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    耐鉛細(xì)菌分離鑒定及生物學(xué)特性

    2017-05-08 13:30趙娟娟吳榮榮李志濤
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年4期
    關(guān)鍵詞:分離鑒定生物學(xué)特性

    趙娟娟+吳榮榮+李志濤

    摘要:從河北省棗強(qiáng)縣受重金屬污染的土壤中分離得到2株耐鉛細(xì)菌,即ZQq1和DYq2,耐受鉛離子最高濃度分別為2.0、2.5 mmol/L,經(jīng)鑒定為芽孢桿菌屬。2株菌的生物學(xué)特性研究表明,菌株ZQq1和DYq2在pH值4~10之間,鹽度不超過10%時能夠生長。菌株ZQq1最適pH值為8,最適生長溫度42 ℃,最適滲透壓為0%;菌株DYq2最適生長溫度為42 ℃,最適pH值為8,最適滲透壓為1%。

    關(guān)鍵詞:耐鉛細(xì)菌;分離鑒定;生物學(xué)特性;芽孢桿菌

    中圖分類號: S182文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號:1002-1302(2017)04-0215-02

    伴隨著我國工業(yè)程度的加深,重金屬鉛對環(huán)境的破壞程度越來越嚴(yán)重。鉛可以通過汽車尾氣、印染企業(yè)廢棄物的排放、電池和電子產(chǎn)品的丟棄等各種途徑而傳遞到環(huán)境中,進(jìn)入土壤和地下水中[1]。在被鉛污染的水體和土壤中,生長的各種生物通過富集作用,經(jīng)過食物鏈傳遞,最終可以使大量鉛進(jìn)入食物鏈的頂端包括人類。蓄積在人體內(nèi)的鉛能對血液循環(huán)再生系統(tǒng)造成損傷,蓄積到一定的程度時,人就會表現(xiàn)出失眠、噩夢等癥狀,更有甚者會引起智力下降[2]。

    [JP2]研究表明,微生物可降低環(huán)境中重金屬鉛的生物毒性,在用于土壤重金屬污染鉛的治理等方面的研究均取得了一定的成果[3]。從棗強(qiáng)工業(yè)區(qū)采集土樣,通過逐級分離篩選耐鉛細(xì)菌并進(jìn)行形態(tài)觀察和生理生化測定鑒定。通過對所得菌株的生物學(xué)特性研究,可以初步得出菌株對環(huán)境的耐受性及在不同環(huán)境中的生長趨勢,可為以后在用耐鉛細(xì)菌或與其他方法聯(lián)合使用時提供理論依據(jù),以實現(xiàn)高效、快速、低成本治理鉛污染。[JP]

    1材料和方法

    1.1材料

    土樣,來自河北省棗強(qiáng)縣受重金屬污染的土壤。

    1.2設(shè)備

    超凈工作臺(SW-CJ-2FD,上海博迅實業(yè)有限公司)、振蕩培養(yǎng)箱(ZD-85,江蘇金壇市醫(yī)療器械廠)、恒溫生化培養(yǎng)箱(LRH-250,上海一恒科技有限公司)、顯微鏡(BME,徠卡顯微系統(tǒng)上海貿(mào)易有限公司)、數(shù)碼生物顯微鏡(N-800M,上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司)、高壓滅菌鍋(MLS-3750,SANYO)。

    1.3耐鉛細(xì)菌的分離

    取0.1 g的土樣,接入Pb2+濃度0.01 mmol/L的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中,在37 ℃、140 r/min條件下進(jìn)行富集培養(yǎng)。取稀釋100倍后的富集菌懸液100 μL涂布在Pb2+濃度為0.02 mmol/L的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中,每組重復(fù)3次,于37 ℃下進(jìn)行培養(yǎng),觀察菌落生長情況。挑取單菌落在Pb2+濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、1.5 mmol/L的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上逐漸劃線分離,經(jīng)過多次純化,得到單菌株。將篩選出的菌株接入2.0、2.5、3.0 mmol/L不同濃度的固體培養(yǎng)基中,觀察細(xì)菌生長狀況,并淘汰耐鉛能力差的菌株,篩選出耐鉛能力最強(qiáng)的菌株[4]。

