鞘內(nèi)注射美洛昔康對(duì)神經(jīng)損傷大鼠背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)GAP—43和NGF表達(dá)影響

寧猛?鄭鎮(zhèn)偉?蔣珊?游志堅(jiān)

[摘要] 目的 研究鞘內(nèi)注射美洛昔康（Mel）對(duì)CCI模型疼痛治療效果和背根神經(jīng)節(jié)（DRG）內(nèi)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43（GAP-43）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）表達(dá)的影響。 方法 成年SD雄性大鼠隨機(jī)分成四組：正常對(duì)照（C）組不做處理，CCI組不予注藥，生理鹽水（NS）治療組予注射生理鹽水，美洛昔康治療（Mel）組予注射不同劑量美洛昔康（Mel組100μg，qd、Mel2組200μg，qd、Mel3組100μg，bid、Mel4組200μg，bid）；每（亞）組均為5只大鼠。35只大鼠分別于術(shù)前及術(shù)后3d、7d測(cè)試機(jī)械性縮足反射閾值（MWT）和熱縮腿潛伏期（TWL）。術(shù)后7d取材大鼠DRG，檢測(cè)其GAP-43、NGF表達(dá)水平。 結(jié)果 MWT、TWL方面CCI組、NS組和Mel組較正常組顯著下降（P<0.05）；美洛昔康組比CCI、NS組下降幅度?。≒<0.05），且劑量越大MWT、TWL下降幅度越小（P<0.05）。GAP-43、NGF表達(dá)方面CCI組、NS組>Mel組>C組（P<0.05），且美洛昔康劑量越大，表達(dá)越少。 結(jié)論 鞘內(nèi)注射美洛昔康能明顯減輕大鼠CCI模型的機(jī)械痛敏和熱痛敏，并降低DRG內(nèi)GAP-43、NGF的表達(dá)水平。

[關(guān)鍵詞] 神經(jīng)性疼痛；鞘內(nèi)給藥；環(huán)氧化酶抑制劑；生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43；神經(jīng)生長(zhǎng)因子

[中圖分類號(hào)] R614 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）05-09-06

[Abstract] Objective To study the impact of intrathecal injection of meloxicam to the effect of CCI model on pain management and the expression of Growth-associated protein 43 and Nerve growth factor. Methods Adult SD male rats were randomly divided into four groups.Rats in control group were nothing，rats in CCI group were treated with no drug injection and normal saline，rats in treatment group were treated with saline injection，and rats in meloxicam group were treated with injection of different doses of meloxicam （100μg， qd in Mel1 group，200μg qd in Mel2 group，100μg， bid in Mel3 group，and 200μg， bid in Mel4 group）.5 rats were in each group.Mechanical withdrawal threshold （MWT） and Thermal withdrawal latency （TWL） of the 35 rats were determined before the operation and 3d，7d after the operation.DRG was selected on 7d after the operation to detect the expression level of GAP-43 and NGF. Results MWT and TWL in CCI group，MS group and Mel group were significantly decreased，compared with control group （P<0.05）.The decrease range of Mel group was less than that of CCI group and NS group （P<0.05）. The larger the dose，the smaller the decrease of MWT and TWL （P<0.05）.In the expression level of GAP-43 and NGF，CCI group>NS group>Mel group>Control group （P<0.05）.The larger the Meloxicam dose，the less the expression. Conclusion Intrathecal injection of meloxicam can significantly reduce mechanical allodynia and thermal hyperalgesia of rats CCI model，and reduce the expression of GAP-33 and NGF in DRG.

