坎離顆粒干預(yù)對自發(fā)性高血壓大鼠和腹主動脈縮窄大鼠的降壓療效

譚艷+++魯成++蔣梅先++劉永明

[摘要] 目的 觀察坎離顆粒干預(yù)對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）及腹主動脈縮窄大鼠的降壓療效。 方法 ①SPF級10周齡雄性SHR大鼠30只，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對照組（蒸餾水10 mL/kg）、坎離組（坎離顆粒混懸液6.75 g/kg）、纈沙坦組（纈沙坦混懸液7.2 mg/kg），每組10只。12周齡時開始藥物干預(yù)，共干預(yù)12周。②SPF級10周齡雄性Wistar大鼠40只，11周齡時，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)選取10只為假手術(shù)組（蒸餾水10 mL/kg），余30只腹主動脈縮窄術(shù)后，再次隨機(jī)分為模型組（蒸餾水10 mL/kg）、坎離組（坎離顆粒混懸液6.75 g/kg）、纈沙坦組（纈沙坦混懸液7.2 mg/kg），每組10只。12周齡時（造模后1周）開始藥物干預(yù)，共干預(yù)12周。分別于治療前、后4、8、12周測量大鼠血壓，各測3次取平均值。 結(jié)果 SHR血壓：①與對照組比較，在治療后第8周、第12周時坎離組血壓均明顯降低（P < 0.01），纈沙坦組治療第4周、第8周、第12周血壓明顯降低（P < 0.01）；與纈沙坦組比較，坎離組各時點血壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。②與本組治療前比較，對照組和坎離組在治療后第4周、第8周、第12周血壓均明顯增高（P < 0.01）；纈沙坦組在治療后8、12周血壓均明顯增高（P < 0.01）。腹主動脈縮窄大鼠血壓：①造模1、4、8、12周后，模型組明顯升高（P < 0.01）；與模型組比較，坎離組治療后第8周、第12周血壓均明顯降低（P < 0.01），纈沙坦組治療后第4、8、12周血壓均明顯降低（P < 0.01）；與纈沙坦組比較，治療后第8周、第12周時，中藥組血壓較高（P < 0.05）。②與本組治療前相比，假手術(shù)組血壓于治療后8、12周血壓明顯增高（P < 0.05）；模型組血壓于治療后8周、12周血壓明顯增高（P < 0.05）；坎離組血壓未見明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；纈沙坦組血壓于治療后4、8周血壓有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），至治療后12周時血壓明顯降低（P < 0.05）。 結(jié)論 坎離顆?？梢燥@著降低SHR及腹主動脈縮窄大鼠的血壓。

