22%煙嘧·硝·氯吡OD高效液相色譜分析

東 琴，潘 靜，徐 妍，馬 超，高敬雨，劉潤峰

(北京明德立達農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 100085)

22%煙嘧·硝·氯吡OD高效液相色譜分析

東 琴，潘 靜，徐 妍，馬 超，高敬雨，劉潤峰

(北京明德立達農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 100085)

建立了以乙腈和水(0.05%磷酸水溶液)為流動相，采用ZORBAX Eclipse Plus C8(5 μm)為填料的、250 mm× 4.6mm (i.d.)的不銹鋼柱和UV檢測器，在245 nm檢測波長下，對試樣中的煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯進行高效液相色譜的分離和定量分析的方法。煙嘧磺隆、硝磺草酮及氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.07、0.06和0.05，變異系數(shù)分別為1.64%、0.58%和0.61%，平均回收率分別為99.52%、99.02%和99.16%。

煙嘧磺?。幌趸遣萃?；氯氟吡氧乙酸異辛酯；高效液相色譜法；分析

煙嘧磺隆(英文名稱nicosulfuron，其他名稱玉農(nóng)樂)是日本石原公司開發(fā)的磺酰脲類除草劑。煙嘧磺隆屬于內(nèi)吸傳導(dǎo)型除草劑，可被雜草的莖葉和根部吸收，隨后在植物體內(nèi)傳導(dǎo)，造成敏感植物生長停滯、莖葉褪綠，逐漸枯死，可以防除一年生和多年生闊葉雜草[1]。

硝磺草酮(英文名稱mesotrione，又名甲基磺草酮、米斯通)是捷利康公司開發(fā)的三酮類除草劑，抑制羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)的活性，是芽前和苗后廣譜選擇性除草劑，可有效防治主要的闊葉草和一些禾本科雜草。該劑對磺酰脲類除草劑產(chǎn)生抗性的雜草有效[1]。

氯氟吡氧乙酸異辛酯(英文名稱fluroxypyr-meptyl，通用名稱：氟草定、氟草煙，其他名稱：使它隆、盾隆)由美國陶氏益農(nóng)公司開發(fā)生產(chǎn)，是有機雜環(huán)類選擇性內(nèi)吸傳導(dǎo)型苗后除草劑。此物質(zhì)施用后很快被植物吸收，使敏感植物出現(xiàn)典型激素類除草劑的反應(yīng)，植株畸形、扭曲，最終枯死。它適用于小麥、大麥、玉米、葡萄、果園、牧場、林地、草坪等地防除闊葉雜草，如豬殃殃、卷莖蓼、馬齒莧、龍葵、田旋花、蓼、莧等，對禾本科雜草無效，對作物安全，在土壤中易降解，半衰期較短，對后茬作物沒有藥害[1]。

藥效試驗證明，煙嘧磺隆、硝磺草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯三者復(fù)配適用于防除玉米田一年生和多年生雜草，速效性好，殺草譜廣。煙嘧磺隆、硝磺草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯單劑的分析方法已有報道[2-4]。有關(guān)煙嘧磺隆、硝磺草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯復(fù)配油懸浮劑的液相色譜分析，目前尚未見公開報道。

本文采用反相高效液相色譜法，使用C8反相柱，紫外可變波長檢測器，對有效成分進行分析和定量。此方法同時適用煙嘧磺隆、硝磺草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯原藥及制劑的分析，具有簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好的特點[2-3]，適用于大生產(chǎn)時產(chǎn)品質(zhì)量的檢測分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260，具可變波長紫外檢測器；色譜數(shù)據(jù)處理工作站；色譜柱：250 mm ×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX Eclipse Plus C8填充物，粒徑5 μm；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm；進樣器：50 μL；超聲波清洗器。

乙腈：色譜純；冰乙酸：分析純；水：新蒸二次蒸餾水；煙嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)樣品：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院提供)；硝磺草酮標(biāo)準(zhǔn)樣品：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院)；氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)樣品：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院)；22%煙嘧磺隆·硝磺草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯油懸浮劑(江蘇明德立達作物科技有限公司)。

1.2 色譜條件

流動相：梯度洗脫，0 min：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比65︰35)；4 min：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比65︰35)；5 min：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比90︰10)；10 min：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比90︰10)；11 min：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比65︰35)；流動相流量：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：245 nm；進樣體積：5 μL；保留時間：煙嘧磺隆約：2.9 min，硝磺草酮約：3.5 min，氯氟吡氧乙酸異辛酯約：9.7 min。煙嘧磺隆、硝磺草酮及氯氟吡氧乙酸異辛酯的液相色譜圖見圖1、圖2和圖3。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取煙嘧磺隆標(biāo)樣約50 mg、硝磺草酮標(biāo)樣約50 mg、氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣約100 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，搖勻后吸取2 mL至10 mL容量瓶中，再用乙腈定容，搖勻后備用。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖

從左到右依次為：煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯

圖2 試樣中煙嘧磺隆、氯氟吡氧乙酸異辛酯液相色譜圖

從左到右依次為：煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯

圖3 試樣中硝磺草酮液相色譜圖

從左到右依次為：煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯

1.3.2 試樣溶液的制備

稱取試樣約0.25 g(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，搖勻后離心，取上清液備用，作為檢測煙嘧磺隆、氯氟吡氧乙酸異辛酯的試樣。

