十全大補膏中芍藥苷的含量測定

劉青，劉波，丁曉彥*

(1.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟南 250014; 2.山東省千佛山醫(yī)院,山東 濟南 250014)

十全大補膏中芍藥苷的含量測定

劉青1，劉波2，丁曉彥1*

(1.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟南 250014; 2.山東省千佛山醫(yī)院,山東 濟南 250014)

建立了高效液相色譜法測定十全大補膏中芍藥苷含量的方法。采用Kromasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)，以乙腈-水(17∶83,V/V)為流動相，柱溫30 ℃, 進樣量10 μL，檢測波長230 nm，流速 1.0 mL/min。結(jié)果表明，芍藥苷在0.083 6～0.627 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r= 0.999 8)，加樣回收率為98.98%～100.47%，相對標(biāo)準偏差為0.65%(n=6)。本方法專屬性強、靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡便，適用于十全大補膏的質(zhì)量控制。

十全大補膏；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定

LIU Qing1, LIU Bo2，DING Xiao-yan1*

Abstract∶A HPLC method for the determination of paeoniflorin in tonic semifluid extract of ten ingredients was established. The HPLC analysis was performed on Kromasil C18column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), acetonitrile-water (17∶83,V/V) as the mobile phase, and the column temperature was 30 ℃, injection volume was 10 μL, the detective wavelength was at 230 nm, at a flow rate of 1.0 mL/min. Results revealed that paeoniflorin at the content of 0.083 6～0.627 0 μg showed good linearity(r= 0.999 8)，the recovery rate was 98.98%～100.47%, RSD was 0.65% (n=6). This method is highly specific, sensitive, reproducible, and simple, which can be used for the quality control of this preparation.

Key words∶tonic semifluid extract of ten ingredients; paeoniflorin; HPLC; content determination

膏滋是采用中藥飲片經(jīng)過加水浸泡、煎煮、濃縮，再加冰糖或蜂蜜制成的一種稠厚半流體狀或凍狀制劑，民間俗稱膏方或補膏，是傳統(tǒng)中醫(yī)藥的主要劑型之一，具有補虛扶弱、防病治病、糾正亞健康、抗衰延年等功效。本研究選取的十全大補膏臨床較為常用，具有溫補氣血的功效。處方主要由黨參、炒白術(shù) 、酒白芍等10種中藥組成[1]。 臨床用于久病體虛、氣短心悸、面色萎黃、氣血兩虛、頭暈自汗、精神倦怠、體倦乏力、四肢不溫、瘡瘍不斂、月經(jīng)量多等[2]。白芍為方中君藥，含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、蛋白質(zhì)及三萜類成分，具有解熱痙攣、擴張血管、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗炎抗?jié)?、利尿的作用[3]。

目前文獻有十全大補丸、十全大補顆粒、十全大補酒中芍藥苷含量測定的報道,但采用高效液相色譜法測定十全大補膏中芍藥苷含量的文獻尚不多見。由于劑型不同，十全大補膏中除組方藥材外還含有阿膠和糖類，所以供試品的制備和測定方法都有所不同。為了有效控制十全大補膏的質(zhì)量，使其在臨床使用中更加安全有效，本文采用高效液相色譜法測定十全大補膏中芍藥苷的含量，為控制該制劑的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 儀器、試劑與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀(包括e2695四元梯度泵、2996PDA檢測器、Empower3色譜工作站，美國Waters)；BP211D電子天平(德國Sartorius)；KQ-100醫(yī)用超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);MILLI-Q超純水系統(tǒng)(德國Merck Millipore)。

1.2試劑

乙腈為色譜純(上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?；乙醇、正丁醇為分析純；水為超純水。

1.3試藥

芍藥苷對照品(純度96.4%,批號:110736-201438,中國食品藥品檢定研究院)；十全大補膏及陰性樣品(自制)；處方藥材(博康中藥飲片有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

以Kromasil C18為色譜柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm)；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-水(17∶83，V/V);進樣量：10 μL;檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min。按上述色譜條件，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算為4 227，芍藥苷色譜峰與其他雜質(zhì)峰分離良好，R>1.5。

2.2對照品溶液制備

精密稱取對照品10.47 mg，置50 mL具塞量瓶中，加稀乙醇溶解并定容，搖勻，作為對照品儲備液(質(zhì)量濃度為209 μg/ mL)，精密量取5 mL，置25 mL具塞量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度,搖勻，即得(質(zhì)量濃度為41.80 μg/ mL)。

2.3供試品溶液的制備

精密稱取十全大補膏約1.0 g，置250 mL具塞三角瓶中，加稀乙醇200 mL，密塞，稱定，超聲提取40 min，放冷，用稀乙醇補足失重，搖勻，離心5 min，取上清液100 mL蒸干，加入80 ℃熱水40 mL，使其溶解，放冷，用水飽和正丁醇萃取3次，每次40 mL，合并上清液置于蒸發(fā)皿，水浴揮干，加稀乙醇溶解殘渣，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶定容并過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4空白對照溶液的制備