[Key words] Neuropathic pain；Intrathecal administration；Cyclooxygenase inhibitor；Growth-associated protein 43；Nerve growth factor

神經(jīng)病理性疼痛（neuropathic pain，NP）是各種疾患引起的外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳導(dǎo)通路異常或功能障礙導(dǎo)致的痛敏癥狀，可出現(xiàn)于許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，影響到6%～8%的普通人群。NP對(duì)生活質(zhì)量、情緒和睡眠的影響超過(guò)了其致病的病理負(fù)擔(dān)[1]。由于其發(fā)病機(jī)制尚不明了，治療效果不滿意，目前多采用對(duì)癥處理。研究[2-3]表明，環(huán)氧化酶（cyclooxygenase，COX）與神經(jīng)性疼痛的發(fā)生密切相關(guān)，應(yīng)用COX抑制劑治療神經(jīng)疼痛有一定效果。但全身用藥帶來(lái)的副作用卻限制了其臨床應(yīng)用，而鞘內(nèi)給藥報(bào)道不多。GAP-43被認(rèn)為是神經(jīng)損傷生長(zhǎng)發(fā)育和損傷再生分子標(biāo)志，NGF表達(dá)與DRG出芽有關(guān)。二者被認(rèn)為與神經(jīng)損傷后神經(jīng)性疼痛的發(fā)生相關(guān)[4]。為此，2016年5～10月本研究探討鞘內(nèi)注射（intrathecal injection，INTRA）選擇性COX抑制劑美洛昔康對(duì)CCI疼痛模型的治療效果，以及對(duì)GAP-43、NGF表達(dá)水平影響。進(jìn)而探討病理性神經(jīng)疼痛的機(jī)制，以及預(yù)測(cè)COX抑制劑鞘內(nèi)給藥對(duì)疼痛治療的可行性。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與鞘內(nèi)給藥

實(shí)驗(yàn)采用成年SD雄性大鼠（汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體重200～260g。實(shí)驗(yàn)大鼠分為四組，分別為正常對(duì)照（C）組，CCI組，生理鹽水（NS）治療組和美洛昔康Mel（上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，H20020217）治療組，Mel組又根據(jù)給藥劑量的不同分為四個(gè)亞組。首先，從INTRA成功大鼠中按隨機(jī)數(shù)字法選出5只大鼠作為C組，之后將INTRA和CCI造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分到其余各組中，每（亞）組均為5只。CCI組，行INTRA和CCI造模，但未予注藥；NS組，行INTRA和CCI造模，術(shù)后6h開(kāi)始每天鞘內(nèi)注射生理鹽水1次，容量為20μl；Mel組，行INTRA和CCI造模，術(shù)后6 h開(kāi)始鞘內(nèi)注射美洛昔康，注射的劑量分別為：Mel1組100μg，qd，Mel2組200μg，qd，Mel3組100μg，bid，Mel4組200μg，bid，直至術(shù)后第7d，鞘內(nèi)注射的美洛昔康其容量均為20μL，再加NS 5μL沖管。

1.2 方法

1.2.1 鞘內(nèi)給藥模型的制作 選取PE-10導(dǎo)管（smiths medical公司，英國(guó)），本研究進(jìn)行了部分改造。見(jiàn)圖1。按照Strkson RV 報(bào)道的方法[5]進(jìn)行選取腰段置管并加以改進(jìn)，采用腰麻針引導(dǎo)。

