紅細(xì)胞懸液制備洗滌紅細(xì)胞的效果分析

鮑恩利

（沈陽(yáng)中心血站，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

紅細(xì)胞懸液制備洗滌紅細(xì)胞的效果分析

鮑恩利

（沈陽(yáng)中心血站，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

目的確保制備洗滌紅細(xì)胞符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。方法采用泰爾茂無(wú)菌接口機(jī)連接洗滌袋的方式在無(wú)菌條件下將保存期內(nèi)的紅細(xì)胞懸液用大量生理鹽水液洗滌，去除絕大部分非紅細(xì)胞部分，并將紅細(xì)胞懸浮在MAP液中所制備而成。結(jié)果經(jīng)過(guò)洗滌的紅細(xì)胞去除了80%以上的白細(xì)胞和98%的血漿蛋白，也去除了大量的紅細(xì)胞碎屑、代謝產(chǎn)物、抗凝劑、乳酸鹽、鉀、氨和微聚物，同時(shí)也損失了大約20%以上的紅細(xì)胞。結(jié)論使用無(wú)菌結(jié)合技術(shù)進(jìn)行制備的洗滌紅細(xì)胞，連接口完整且無(wú)滲漏，沒(méi)有出現(xiàn)氣泡等情況，且保存期的效果與采用密閉系統(tǒng)所制備的血液成分的保存期較為一致。

紅細(xì)胞懸液；洗滌紅細(xì)胞；無(wú)菌結(jié)合

洗滌紅細(xì)胞為采用特殊的方法，對(duì)保存期內(nèi)全血、懸浮紅細(xì)胞進(jìn)行清洗，將血漿成分及部分的非紅細(xì)胞成分做清除，并將紅細(xì)胞懸浮于氯化鈉，制成紅細(xì)胞成分血[1]，其是將紅細(xì)胞懸浮于氯化鈉中。洗滌紅細(xì)胞可以對(duì)需要輸血且合并有過(guò)敏性疾病、自身免疫性溶血性貧血、肝腎功能障礙、高血鉀等患者中，具有特定的用途[2]。目前臨床進(jìn)行洗滌紅細(xì)胞制備的方法是在紅細(xì)胞洗滌完成后，將氯化鈉注射液進(jìn)行添加使之懸浮，一般保存時(shí)間僅為24 h，且由于此方法的保存時(shí)間短，血站一般需要根據(jù)醫(yī)院的預(yù)約情況才能進(jìn)行制備，容易引起輸血治療時(shí)間被延誤，因此受到了一定的限制。在無(wú)菌的閉合環(huán)境中制備洗滌紅細(xì)胞，并以紅細(xì)胞保存液混懸，其保存時(shí)間能夠與常規(guī)紅細(xì)胞懸濁液相同[3]，這為紅細(xì)胞保存液（MAP）混懸洗滌紅細(xì)胞提供了積極有效的依據(jù)。本文針對(duì)MAP混懸洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行了相關(guān)研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

表2 實(shí)驗(yàn)組洗滌紅細(xì)胞與對(duì)照組紅細(xì)胞pH、K+、游離血紅蛋白的比較（n=32，

表2 實(shí)驗(yàn)組洗滌紅細(xì)胞與對(duì)照組紅細(xì)胞pH、K+、游離血紅蛋白的比較（n=32，

pH 血漿上清K+(mol/L) 游離血紅蛋白(mg/L)時(shí)間(d) 實(shí)驗(yàn)組 對(duì)照組 P 實(shí)驗(yàn)組 對(duì)照組 P 實(shí)驗(yàn)組 對(duì)照組 P0 7.13±0.11 7.12±0.13 ＞0.05 2.90±0.33 3.20±0.44 ＜0.01 80.20±5.11 53.42±4.05 ＜0.01 5 7.08±0.08 7.04±0.12 ＞0.05 9.11±0.13 9.23±0.32 ＞0.05 131.43±10.10 91.28±5.23 ＜0.01 10 7.00±0.14 6.90±0.10 ＜0.05 13.31±0.53 15.64±0.34 ＜0.01 212.50±12.27 197.32±11.63 ＜0.01 15 7.13±0.11 6.81±0.08 ＞0.05 16.40±0.82 19.00±0.76 ＜0.01 246.41±14.00 231.25±13.70 ＜0.01 20 6.85±0.11 6.72±0.03 ＜0.01 18.63±1.13 21.12±1.14 ＜0.01 354.69±15.32 314.23±14.12 ＜0.01 25 6.77±0.06 6.69±0.05 ＜0.05 22.71±1.23 23.60±1.36 ＜0.01 413.82±17.61 383.53±16.87 ＜0.01 30 6.72±0.03 6.66±0.04 ＜0.01 25.70±1.57 25.70±1.35 ＜0.01 473.25±18.36 423.16±22.02 ＜0.01 35 6.62±0.01 6.61±0.07 ＞0.05 28.51±1.30 28.51±1.31 ＞0.05 513.33±20.07 493.27±20.45 ＜0.01

