胃痛平膠囊中白屈菜紅堿含量的測定方法

段樹卿+劉微+尹占芳

[摘要]目的 建立胃痛平膠囊中白屈菜紅堿的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定胃痛平膠囊中白屈菜紅堿的含量，色譜柱為Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，2.5 μm），流動相為乙腈-1%三乙胺溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（26∶74），檢測波長為269 nm，柱溫為25℃，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣體積為10 μl。結(jié)果 白屈菜紅堿的線性范圍：2.62～43.67 μg/ml（r=0.9999），平均加樣回收率為98.88%，RSD為1.91%（n=9）。結(jié)論 所建立的方法準(zhǔn)確、靈敏、簡便，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，專屬性強，可較好地控制胃痛平膠囊的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞]胃痛平膠囊；白屈菜紅堿；高效液相色譜法

[中圖分類號] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）12（c）-0129-04

Determination method of content of chelerythrine in Weitongping Capsules

DUAN Shu-qing1，2 LIU Wei1 YIN Zhan-fang1

1.Jingfukang Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Chengde 067000，China；2.New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province，Chengde 067000，China

[Abstract]Objective To establish a method for the determination of chelerythrine in Weitongping Capsules.Methods The content of chelerythrine in Weitongping Capsules was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）.The chromatographic column was Agilent XDB-C18 （4.6 mm×150 mm，2.5 μm）.The mobile phase was acetonitrile-1% triethylamine solution （26∶74；pH value re-adjusted to 3.0）.The detection wavelength was 269 nm，the column temperature was 25℃，the flow rate was 1.0 ml/min，and the injection volume was 10 μl.Results Linear range of chelerythrine was 2.62-43.67 μg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 98.88% and RSD was 1.91% （n=9）.Conclusion The established method is accurate，sensitive and simple，in good stability and reproducibility，and specificity，which can control the quality of Weitongping Capsule in a better way.

[Key words]Weitongping Capsules；Chelerythrine；High performance liquid chromatography

胃痛平膠囊是由白屈菜經(jīng)適宜加工制成的膠囊劑，收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二十冊，具有緩急止痛的功效，用于慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍及腸胃痙攣引起的疼痛等。

白屈菜為罌粟科白屈菜屬植物，含有白屈菜堿、白屈菜紅堿、血根堿等生物堿類成分，其中白屈菜紅堿的含量較高，并且是一種生理活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抑制蛋白激酶C、抗微管聚合抑制細(xì)胞有絲分裂等作用[2]。

胃痛平膠囊現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)除膠囊劑的常規(guī)檢驗外，只有一項薄層鑒別項。目前，未查到國內(nèi)外文獻(xiàn)對胃痛平膠囊中白屈菜紅堿的含量測定的相關(guān)報道，為此，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-15]，采用高效液相色譜法（HPLC）測定胃痛寧膠囊中白屈菜紅堿的含量，為胃痛平膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

1儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀，VWD檢測器（美國Agilent公司）；KQ-500DE醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AE 240 十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒）。

白屈菜紅堿對照品（批號111718-201402），購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈（美國Fisher）為色譜純；甲醇（天津佳興化工玻璃儀器工貿(mào)有限公司）為分析純，水（三級反滲法制得純化水）。胃痛平膠囊、陰性樣品及陰性樣品制備所用原料均由頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用Agilent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，2.5 μm）；以乙腈-1%三乙胺溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（26∶74）為流動相；檢測波長為269 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣體積：10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取白屈菜紅堿對照品適量，加甲醇制成含白屈菜紅堿8 μg/ml對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取胃痛平膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.8 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加鹽酸-甲醇（0.5∶100）混合溶液25 ml，稱定重量，水浴加熱回流90 min，放冷；再稱定重量，用鹽酸-甲醇（0.5∶100）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液15 ml，蒸干，殘渣加50%甲醇使溶解；轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按處方中的藥味配制不含白屈菜的陰性樣品，依“2.3”項下方法制備陰性對照液。

2.3專屬性試驗

按“2.1”項下色譜條件，將對照品溶液、供試品溶液及各陰性對照液分別注入液相色譜儀測定，結(jié)果顯示，在該色譜條件下，陰性無干擾（圖1）。

2.4 定量限的確定

取標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中最低濃度的對照品溶液稀釋，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)行檢測，進(jìn)樣量為10 μl，然后不斷按倍數(shù)稀釋，測出白屈菜紅堿濃度為0.5240 μg/ml的溶液信噪比為10∶1，確定定量限為5.2400 ng。

2.5 檢測限的確定

取標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中最低濃度的對照品溶液稀釋，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)行檢測，進(jìn)樣量為10 μl，然后不斷按倍數(shù)稀釋，測出白屈菜紅堿濃度為0.1747 mg/ml的溶液信噪比為3∶1，確定檢測限為1.747 ng。

2.6線性關(guān)系考察

精密稱取白屈菜紅堿對照品適量，加甲醇分別制成含白屈菜紅堿43.670、21.840、8.734、4.367、2.620 μg/ml，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行HPLC分析。以白屈菜紅堿的峰面積（Y）對白屈菜紅堿的濃度（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y= 7683X-15.669 ，r=0.9999（n=5）。結(jié)果表明，白屈菜紅堿在2.62～43.67 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7精密度試驗