1.2.2 利多卡因篩選實(shí)驗(yàn) 置管術(shù)3d后取運(yùn)動(dòng)功能正常的大鼠鞘內(nèi)注射2%利多卡因（上海旭東海普藥業(yè)，中國(guó)）20μL+NS 7μL，藥物與NS間隔1μL氣泡，確保全部注入蛛網(wǎng)膜下隙，如注藥30s內(nèi)出現(xiàn)雙下肢癱瘓并在30min內(nèi)恢復(fù)則表示鞘內(nèi)置管模型成功。用于后續(xù)CCI造模實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷模型 參照Bennett和Xie1988年創(chuàng)建的方法[6]，在大鼠右側(cè)臀肌間隙暴露坐骨神經(jīng)主干部位，4-0的鉻腸線結(jié)扎坐骨神經(jīng)，結(jié)扎以引起大鼠腿部輕微抽搐而不影響神經(jīng)外膜的血運(yùn)為度，共打并列的結(jié)4個(gè)，結(jié)與結(jié)之間的間距大約為1mm，結(jié)扎完成后依次縫合肌肉和皮膚。左側(cè)作為正常對(duì)照。術(shù)后6h，大鼠完全清醒的狀態(tài)下，以Von Frey觸針（stolting公司，美國(guó)）和BME-410C熱痛刺激儀（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院科學(xué)院生物工程研究所，中國(guó)）測(cè)試大鼠的機(jī)械性痛閾和熱痛閾，選擇機(jī)械性痛閾和熱痛閾縮短的大鼠，即成功的CCI模型進(jìn)入下一步的實(shí)驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 機(jī)械性縮足反射閾值（MWT） 于篩網(wǎng)上用五塊透明的有機(jī)玻璃板圍成一個(gè)屋形空間，大鼠置于其中安靜20min。使用Von Frey纖維絲垂直刺激大鼠右側(cè)后肢足底中部，從2g開(kāi)始，逐步增加，直至大鼠出現(xiàn)縮足反應(yīng)后，記錄陽(yáng)性（X），陽(yáng)性前最后一次陰性（O）觸針開(kāi)始，序貫測(cè)試三次，得到一系列數(shù)據(jù)，如OXOXOO，然后按照S.R. Chaplan等介紹的vonfrey使用方法[7]，查表得到系數(shù)k值，進(jìn)行公式運(yùn)算，得到50%縮足反射閾值。50%（g） threshold=[10（Xf+kδ）]/10000，Xf=最末次測(cè)試von Frey hair觸針對(duì)應(yīng)的對(duì)數(shù)值，在Vonfrey觸針手柄上有標(biāo)識(shí)；K值可根據(jù)撤足反應(yīng)模式查表得出；δ=0.224。

1.3.2 熱縮腿潛伏期（TWL） 用BME-410C型熱痛刺激儀照射大鼠足底。照射開(kāi)始至大鼠出現(xiàn)抬腿回避時(shí)間為熱縮腿潛伏；切斷時(shí)間為25s，以防止組織損傷。每只動(dòng)物測(cè)定5次，剔除最小值和最大值，取剩余三數(shù)值的平均值，每次間隔3min。MWT和TWL分別于CCI術(shù)前、術(shù)后3d、術(shù)后7d測(cè)試。

1.3.3 標(biāo)本取材、免疫組織化學(xué) 術(shù)后7d測(cè)試完，1%戊巴比妥麻醉后，取材大鼠L5、L6背根神經(jīng)節(jié)，4%多聚甲醛固定12h，蠟塊包埋，組織切片，片厚4μm。使用SP法檢測(cè)背根神經(jīng)節(jié)中的GAP-43和NGF的表達(dá)情況，主要步驟大致如下：（1）常規(guī)脫蠟至水；（2）高壓抗原修復(fù)；（3）3%過(guò)氧化氫室溫孵育；（4）滴加正常山羊血清封閉；（5）滴加兔抗GAP-43單克隆抗體（Abcam，公司，英國(guó)）或兔抗NGF多克隆抗體（Abcam公司，英國(guó)）孵育，4℃過(guò)夜；（6）PBS緩沖液洗，滴加生物素化的羊抗兔IgG；（7）滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液；（8）DAB顯色試劑室溫下顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間；（9）蘇木素輕度復(fù)染，脫水，透明，中性樹(shù)脂封片；（10）陰性對(duì)照用PBS替代一抗行免疫組化染色。應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)ImagePro-Plus6.0對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行分析，在200倍鏡下觀察大體情況，然后在400倍光鏡下觀察并隨機(jī)選取三個(gè)視野，運(yùn)用ImagePro-Plus6.0測(cè)定每張圖片的平均光密度值（IOD/area），即每個(gè)視野陽(yáng)性染色區(qū)域總光密度與陽(yáng)性染色區(qū)域的面積之比，取三個(gè)視野的平均值，應(yīng)用平均光密度值來(lái)表示GAP-43和NGF表達(dá)水平的強(qiáng)弱，半定量分析和比較各組標(biāo)本中GAP-43和NGF的表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用ImagePro-Plus6.0圖像軟件分析免疫組化切片，以平均光密度值來(lái)表示GAP-43、NGF蛋白表達(dá)水平的高低。采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用多樣本均數(shù)單因素方差分析，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況