[關(guān)鍵詞] 坎離顆粒；自發(fā)性高血壓大鼠；腹主動脈縮窄大鼠；血壓

[中圖分類號] R28 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）04（c）-0008-05

[Abstract] Objective To investigate the antihypertensive efficacy of Kanli Granule on spontaneously hypertensive rats（SHR）and abdominal aorta constriction rats. Methods By using random number table， thirty SPF male SHRs， ten weeks old， were ramdomly divided into three groups： control group （treated with distilled water 10 mL/kg）， Kanli group （treated with Kanli Granule suspension 6.75 g/kg） and Valsartan group （treated with Valsartan suspension 7.2 mg/kg）. Each group was consisted of ten rats. All the animals were treated for twelve weeks from twelve weeks old. By using random number table， forty SPF male Wistar rats （ten weeks old）， ten were ramdomly received a sham operation， which were treated with distilled water （10 mL/kg） one week later， while thirty with abdominal aorta constriction surgery were ramdomly divided into three groups： model group （treated with distilled water 10 mL/kg）， Kanli group （treated with Kanli Granule suspension 6.75 g/kg） and Valsartan group （treated with valsartan suspension 7.2 mg/kg）. Each group was consisted of ten rats. All the animals were treated for twelve weeks from twelve-week-old （one week after operation as well）. Blood pressure was measured before treatment， and at the fourth， eighth， twelfth week after treatment， and everyone were measured three times to get the mean value eventually. Results The study of SHR：①at the eighth and twelfth week after the treatment， compared with the control group， the blood pressure of the Kanli group was significantly reduced （P < 0.01）. Compared with the control group， the blood pressure of Valsartan group was reduced at the fourth， eighth and twelfth week after the trentment （P < 0.01）. While there was no significant difference between the Kanli group and the Valsartan group （P > 0.05）. ②Compared with the group before treatment， the blood pressure of the control group and the Kanli group were significantly increased at the fourth， eighth and twelfth week after the treatment （P < 0.01）； the blood pressure of the Valsartan group was significantly increased at the eighth and twelfth week after the treatment （P < 0.01）. The study of the abdominal aorta constriction rats： ①after surgery， the blood pressure of the Model group was significantly increased （P < 0.01）； compared with the model group， the blood pressure was significantly reduced at the eighth and twelfth week after the treatment of the Kanli group （P < 0.01）， and the blood pressure was significantly reduced at the fourth， eighth and twelfth week after the treatment of Valsartan group （P < 0.01）； compared with the Valsartan group， the blood pressure at the eighth and twelfth week after the treatment of the Kanli group was higher （P < 0.05）. ②Compared with the group before treatment， the blood pressure of the sham group was significantly increased at the eighth and twelfth week after the treatment （P < 0.05）； the blood pressure of the model group was significantly increased at the eighth and twelfth week after the treatment （P < 0.05）； there was no significant increased in Kanli group （P > 0.05）； the blood pressure of the Valsartan group was decreased at the fourth and eighth week after the treatment while there was no difference （P > 0.05）， and was significantly decreased at the twelfth week after the treatment （P < 0.05）. Conclusion Kanli Granule can significantly decrease the blood pressure either in SHR or abdominal aorta constriction rats.

[Key words] Kanli Granule； Spontaneously hypertensive rats； Abdominal aorta constriction rats； Blood pressure

高血壓是心、腦血管疾病致殘、致死的重要危險因素之一，長期高血壓可能影響心、腦、腎等重要臟器的功能，最終導(dǎo)致這些器官功能衰竭。積極的藥物干預(yù)不僅可以起到降壓效果，并有助于減少靶器官損害的發(fā)生率。在既往實驗中，發(fā)現(xiàn)坎離顆粒能降低腹主動脈縮窄動物血壓[1]。本研究旨在觀察研究坎離顆粒對自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）及腹主動脈縮窄大鼠兩種動物模型的降壓療效?，F(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物

10周齡SPF級雄性SHR大鼠30只，體重240～260 g，購自中國科學(xué)院上海實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（京）2012-0001；10周齡SPF級雄性Wistar大鼠40只，體重270～290 g，購自中國科學(xué)院上海實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（滬）2012-0002。所有動物購回后在恒溫（22±2）℃、恒濕（55±5）%、人工光照明暗各12 h的飼養(yǎng)室內(nèi)適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后進(jìn)入實驗。實驗嚴(yán)格按照上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

1.2 藥物制備

坎離顆粒：主要由生黃芪、熟附子、白芍、白術(shù)、茯苓、莪術(shù)、葶藶子、車前子組成（由曙光醫(yī)院制劑室完成制劑工藝）。使用時將坎離顆粒配成含生藥0.675 g/mL的混懸劑。纈沙坦（Valsartan 80 mg/粒，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號X2008）碾碎，過藥典100目篩后，置于含0.5%混懸劑（羧甲基纖維素鈉）的蒸餾水中，制成0.72 g/L濃度的纈沙坦混懸劑。

1.3 主要儀器與試劑

尾動脈血壓測定分析系統(tǒng)BP-98A（北京軟隆科技有限責(zé)任公司）；Adventurer Ohaus AR1140/C型電子分析天平，美國Adventurer Ohaus。