1.1 日立CR-7大容量低溫離心機(jī)、泰爾茂無(wú)菌結(jié)合機(jī)、SE-250熱合機(jī)、分漿夾、山東威高生產(chǎn)的全密閉三聯(lián)鹽水洗滌袋、自動(dòng)配平儀、電子采血秤等。

1.2 采用本站制備有效期內(nèi)的紅細(xì)胞懸液2 U。

1.3 采用無(wú)菌結(jié)合術(shù)，用無(wú)菌結(jié)合機(jī)連接紅細(xì)胞懸液和全密閉三聯(lián)鹽水洗滌袋。

1.4 制備洗滌紅細(xì)胞的離心條件見表1。見表1，離心4次，每次加鹽水100 mL/U進(jìn)行洗滌，最后加入適量MAP液，制備成洗滌紅細(xì)胞。放入（4±2） ℃儲(chǔ)血冰箱存放。 對(duì)照組的紅細(xì)胞采用常規(guī)制備方法，溫度為（4±2） ℃，并以紅細(xì)胞懸液作為對(duì)比，注意確保其在保質(zhì)期內(nèi)。

表1 制備洗滌紅細(xì)胞的離心條件

1.5 pH值檢驗(yàn)方法：使用Beckman Q40酸度計(jì)對(duì)pH值進(jìn)行測(cè)定。

1.6 血漿上清K+檢驗(yàn)方法：使用血液自動(dòng)化分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.7 紅細(xì)胞ATP的檢驗(yàn)方法：采用上海分析儀（VIS-723）提取上清液[4]，其中含有ATP1u，根據(jù)ATP檢驗(yàn)試劑盒方法對(duì)ATP標(biāo)準(zhǔn)液及發(fā)光素酶系統(tǒng)基于測(cè)定，隨后再取0.2 mL的ATP標(biāo)準(zhǔn)液不同濃度加入到發(fā)光反應(yīng)杯內(nèi)，劑量為0.2 mL，置于分光光度儀的反應(yīng)暗室內(nèi)，注入熒光酶液，劑量為0.8 mL，并準(zhǔn)確記錄發(fā)光強(qiáng)度，隨后將U樣與標(biāo)準(zhǔn)品所得出的發(fā)光數(shù)值，計(jì)算出ATP的濃度。

1.8 測(cè)定游離血紅蛋白方法[5]：采用CPD全血離心取樣本的上層血清，劑量為0.02 mL，隨后再取HB標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)用液，劑量為0.02 mL，加入到2%鄰-甲苯胺溶液1% H2O溶液，劑量為0.1 mL，放置10 min后加入乙酸溶液（濃度為2%，劑量為10 mL），混合于435 nm，鼻塞。計(jì)算游離血紅蛋白的含量。進(jìn)行洗滌紅細(xì)胞制品、紅細(xì)胞懸液的對(duì)照檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 理化指標(biāo)及血紅蛋白游離率結(jié)果研究：觀察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血液的pH值、血漿上清K+濃度及游離血紅蛋白等指標(biāo)。結(jié)果見表2。

3 討 論

本血站實(shí)驗(yàn)采用泰爾茂無(wú)菌結(jié)合機(jī)連接紅細(xì)胞懸液和鹽水洗滌袋制備洗滌紅細(xì)胞只是制備工藝的考慮，防止血袋管口交叉感染的機(jī)會(huì)和臨床安全用血。使用無(wú)菌結(jié)合技術(shù)進(jìn)行制備的洗滌紅細(xì)胞，連接口完整且無(wú)滲漏，沒(méi)有出現(xiàn)氣泡等情況，且保存期的效果與采用密閉系統(tǒng)所制備的血液成分的保存期較為一致[6]。

[1] 葉漢泉,劉志泉,梁麗雯.紅細(xì)胞保存液混懸洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量控制動(dòng)態(tài)觀察[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版),2013,10(24):85-86.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程[S].2012

[3] 戴慶昭.懸浮紅細(xì)胞質(zhì)量控制研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2009, 16(1):34-35.

[4] 李小奎,孟憲均,宋旭華,等.用生物發(fā)光檢測(cè)RBC-ATP含量的報(bào)告[J].中華輸血雜志,1990,11(8):423.

[5] 葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[S].南京:東南大學(xué)出版社,1997:61-62.

[6] Food and Drug Adminisation Memorandum:use of an FDA cleared or approved sterile (STCD) in blood bank practice July 29,1994 Rockville,MD:CBER office ofcommunicn-tion Training, and Manufacvrer S Assistance,1994.

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1671-8194（2017）08-0015-02