所有入選大鼠實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡、傷口感染、脫管情況。坐骨神經(jīng)結(jié)扎側(cè)后肢出現(xiàn)不敢負(fù)重、跛行、甩腿、舔足現(xiàn)象，病側(cè)后肢肌肉現(xiàn)萎縮。

2.2 大鼠機(jī)械性縮足反射閾值（MWT）、熱縮腿潛伏期（TWL）變化

2.2.1 機(jī)械性縮足反射閾值（MWT） （1）術(shù)前MWT各組基礎(chǔ)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），C組術(shù)前與術(shù)后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；術(shù)后MWT CCI組、NS組明顯低于C組（P<0.05），CCI組和NS組的MWT值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；（2）術(shù)后3dMWT值，與CCI組比較，Mel4組明顯增加（P<0.05），而Mel1組、Mel2組、Mel3組雖有所增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（3）術(shù)后7d NS組和CCI組的MWT值，與Mel四個(gè)亞組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；（4）術(shù)后3d、7d，Mel四個(gè)亞組隨給藥劑量的成倍增加MWT逐漸延長(zhǎng)，但并未出現(xiàn)成倍增加。見(jiàn)表1。

2.2.2 熱縮腿潛伏期（TWL） （1）術(shù)前TWL各組基礎(chǔ)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），C組術(shù)前與術(shù)后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TWL值術(shù)后CCI組、NS組明顯低于C組（P<0.05），CCI組和NS組的TWL值無(wú)明顯差異（P>0.05），Mel 2組、Mel3組無(wú)明顯差異（P>0.05）；（2）術(shù)后3dTWL值，Mel組與CCI組、NS相比明顯增加（P<0.05）；Mel1組與Mel2組、Mel3組、Mel4組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（3）術(shù)后7d TWL值，與CCI、NS組相比，Mel四個(gè)亞組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；（4）術(shù)后3d、7d，Mel亞組TWL值Mel 4組>Mel2組>Mel3組>Mel1組，隨給藥劑量成倍增加TWL逐漸延長(zhǎng)。見(jiàn)表2。

2.3 GAP-43蛋白表達(dá)變化

C組背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞GAP-43表達(dá)最少，CCI組、NS組與C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Mel組與CCI組、NS組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CCI組與NS組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Mel治療組，GAP-43表達(dá)量Mel1組>Mel3組>Mel2組>Mel4組，隨給藥劑量的成倍增加GAP-43的表達(dá)逐漸減少。Mel2組與Mel3組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3，圖2。

2.4 NGF蛋白表達(dá)變化

C組背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞NGF表達(dá)最少，Mel各亞組與CCI組、NS組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CCI組與NS組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。NGF表達(dá)量Mel1組>Mel3組>Mel2組>Mel4組，隨給藥劑量的成倍增加NGF的表達(dá)逐漸減少。與Mel2組比，Mel3組、Mel4組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表4，圖3。