1.4 腹主動脈縮窄造模

參照文獻(xiàn)[1-4]采用腹主動脈縮窄法制成腎性高血壓大鼠模型。具體步驟如下：實驗大鼠手術(shù)前12 h禁食不禁水，以2%戊巴比妥鈉按35 mg/kg腹腔注射麻醉，待角膜反射消失后，固定在手術(shù)臺上，去除腹部毛發(fā)，暴露劍突下0.5～2 cm處皮膚，75%酒精皮膚消毒。沿腹白線以手術(shù)剪刀依次逐層打開腹腔，開口約1.5 cm左右，鈍性分離腹腔軟組織，暴露腹主動脈，在雙側(cè)腎動脈間分離該處腹主動脈，將直徑0.6 mm的鈍金屬針于該段腹主動脈平行放置，后用外科手術(shù)縫合線（5-0）結(jié)扎，并迅速抽離金屬針，造成腹主動脈縮窄。依次用縫合腹腔，碘伏消毒；術(shù)后腹腔注射0.1 mL慶大霉素預(yù)防感染。假手術(shù)組除開腹，暴露并分離腹主動脈，但不結(jié)扎外，大致步驟與模型動物處理相同。

1.5 實驗方法

1.5.1 分組與給藥 SPF級10周齡雄性SHR大鼠30只，隨機(jī)分為對照組、坎離組、纈沙坦組，每組10只。以血壓達(dá)160 mmHg為模型成功。第12周齡時開始藥物干預(yù)，所有大鼠按“人和動物按體表面積折算的等效劑量比值表”折算，分別給予中藥浸膏溶液（以生藥量計）6.75 g/kg（坎離組）、纈沙坦7.2 mg/kg（纈沙坦組）和等量蒸餾水10 mL/kg（對照組），共干預(yù)12周。

SPF級10周齡雄性Wistar大鼠40只。11周齡時，隨機(jī)選取10只為假手術(shù)組，余30只腹主動脈縮窄術(shù)后，再次隨機(jī)分為模型組、坎離組、纈沙坦組，每組10只。以造模后血壓增高20～30 mmHg為模型成功。12周齡時（造模后1周）開始藥物干預(yù)，坎離組和纈沙坦組用藥同前，假手術(shù)組和模型組同對照組，共干預(yù)12周。

1.5.2 左前肢動脈血壓測定 分別于治療前、治療后4、8、12周監(jiān)測大鼠外周血壓，采取左前肢動脈測量法[5]，于腹腔注射2%戊巴比妥鈉（35 mg/kg）麻醉實驗大鼠，測量大鼠左前肢血壓（收縮壓），每只大鼠測3次，取平均值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析q檢驗，組內(nèi)比較采用配對樣本t檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

在本實驗中，腹主動脈縮窄術(shù)后共死亡5只大鼠（死亡率12.5%，與文獻(xiàn)報道相近），其中假手術(shù)組1只、模型組2只、坎離組1只、纈沙坦組1只。SHR大鼠無死亡。

2.2 對SHR血壓的影響

治療前，各組大鼠血壓比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。與對照組比較，在治療后第8周、第12周時坎離組血壓均明顯降低（P < 0.01），纈沙坦組治療第4周、第8周、第12周血壓均明顯降低（P < 0.01）；與纈沙坦組比較，坎離組各時點血壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

與本組治療前比較，對照組和坎離組在治療后4、8、12周血壓均明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01），但隨后血壓未見進(jìn)一步明顯增高；纈沙坦組在治療4周后血壓有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），在治療后8、12周血壓均明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01），但隨后血壓未見進(jìn)一步明顯增高。見表1。2.3 對腹主動脈縮窄大鼠血壓的影響

造模1、4、8、12周后，模型組血壓明顯升高（P < 0.01）；與模型組比較，坎離組治療后第8周、第12周血壓均明顯降低（P < 0.01）；纈沙坦組治療后第4周、第8周、第12周血壓均明顯低于模型組（P < 0.01）；與纈沙坦組比較，治療后第8周和第12周時，坎離組血壓較纈沙坦組高（P < 0.05）。

與本組治療前相比，假手術(shù)組血壓于治療后8周、12周血壓明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；模型組血壓于治療后8、12周血壓明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；坎離組血壓未見明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；纈沙坦組血壓于治療后4、8周血壓有降低趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），至治療后12周時血壓明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