取白屈菜紅堿（濃度為8.732 μg/ml）對照品溶液，按照“2.1”項下的色譜條件，各重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄每次的色譜峰面積，計算RSD值，結(jié)果顯示白屈菜紅堿RSD為0.28%，表明儀器精密度良好。

2.8重復(fù)性試驗

精密稱取同一批已知濃度胃痛平膠囊內(nèi)容物9份，1～3份每份0.4 g，4～6份每份0.8 g，7～9份每份1.2 g，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄白屈菜紅堿峰面積，計算含量。結(jié)果見表1，白屈菜紅堿的平均含量為111.416 μg/g，RSD為1.30%（n=9）。表明該樣品處理方法重現(xiàn)性好。

2.9穩(wěn)定性試驗

取按照“2.3”項下方法制備的供試品溶液，分別在制備后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h進(jìn)樣10 μl，記錄色譜峰面積，結(jié)果顯示白屈菜紅堿色譜峰面積RSD為0.19%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.10加樣回收率試驗

精密量取已測定白屈菜紅堿含量的樣品（含量為123.47 μg/g）9份，精密稱定0.4 g，分別加入一定量對照品，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，以供試品溶液中絕對質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算加樣回收率，結(jié)果白屈菜紅堿平均回收率為98.88%，RSD為1.91%（表2） 。

2.11 樣品含量測定

按“2.1”項下色譜條件測定頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司胃痛平膠囊（批號491133，491134，520331，520032， 620225，620226，620091，620092）中白屈菜紅堿的含量（表3） 。

3討論

3.1待測成分的選擇

目前，國內(nèi)外文獻(xiàn)有對胃痛平膠囊的研究報道[6]，但對胃痛平膠囊中有關(guān)白屈菜紅堿含量測定的報道較少。本實驗對胃痛平膠囊中白屈菜的主要成分白屈菜紅堿進(jìn)行分析，建立其含量測定方法。

3.2檢測波長的選擇及色譜柱、儀器的耐用性

以二級陣列檢測器對白屈菜紅堿進(jìn)行全波長掃描，在269 nm處均有比較大吸收，故選用269 nm作為檢測波長；選用了兩種色譜柱（Agilent XDB- C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，2.5 μm），YMC-Pack ODS-A色譜柱（4.6 mm×250 mm，2.5 μm），分離效果均較好，且分離時間適中；考察了Agilent 1100和Agilent 1260兩種型號的高效液相色譜儀對胃痛平膠囊進(jìn)行測定，均可用于樣品測定。

3.3提取溶劑及提取時間的選擇

選用了2種提取方法（水浴加熱回流，直接超聲），均對被測成分無干擾且可較好地分離，水浴加熱回流含量較高，選擇水浴加熱回流的方法；考察了不同溶劑（甲醇、70%甲醇、50%甲醇、不同比例鹽酸-甲醇），結(jié)果用鹽酸-甲醇（0.5∶100）作為提取溶劑，所提白屈菜紅堿含量較好，最終確定選用鹽酸-甲醇（0.5∶100）作為提取溶劑；考察了回流時間45、60、90、120 min，結(jié)果顯示回流90 min 即可提取完全。

[參考文獻(xiàn)]

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二十冊[Z].WS3-B-3936-98.245.

[2]宋欣鑫，張寧，吳昊，等.胃痛平糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2007，24（7）：410-412.

[3]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[4]傅麗娟.白屈菜的研究與進(jìn)展[J].中國中醫(yī)藥咨訊，2010，2（10）：189-190.

[5]鄒翔，王雨萌，王嘉琦，等.白屈菜堿的藥理作用研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2014，29（11）：1326-1330.

[6]王雪，劉洪章，劉樹英，等.白屈菜生物堿作用研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016，（14）：180-181.

[7]王培卿，尹震花，康文藝.白屈菜紅堿藥理活性研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2013，38（17）：2745-2749.

[8]韋祖巧，鄒翔，曲中原，等.白屈菜化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].中草藥，2009，40（增刊）：38-40.

[9]袁磊.白屈菜綜合研究最新進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015， 43（7）：15-17.

[10]董海榮，李俊芳，李君.RP-ELSD法測定胃痛平膠囊中原阿片堿的含量[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，11（3）：40-41.

[11]馬寧，肖光玲，高宇，等.HPLC法同時測定白屈菜中白屈菜堿和白屈菜紅堿[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報，2014，30（3）：351-353.

[12]趙巖，侯瑩瑩，郭帥，等.反相高效液相色譜法測定白屈菜種子中揮發(fā)油成分分析及氨基酸含量[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2015，6（12）：5053-5060.

[13]王曉麗，郭麗娜，孔寰宇，等.齊齊哈爾地區(qū)白屈菜中白屈菜紅堿的含量測定[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014，35（16）：2441.

[14]魯文靜，羅世恒，陳世忠.白屈菜中多種生物堿的高效液相色譜法測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2013，24（3）：601-603.

[15]顧悅，錢大瑋，段金廒，等.白屈菜藥材的UPLC特征圖譜建立及生物堿類成分的QTOF-MS分析[J].藥物分析雜志，2010，30（5）：780-786.