稱取試樣約0.1 g(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，搖勻后離心，取上清液備用，作為檢測硝磺草酮的試樣。

1.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)響應(yīng)值相對變化小于1.5%時，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進行測定。

1.5 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積分別進行平均。試樣中的煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)按式(1)計算：式中：A1——標(biāo)樣溶液中煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積的平均值；A2——試樣溶液中煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積的平均值；m1——煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2——試樣的質(zhì)量，g；P——標(biāo)樣中煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；5——稀釋因子。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相的選擇

根據(jù)化合物的特點及摸索測定，對甲醇和水、乙腈和水按不同的比例在色譜柱上進行選擇比較，經(jīng)測定選擇乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)為理想的流動相。當(dāng)流動相流速控制在1.0 mL/min時，有效成分與雜質(zhì)能很好地分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，保留時間短。綜合以上因素，最終選定乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相，采用梯度洗脫的方式，體積比分別為65︰35、65︰35、90︰10、90︰10、65︰35。

2.1.2 檢測波長的選擇

通過紫外可見分光光度計UV-1800在190～400 nm波長進行紫外掃描選擇，發(fā)現(xiàn)煙嘧磺隆在237.80 nm和197.40 nm均有較大吸收，硝磺草酮在271.80 nm和221.20 nm均有較大吸收，但考慮到溶劑及助劑對吸收的影響和樣品中兩組分的峰面積盡量接近，最終選定了245 nm作為檢測波長見圖4、圖5。

圖4 煙嘧磺隆紫外掃描圖

圖5 硝磺草酮紫外掃描圖

2.2 分析方法的線性關(guān)系測定

配制一系列煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按上述色譜條件操作，每個濃度重復(fù)進樣兩次，并且相鄰兩針的峰面積相對偏差小于1%，求其峰面積平均值。以煙嘧磺隆(硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖6、圖7及圖8。

圖6 煙嘧磺隆線性關(guān)系圖

結(jié)果表明，煙嘧磺隆的質(zhì)量濃度為50～300 mg/L時具有良好的線性范圍，線性回歸方程為y=9.745 1x +21.980 0，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6；硝磺草酮的質(zhì)量濃度為50～300 mg/L時具有良好的線性范圍，線性回歸方程為y=11.435 3x+24.780 0，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8；氯氟吡氧乙酸異辛酯的質(zhì)量濃度為100～600 mg/L時具有良好的線性范圍，線性回歸方程為y=4.295 6x+40.846 7，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6。

圖7 硝磺草酮線性關(guān)系圖

圖8 氯氟吡氧乙酸異辛酯線性關(guān)系圖

表1 分析方法精密度測定

2.3 分析方法的精密度測定

按上述色譜操作條件平行測定22%煙嘧磺隆·硝磺草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯OD試樣溶液5次，計算煙嘧磺隆、硝磺草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)(表1)。

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度測定

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在用本方法測得含量的煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯試樣中加入一定量的煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品，再按本方法步驟測定其含量(以煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯計)，計算回收率(表2)。

表2 分析方法準(zhǔn)確度測定

3 結(jié) 論

本文提出的22%煙嘧磺隆·硝磺草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯油懸浮劑中煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯含量的分析方法，同時適用于煙嘧磺隆、硝磺草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯原藥及制劑的分析。此方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，線性關(guān)系良好，具有簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠及分離效果好的優(yōu)點，是大生產(chǎn)時進行產(chǎn)品質(zhì)量檢測較理想的分析方法。

[1] 劉長令.世界農(nóng)藥大全(除草劑卷)(第一版)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2008: 47－50, 109－110, 206－208.

[2] 吳春先, 高立明, 王廣成, 等. 煙嘧磺隆的高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2006, (10): 6－9.

[3] 王小麗, 陳鐵春, 李友順, 等. 硝磺草酮原藥高效液相色譜分析方法研究[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2009, (06): 44－46.

[4] 王海霞, 高曉暉. 高效液相色譜法測定氯氟吡氧乙酸異辛酯的含量[J].農(nóng)藥, 2014, (01): 31－33.

Analysis of Nicosulfuron+Mesotrione+Fluroxypyr-meptyl 22% OD by HPLC

DONG Qin, PAN Jing, XU Yan, MA Chao, GAO Jingyu, LIU Runfeng
(Beijing Mindleader Agroscience Co., Ltd, Beijing 100085, China)

The separation and quantitative analysis of nicosulfuron + mesotrione + fluroxypyr-meptyl 22% OD was carried out by HPLC using C8column [250 mm×4.6mm (i.d.)] with UV-absorbance detector at 245 nm, and the mixture of acetonitrile and water as mobile phase. The results showed that the standard deviations of nicosulfuron, mesotrione and fluroxypyr-meptyl were 0.07, 1.64% and 99.52%, the variation coefficients were 0.06, 0.58% and 99.02%, and the average recoveries were 0.05, 0.61% and 99.16%, respectively.

nicosulfuron; mesotrione; fluroxypyr-meptyl ; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2017.01.12

TQ450.7

A

1009-6485(2017)01-0051-04

東琴(1990—)，女，山東臨沂人，碩士研究生，主要從事農(nóng)藥劑型加工研究。Tel: 010-56071481，E-mail：dongqin@mdldagro.com。

2016-11-17。