3 討論

前列腺素（prostaglandins，PGs）是動(dòng)物和人體內(nèi)的一類炎癥、疼痛介質(zhì)，環(huán)氧化酶（COX）是前列腺素合成的限速酶。研究表明，COX與神經(jīng)性疼痛的發(fā)生密切相關(guān)，目前發(fā)現(xiàn)脊髓中的COX主要有三個(gè)亞型：COX-1、COX-2和COX-3 [2-3，8]。抑制環(huán)氧化酶的表達(dá)有助于改善神經(jīng)性疼痛的痛敏狀態(tài)，美洛昔康是選擇性COX-2抑制劑，優(yōu)先作用于COX-2，也作用與COX-1。脊髓中的COX-2可能在神經(jīng)性疼痛的發(fā)生中起作用，而外周的COX-2可能在神經(jīng)性疼痛的維持中起作用[3，9]。全身性使用COX-2抑制劑對(duì)神經(jīng)性疼痛可以起到一定的治療效果，但用藥量大，加重了藥物副作用出現(xiàn)，極大地限制了該類藥物的應(yīng)用。GAP-43蛋白是神經(jīng)發(fā)育和發(fā)育的分子標(biāo)志，NGF是神經(jīng)修復(fù)、再生最具代表性的生長(zhǎng)因子。眾多研究表明二者與神經(jīng)損傷引起的神經(jīng)性疼痛相關(guān)[4，10-13]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)鞘內(nèi)給藥模型、CCI疼痛模型組合，鞘內(nèi)注射選擇性COX-2抑制劑美洛昔康，直接作用于相應(yīng)神經(jīng)元脊髓節(jié)段，用藥量小、針對(duì)性強(qiáng)。避免因全身用藥量大才能達(dá)到效果的難題。使用Vonfrey觸針、BME-410C熱痛刺激儀對(duì)各組大鼠MWT、TWL進(jìn)行測(cè)定觀察，正常對(duì)照組術(shù)前術(shù)后變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CCI組、NS治療組術(shù)后3d內(nèi)MWT、TWL明顯下降，之后至術(shù)后7d內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定；美洛昔康治療組MWT、TWL術(shù)后3d內(nèi)也出現(xiàn)相應(yīng)下降，但幅度相比CCI組、NS組小，隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，用藥后MWT、TWL出現(xiàn)輕微回升，但不能達(dá)到完全緩解癥狀，術(shù)后7d改善效果依次為Mel4組>Mel2組>Mel3組>Mel1組。說(shuō)明鞘內(nèi)注射美洛昔康可以改善大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷的熱痛敏、機(jī)械痛敏癥狀，緩解程度與給藥劑量成一定的正相關(guān)性，再次驗(yàn)證了COX在神經(jīng)性疼痛發(fā)生過(guò)程中的作用以及COX抑制劑在神經(jīng)性疼痛中的治療效果。Mel2組效果雖然與Mel3組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其均值仍>Mel3組，可能提示鞘內(nèi)單次大劑量用藥效果優(yōu)于多次小劑量用藥，這尚須進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)去探討；另一方面，美洛昔康劑量成倍增加并未帶來(lái)治療效果的成倍改善，提示鞘內(nèi)用藥可能存在最大效應(yīng)劑量，即封頂劑量。環(huán)氧化酶作為炎癥介質(zhì)PGs產(chǎn)生過(guò)程中的限速酶，其作用機(jī)制涉及許多受體結(jié)合的限制[14]，組織部位不同所含受體量可能也不同，環(huán)氧化酶抑制劑的作用過(guò)程是否也涉及到受體量的限制，如果可能，是否可以通過(guò)對(duì)損傷處神經(jīng)組織的受體進(jìn)行粗定量，來(lái)作為我們治療神經(jīng)性疼痛局部用藥量參照，那么就可以最大限度的避免全身性用藥量大帶來(lái)的負(fù)面影響，提高藥效，精準(zhǔn)治療。