根據(jù)十全大補膏處方工藝，取除白芍以外其他藥材和輔料，制成不含白芍的陰性樣品，再按2.3項下方法制備，得空白對照溶液。

2.5專屬性考察

取上述對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，按2.1項下色譜條件分別進樣并測定，結(jié)果供試品溶液在與芍藥苷色譜峰相應(yīng)位置處有相同色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照溶液在此位置處無色譜峰出現(xiàn)，說明十全大補膏中其他組分對芍藥苷測定無干擾，表明本實驗方法專屬性良好。結(jié)果見圖1。

圖1 芍藥苷HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of paeoniflorin

2.6方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系考察

分別精密吸取芍藥苷對照品溶液2、5、7、10、15 μL進樣，以進樣量(μg)對數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進行回歸,得標(biāo)準曲線Y=23 565X+325.32,r= 0.999 8。結(jié)果顯示,芍藥苷進樣量在0.083 6～0.627 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6.2 精密度實驗

精密吸取已知濃度的芍藥苷對照品溶液，在2.1項色譜條件下重復(fù)進樣6次，測得芍藥苷峰面積相對標(biāo)準偏差為0.67%，表明儀器精密度符合要求。

2.6.3 重復(fù)性實驗

取十全大補膏樣品6份(批號：140122)，每份約1.0 g，按2.3項下方法制備供試品溶液，進樣分析，計算芍藥苷平均含有量為0.448 7 mg/g，相對標(biāo)準偏差為1.11%，表明本法的重復(fù)性良好。

2.6.4 穩(wěn)定性實驗

精密吸取十全大補膏供試品溶液適量，室溫放置，于0、2、4、、8、12、24 h進樣10 μL，所測峰面積相對標(biāo)準偏差為0.97%。表明供試品溶液室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.5 加樣回收實驗

精密稱取十全大補膏樣品(批號：140122)約0.5 g，平行6份，分別加入一定質(zhì)量的芍藥苷對照品，按2.3項下方法制備供試品溶液，進樣10 μL，測定計算芍藥苷平均回收率為99.58%，相對標(biāo)準偏差為0.65%。見表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果(n=6)

2.7樣品含量測定

取十全大補膏5個批號的樣品，每批3份，按2.3項下方法制備樣品溶液，再按2.1項色譜條件測定，結(jié)果見表 2。

表2 芍藥苷含量測定結(jié)果

3 討論

本文參考相關(guān)文獻資料[4-6]，對比了甲醇、乙醇、不同比例乙醇-水等溶劑條件下的提取方法對十全大補膏中芍藥苷成分提取效率的影響，發(fā)現(xiàn)采用稀乙醇作為提取溶劑時芍藥苷含量高，且雜質(zhì)干擾少。故選擇稀乙醇為提取溶劑。

采用Agilent Zorbax C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)、大連依利特C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)、Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)3種不同品牌色譜柱對樣品進行測定，流動相為乙腈-水(17∶83，V/V)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)后者分離度高且峰型對稱，故選用Kromasil C18色譜柱。

本實驗先后采用乙腈-水、乙腈-0.05%磷酸、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-水為流動相進行分離，比較之后發(fā)現(xiàn)乙腈-水較其他體系分離時間短，有機相用量少，柱壓低，色譜峰峰型對稱，分離度和拖尾因子均符合要求，理論板數(shù)高，故選用乙腈-水溶液系統(tǒng)。對乙腈-水的比例(體積比從10∶90到20∶80)也進行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者體積比17∶83時分離效果較好，因此采用該乙腈-水溶液系統(tǒng)為流動相[7-10]。

本文通過對提取溶劑、色譜柱、流動相組成和流動相比例分別進行比較，建立了十全大補膏中芍藥苷的含量測定方法，本方法分離度高，重現(xiàn)性好，可用于十全大補膏的質(zhì)量控制，同時也對其質(zhì)量標(biāo)準的進一步完善提供了參考。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部 [M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:419.

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Content determination of paeoniflorin in tonic semifluid extract of ten ingredients

(1.Shandong Academy of Chinese Medicine, Jinan 250014,China;2.Qianfoshan Hospital of Shandong Province, Shandong University, Jinan 250012,China)

R284.1

A

1002-4026(2017)05-0028-04

10.3976/j.issn.1002-4026.2017.05.005

2017-03-13

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃(2011-168)

劉青(1969—)，女，副研究員，研究方向為中藥分析。E-mail：wangboyavip@163.com

*通信作者，丁曉彥(1983—)，女，助理研究員，研究方向為中藥分析及中藥質(zhì)量控制。E-mail：kate-66@163.com