    1.4耐鉛細(xì)菌鑒定

    1.4.1對單菌落的大小、形狀等進(jìn)行觀察采用革蘭氏染色法對菌株進(jìn)行染色并觀察。

    1.4.2生理生化特征

    主要包括檸檬酸鹽的利用,丙酸鹽的利用,氧化酶、接觸酶、酪氨酸水解、苯丙氨酸脫氫酶實驗,糖醇發(fā)酵、V.P產(chǎn)生、明膠、液化、需氧性測定等[5]。

    1.4.3生物學(xué)特性試驗

    1.4.3.1耐鉛細(xì)菌生長曲線的測定

    將菌株活化18 h后接種到液體培養(yǎng)基,37 ℃、轉(zhuǎn)速140 r/min條件下振蕩培養(yǎng)。每2 h測定1次細(xì)菌菌懸浮液的D600 nm值。

    1.4.3.2pH值對耐鉛細(xì)菌生長的影響

    將菌株活化18 h后,分別接入pH值為4、6、7、8、9、10的液體培養(yǎng)基中,37 ℃、轉(zhuǎn)速140 r/min條件下振蕩培養(yǎng)24 h。測定不同pH條件下細(xì)菌懸浮液的D600 nm值。

    1.4.3.3鹽度對耐鉛細(xì)菌生長的影響

    將菌株活化18 h后接入0%、1%、2%、4%、5%、7%、10%鹽度的培養(yǎng)液,37 ℃、轉(zhuǎn)速140 r/min條件下振蕩培養(yǎng)24 h。測定不同鹽度條件下細(xì)菌懸浮液的D600 nm值。

    1.4.3.4不同溫度對耐鉛細(xì)菌生長的影響

    將菌株活化 18 h 后接種到液體培養(yǎng)基,在溫度分別為4、25、32、37、42、48、50、60 ℃,轉(zhuǎn)速140 r/min條件下振蕩培養(yǎng)24 h。測定在不同溫度下的細(xì)菌懸浮液的D600 nm值。

    2結(jié)果與分析

    2.1耐鉛細(xì)菌的分離

    通過對樣品的分離純化,篩選出2株耐鉛能力強(qiáng)的耐鉛細(xì)菌。1株耐受鉛離子濃度最高為2.0 mmol/L,命名為ZQq1,另外1株耐受鉛離子最高濃度為2.5 mmol/L,命名為DYq2。

    2.2耐鉛細(xì)菌的鑒定[HT]

    2.2.1耐鉛細(xì)菌菌落特征耐鉛細(xì)菌菌落特征結(jié)果見表1。

    2.2.2耐鉛細(xì)菌生理生化特征

    細(xì)菌的生理生化特征是鑒定細(xì)菌種類的重要指標(biāo)和依據(jù),結(jié)果見表2。

    根據(jù)表1中2株細(xì)菌的菌落形態(tài)特征和表2以及2株耐鉛細(xì)菌的革蘭氏染色情況,依據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》(第8版),將2株菌ZQq1和DYq2鑒定為芽孢桿菌屬。

    2.3耐鉛細(xì)菌的生物學(xué)特性

    2.3.1耐鉛細(xì)菌的生長曲線

    從樣品中篩選出的2株耐鉛細(xì)菌ZQq1和DYq2的生長曲線見圖1。

    由圖1可知,ZQq1在2 h內(nèi)為生長延遲期,18 h附近達(dá)到穩(wěn)定期,在約32 h D600 nm值開始下降,即過了穩(wěn)定期;DYq2在 2 h 內(nèi)為生長延遲期,在22 h附近達(dá)到穩(wěn)定期,在約35 h開始進(jìn)入衰亡期。

    2.3.2pH值對耐鉛細(xì)菌生長的影響

    菌株對pH值的適應(yīng)

    力,在一定程度上也表明了菌株對環(huán)境的適應(yīng)能力。pH值對耐鉛細(xì)菌ZQq1和DYq2生長的影響見圖2。由圖2可知,ZQq1和DYq2均在弱堿性(pH值約為8)條件下生長最好。ZQq1在pH值為4~8的區(qū)間內(nèi),隨著pH的增大ZQq1生長逐漸變好,當(dāng)pH值大于10時ZQq1無法生長。DYq2在pH值為4~8的區(qū)間內(nèi),隨著pH值的增大DYq2生長逐漸變好,當(dāng)pH值小于4時會抑制DYq2菌的生長。