另外，使用Image Pro Plus6.0專業(yè)圖像處理軟件對(duì)免疫組化切片GAP-43、NGF蛋白表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析比較，正常對(duì)照組兩種蛋白表達(dá)很低，CCI、NS組呈現(xiàn)高表達(dá)，美洛昔康治療組中等表達(dá)；也驗(yàn)證了GAP-43、NGF在成熟組織中正常狀態(tài)下低表達(dá)，而在神經(jīng)損傷后才出現(xiàn)表達(dá)增加這一觀點(diǎn)[10，15]，兩者是參與神經(jīng)修復(fù)關(guān)鍵成分。實(shí)驗(yàn)中可以看到，COX-2抑制劑美洛昔康越大，一定范圍內(nèi)帶來(lái)的治療效果越好，同時(shí)GAP-43、NGF蛋白表達(dá)卻低。說(shuō)明COX-2抑制劑美洛昔康可能參與了抑制了GAP-43、NGF的表達(dá)，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討，目前相關(guān)文獻(xiàn)較少。研究表明[16-19]，GAP-43、NGF作為神經(jīng)修復(fù)的重要因子，在神經(jīng)出芽、攀緣纖維、纖維再分布等過(guò)程中起到關(guān)鍵作用，并參與神經(jīng)性疼痛的發(fā)生，這涉及神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活。尤其是NGF，作為第一個(gè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族成員，可通過(guò)酪氨酸激酶受體TrkA和腫瘤壞死因子受體p75NTR兩種膜受體介導(dǎo)引起一系列的生物效應(yīng)，如誘導(dǎo)神經(jīng)纖維生、參與炎癥因子釋放以及影響離子通道開(kāi)放，敏化外周傷害性感受器，同時(shí)可使非選擇性的配體門控陽(yáng)離子通道閾值降低，導(dǎo)致痛覺(jué)神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏拈撝到档?，從而介?dǎo)疼痛信號(hào)的傳導(dǎo)，導(dǎo)致病理性疼痛[20-23]。因此，把COX-2選擇性抑制劑美洛昔康在本實(shí)驗(yàn)中治療效果與二者蛋白表達(dá)情況進(jìn)行聯(lián)系，我們推測(cè)COX-2抑制劑對(duì)神經(jīng)性疼痛的治療機(jī)制是否涉及神經(jīng)修復(fù)過(guò)程，COX-2抑制劑如何參與到了GAP-43、NGF表達(dá)，是否參與神經(jīng)重塑、星形細(xì)胞活化等過(guò)程，有待以后實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究。目前國(guó)內(nèi)有關(guān)鞘內(nèi)給藥環(huán)氧化酶抑制劑治療疼痛的研究報(bào)道尚少。

綜上所述，可見(jiàn)COX抑制劑美洛昔康對(duì)神經(jīng)性疼痛的治療效果是肯定的，而目前有關(guān)鞘內(nèi)注射COX抑制劑治療神經(jīng)性疼痛的國(guó)內(nèi)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道尚少，結(jié)合GAP-43、NGF指標(biāo)的亦未多見(jiàn)，為此該項(xiàng)研究進(jìn)行了嘗試性探索。由于本實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間為7d，鞘內(nèi)長(zhǎng)期給藥COX抑制劑安全性暫不能下結(jié)論，目前僅限于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，但其作為一種特殊給藥方式治療神經(jīng)疼痛，有著自身的優(yōu)點(diǎn)，臨床應(yīng)用前景廣闊，值得引起學(xué)者們關(guān)注。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Magrinelli F，Zanette G，Tamburin S.Neuropathic pain： diagnosis and treatment[J].Pract Neurol，2013，13（5）：292-307.

[2] Ma W，Quirion R.Does COX2-dependent PGE2 play a role in neuropathic pain？[J].Neurosci Lett，2008，437（3）：165-169.

[3] Ma W，Chabot JG，Vercauteren F，et al.Injured nerve-derived COX2/PGE2 contributes to the maintenance of neuropathic pain in aged rats[J].Neurobiol Aging，2010，31（7）：1227-1237.

[4] Jaken RJ，van Gorp S，Joosten EA，et al.Neuropathy-induced spinal GAP-43 expression is not a main player in the onset of mechanical pain hypersensitivity[J].J Neurotrauma，2011，28（12）：2463-2473.

[5] Strkson RV，Kjrsvik A，Tjlsen A，et al.Lumbar catheterization of the spinal subarachnoid space in the rat[J].J Neurosci Methods，1996，65（2）：167-172.