3 討論

SHR的血壓隨鼠齡不斷升高，3～4月齡時血壓可達(dá)160 mmHg，其病理表現(xiàn)與人類原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）有很多共同特征，是迄今研究原發(fā)性高血壓最常用的動物模型。EH的病理機(jī)制復(fù)雜，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin angiotensin aldosterone system，RAAS）在EH發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。研究證實，RAAS不僅存在于血漿中，而且還獨立存在于局部心肌、胸主動脈、腸系膜上動脈等組織中[6-7]。血管緊張素-Ⅱ（angiotensin-Ⅱ，Ang-Ⅱ）是RAAS中的強(qiáng)活性物質(zhì)，其生物學(xué)作用主要是由1型受體（angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1）介導(dǎo)的，具有強(qiáng)烈的縮血管作用，被證實在SHR心肌組織中含量明顯升高[8-10]。纈沙坦是選擇性AT1受體拮抗劑，對AT1的拮抗作用強(qiáng)于2型受體（angiotensin Ⅱ type 2 receptor，AT2）的20 000倍，通過阻斷Ang-Ⅱ與AT1受體的結(jié)合，從而抑制Ang-Ⅱ的生理效應(yīng)，具有明顯的降壓效果[11]。本研究結(jié)果表明，SHR 10周齡時血壓已增高，其后血壓呈進(jìn)行性增高，坎離顆粒干預(yù)后4周即有降壓趨勢，至干預(yù)12周時降壓療效顯著，其降壓療效與纈沙坦相似。

腹主動脈縮窄是誘發(fā)繼發(fā)性高血壓的重要模型，血壓亦是評價模型成功與否的重要依據(jù)之一。腎動脈狹窄時，腎血流下降，導(dǎo)致RAAS被激活，引起血管收縮和水鈉潴留，血壓升高。單側(cè)腎動脈狹窄時，非狹窄側(cè)腎高灌注、高腎小球囊內(nèi)壓和高腎小球濾過壓可能產(chǎn)生壓力性利尿，潴留的水鈉被排出，高血壓的維持主要依賴腎素-血管緊張素系統(tǒng)，此時用腎素-血管緊張素阻斷藥降壓療效顯著。多項實驗研究表明，經(jīng)腹主動脈縮窄術(shù)后大鼠的收縮壓明顯升高，纈沙坦的降壓療效確切[4，12-14]。本研究結(jié)果表明，經(jīng)腹主動脈縮窄模型組大鼠血壓在治療前（造模后1周）、治療后4、8、12周血壓均明顯高于假手術(shù)組，提示造模成功；坎離顆粒干預(yù)能有效降低腹主動脈縮窄大鼠的血壓。

坎離顆粒主要由生黃芪、熟附子、白芍、白術(shù)、茯苓、莪術(shù)、葶藶子、車前子等10味中藥組成，由曙光醫(yī)院制劑室完成制劑工藝，方中以黃芪補(bǔ)氣利水，附子溫陽為君，佐以白術(shù)、茯苓健脾益氣利水，葶藶子、車前子利水，白芍?jǐn)筷幦岣?，莪術(shù)活血，共奏益氣溫陽、活血利水之效?，F(xiàn)代藥理研究亦證實黃芪、車前子、白芍、葶藶子具有降壓作用[15-18]。其中黃芪對血壓具有一定的雙向調(diào)節(jié)作用，其機(jī)制可能是黃芪中所含的毛蕊異黃酮能抑制內(nèi)皮細(xì)胞血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）分泌，增強(qiáng)ACE2及其mRNA表達(dá)[19]。白芍、車前子、葶藶子提取物不僅具有利尿效應(yīng)，亦能夠抑制ACE的活性及Ang-Ⅱ的生成。本研究通過坎離顆粒干預(yù)兩種高血壓動物模型證實，坎離顆?？梢燥@著降低SHR及腹主動脈縮窄誘導(dǎo)的高血壓大鼠的血壓，降壓療效與纈沙坦相當(dāng)。其降壓作用可能與坎離顆粒中的相關(guān)降壓組分參與抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)、交感神經(jīng)系統(tǒng)的過度激活以及改善動脈內(nèi)皮功能等機(jī)制有關(guān)[1-4，20-21]，將在進(jìn)一步研究中深入探討坎離顆粒降壓的可能機(jī)制。

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（收稿日期：2016-11-09 本文編輯：李岳澤）