    2.3.3鹽度對耐鉛細(xì)菌生長的影響

    細(xì)菌對不同鹽度的適應(yīng)性差異,可以反映出細(xì)菌對環(huán)境的適應(yīng)能力。一般的培養(yǎng)基中也會添加少量鹽以維持滲透壓。由圖3可知鹽度對2株耐鉛細(xì)菌ZQq1和DYq2生長的影響。隨著鹽度的增加,ZQq1和DYq2生長受抑制程度也在增加。ZQq1最適生長鹽度為1%,DYq2最適生長鹽度為0。ZQq1耐鹽度極限7%,DYq2耐鹽度已達(dá)到接近于10%。

    2.3.4溫度對耐鉛細(xì)菌生長的影響

    不同的溫度下細(xì)菌的生長速率不同,從中也體現(xiàn)出了細(xì)菌對生長環(huán)境的一定適應(yīng)能力。溫度對耐鉛細(xì)菌ZQq1和DYq2的生長影響見圖4。由圖4可知,隨著溫度的增加2株菌的生長速率均提高,約42 ℃為最適生長溫度,ZQq1在4~20 ℃區(qū)間范圍內(nèi),生長速率變化比較平緩,而在20~40 ℃區(qū)間變化較大,隨著溫度升高曲線變得平緩,之后陡然下降,在50 ℃時不能生長,而DYq2在4 ℃到最適合生長溫度之間變化趨勢相同,過了最適生長溫度下降明顯,在60 ℃時生長被抑制。[HT]

    3結(jié)論

    [JP2]從河北省棗強(qiáng)縣受重金屬污染的土壤中分離出2株耐鉛能力較強(qiáng)的耐鉛細(xì)菌,即ZQq1和DYq2。分別從以下進(jìn)行描述:(1)ZQq1的菌落邊緣整齊,表面光滑,乳白色。菌體桿狀,產(chǎn)生芽孢,革蘭氏陽性,具有運(yùn)動性,好氧生長,經(jīng)鑒定為芽孢桿菌屬菌。其在pH值為弱堿性條件下生長最好,在pH值大于10時或小于4時不能生長,最適生長溫度在42 ℃附近,在50 ℃及以上不能生長,其菌株在鹽度為7%及以上完全抑制生長,耐受鉛離子濃度最高2 mmol/L。(2)DYq2的菌落邊緣整齊,表面光滑,乳白色。菌體桿狀,產(chǎn)生芽孢,革蘭氏陽性菌,具有運(yùn)動性,好氧生長,菌體有成鏈趨勢,經(jīng)鑒定為芽孢桿菌屬菌。DYq2在pH值為8時生長最好,其能在42 ℃條件下生長,在 60 ℃ 及以上不能生長,其菌株不耐鹽,在鹽度10%及以上完全抑制生長,耐受鉛離子濃度最高為 2.5 mmol/L。

    參考文獻(xiàn):

    [1]李宏,江瀾. 土壤重金屬污染的微生物修復(fù)研究進(jìn)展[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(7):72-74.

    [2]高文謙,陳玉福. 鉛污染土壤修復(fù)技術(shù)研究進(jìn)展及發(fā)展趨勢[J]. 有色金屬,2011,63(1):131-136.

    [3]駱永明. 污染土壤修復(fù)技術(shù)研究現(xiàn)狀與趨勢[J]. 化學(xué)進(jìn)展,2009(2):558-565.

    [4]陳美標(biāo),郭建華,姚青,等. 大寶山礦區(qū)耐Cd2+細(xì)菌的分離鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 微生物學(xué)通報,2012,39(12):1720-1733.

    [5]江春玉,盛下放,何琳燕,等. 1株鉛鎘抗性菌株WS34的生物學(xué)特性及其對植物修復(fù)鉛鎘污染土壤的強(qiáng)化作用[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2008,28(10):1961-1968.

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