[6] Bennett GJ，Xie Y-K.A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man[J].Pain，1988，33（1）：87-107.

[7] Chaplan S.R，Bach F.W，Pogrel J.W.Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw[J].J Neurosci Methods，1994，53（1）：55-63.

[8] Takeda K，Sawamura S，Tamai H，et al.Role for cyclooxygenase 2 in the development and maintenance of neuropathic pain and spinal glial activation[J].Anesthesiology，2005，103（4）：837-844.

[9] McKelvey L，Shorten GD，O'Keeffe GW.Nerve growth factor-mediated regulation of pain signalling and proposed new intervention strategies in clinical pain management[J].J Neurochem，2013，124（3）：276-289.

[10] Cobianchi S，de Cruz J，Navarro X.Assessment of sensory thresholds and nociceptive fiber growth after sciatic nerve injury reveals the differential contribution of collateral reinnervation and nerve regeneration to neuropathic pain[J].Exp Neurol，2014，255（5）：1-11.

[11] Barcelona PF，Saragovi HU.A Pro-Nerve Growth Factor （proNGF） and NGF Binding Protein，α2-Macroglobulin，Differentially Regulates p75 and TrkA Receptors and Is Relevant to Neurodegeneration Ex Vivo and In Vivo [J].Mol Cell Biol，2015，35（19）：3396-3408.

[12] St-Jacques B，Ma W.Peripheral prostaglandin E2 prolongs the sensitization of nociceptive dorsal root ganglion neurons possibly by facilitating the synthesis and anterograde axonal trafficking of EP4 receptors [J].Exp Neurol，2014，261（11）：354-366.

[13] Scheytt S，Riediger N.Increased gene expression of growth associated protein-43 in skin of patients with early-stage peripheral neuropathies[J].J Neurol Sci，2015，355（1-2）：131-137.

[14] Malek N，Pajak A，Kolosowska N.The importance of TRPV1-sensitisation factors for the development of neuropathic pain[J].Mol Cell Neurosci，2015，65（3）：1-10.

[15] Grasselli G，Strata P.Structural plasticity of climbing fibers and the growth-associated protein GAP-43 [J].Front Neural Circuits，2013，21（2）：7-25.

[16] Wu F，Miao X，Chen J.Inhibition of GAP-43 by propentofylline in a rat model of neuropathic pain[J].Int J Clin Exp Pathol，2013，6（8）：1516-1522.

[17] Xu P，Rosen KM.Nerve injury induces glial cell line-derived neurotrophic factor （GDNF） expression in Schwann cells through purinergic signaling and the PKC-PKD pathway[J].Glia，2013，61（7）：1029-1040.

[18] Schnegelsberg B，Sun TT.Overexpression of NGF in mouse urothelium leads to neuronal hyperinnervation，pelvic sensitivity，and changes in urinary bladder function[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2010，298（3）：R534-547.

[19] Joshi SK，Mikusa JP.Involvement of the TTX-resistant sodium channel Nav 1.8 in inflammatory and neuropathic，but not post-operative，pain states[J].Pain，2006，123（1-2）：75-82.

[20] Ramsey IS，Delling M，Clapham DE.An introduction to TRP channels[J].Annu Rev Physiol，2006，68（3）：619-647.

[21] Khan N，Smith MT.Neurotrophins and Neuropathic Pain：Role in Pathobiology[J].Molecules，2015，20（6）：10657-10688.

[22] Wu CH，Ho WY，Lee YC.Express：NGF-trkA signaling modulates the analgesic effects of prostatic acid phosphatase in resiniferatoxin-induced neuropathy[J].Mol Pain，2016，15（12）：101-104.

[23] Zhao B，Pan Y，Wang Z.Intrathecal Administration of Tempol Reduces Chronic Constriction Injury-Induced Neuropathic Pain in Rats by Increasing SOD Activity and Inhibiting NGF Expression[J].Cell Mol Neurobiol，2016，36（6）：893-906.

（收稿日期：2017-01-15）