腸腺瘤癌變過程中的表達(dá)

    與輕度異型增生相比,*P<0.05

    2.3 MTA1、RECK表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系 MTA1在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高及腫瘤分化程度的降低而升高(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes C+D組)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes A+B組),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MTA1表達(dá)與結(jié)腸癌患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05)。RECK在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而降低(P<0.05)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes C+D組)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes A+B組),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RECK表達(dá)與結(jié)腸癌患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05,表3)。

    3 討論

    MTA1是1993年P(guān)encil等[6]應(yīng)用差異雜交技術(shù)從具有轉(zhuǎn)移潛能的鼠乳腺癌細(xì)胞株13762NF中篩選克隆出來的基因,其通過影響染色質(zhì)的狀態(tài)來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄,調(diào)控組蛋白脫乙?;鶑亩l(fā)揮其生物學(xué)作用。MTA1是MTA家族的一員,其與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。MTA1是一種關(guān)鍵的癌蛋白,有研究顯示MTA1在人類腫瘤中表達(dá)上調(diào),其高表達(dá)與腫瘤的高侵襲特征如高病理分級(jí)、血管形成和預(yù)后不良等相關(guān)。MTA1可能通過以下機(jī)制在腫瘤發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮作用:(1)MTA1基因與組蛋白去乙?;附Y(jié)合重塑染色質(zhì)的結(jié)構(gòu),實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白的下調(diào)[8];(2)MTA1基因能夠改變細(xì)胞角蛋白纖維系統(tǒng),使細(xì)胞獲得更強(qiáng)的侵襲及轉(zhuǎn)移特征[9]。張金龍等[10]采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸癌中MTA1的表達(dá),結(jié)果顯示結(jié)腸癌組織及轉(zhuǎn)移組織中MTA1細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度均顯著高于正常組織,MTA1在細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)強(qiáng)度與臨床分期呈正相關(guān),生存時(shí)間<5年的結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)MTA1的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于生存時(shí)間≥5年的患者組織,提示結(jié)腸癌中MTA1細(xì)胞質(zhì)過表達(dá)者預(yù)后不良。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中MTA1陽性率呈逐漸上升趨勢(shì),且中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中MTA1陽性率明顯高于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤,MTA1在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而升高,與張金龍等的研究結(jié)果一致。提示MTA1高表達(dá)是結(jié)腸癌發(fā)生的早期事件,MTA1在結(jié)腸腺瘤癌變過程中發(fā)揮一定的作用。

    ①A①B①C②A②B②C

    圖1 MTA1的表達(dá):A.正常結(jié)腸黏膜中陰性;B.結(jié)腸癌中陽性;C.結(jié)腸腺瘤中陽性,SABC法 圖2 RECK的表達(dá):A.正常結(jié)腸黏膜中陽性;B.結(jié)腸癌中陰性;C.結(jié)腸腺瘤中陽性;SABC法

    表3 MTA1、RECK表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

    RECK基因是1998年日本學(xué)者Takahashi等[11]在v-Kiras轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因,其具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)與活性的功能。Morioka等[12]研究表明,RECK基因表達(dá)缺失的細(xì)胞周圍黏連斑不能形成,細(xì)胞間連接遭受破壞;而對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞微管系統(tǒng)有顯著作用的谷氨酸微管蛋白水平顯著降低,明膠溶解功能增加,纖維粘連蛋白減少;同時(shí),RECK基因表達(dá)降低的成纖維細(xì)胞在遷移過程中,其細(xì)胞極性消失,細(xì)胞定向遷移的穩(wěn)定性顯著減弱而遷移速度卻明顯增加。這說明RECK對(duì)于細(xì)胞形成和維持合適的細(xì)胞-細(xì)胞基質(zhì)間粘連以及細(xì)胞的定向遷移具有調(diào)節(jié)作用;而在惡性腫瘤中,由于RECK基因表達(dá)缺失,這一功能被弱化。同時(shí),RECK能在轉(zhuǎn)錄后水平抑制至少3種MMPs,即MMP-2、MMP-9及MTI-MMP,進(jìn)而抑制腫瘤的血管形成及轉(zhuǎn)移。近年來,研究顯示RECK基因參與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,這些腫瘤包括肺癌、肝癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌及膀胱異型細(xì)胞癌等[13-14]。并且該基因與惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中RECK陽性率呈逐漸降低趨勢(shì),且中重度異型增生結(jié)腸腺瘤中RECK陽性率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸腺瘤。RECK在結(jié)腸癌中的陽性率隨腫瘤臨床Dukes分期的提高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度的降低而降低。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes C+D組)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Dukes A+B組),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。韓兵等[15]研究發(fā)現(xiàn),RECK在結(jié)腸癌組織中的陽性率低于正常結(jié)腸組織。RECK表達(dá)與結(jié)腸癌浸潤層次、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期呈明顯負(fù)相關(guān),與本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。由此可見MTA1、RECK參與正常組織、癌前病變、癌組織的發(fā)生、發(fā)展,在結(jié)腸腺瘤的癌變過程中起著重要作用。MTA1、RECK可能成為結(jié)腸癌基因治療的靶點(diǎn)之一,為結(jié)腸腺瘤癌變的早期預(yù)防和臨床靶向治療提供科學(xué)依據(jù)。

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    邢臺(tái)市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014ZC157)

    河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺(tái)市人民醫(yī)院消化內(nèi)科,邢臺(tái) 054000

    陳現(xiàn)亮,男,碩士,主治醫(yī)師。Tel: (0319)3286143, E-mail: 125569317@qq.com

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    A

    1001-7399(2017)04-0432-04

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